Antibiograma. Resistência
de Cocos e Bacilos
• QUESTÕES PARA AS PROVAS;
• CONTEÚDO DAS AULAS;
• HORÁRIO DE ATENDIMENTO ON-LINE;
blog do professor:
http://chicoteixeira.wordpress.com
Introdução
Na maioria dos casos é adequado solicitar um
teste de difusão em disco ou com microdiluição
em caldo de cultura para orientar a terapia
clínica;
Introdução
Uma alternativa mais recente é o teste com
difusão de gradiente (ETEST);
Introdução
Vantagens dos testes de diluição:
• Fornecem mais dados quantitativos;
• Podem ser aplicados a uma maior faixa de
mogs. isolados do que o teste de difusão;
Limitações:
• Existe potencial para interpretação errônea;
• O teste de difusão em disco tem registro clínico
longo e bem-sucedido;
Introdução
A escolha do método a ser utilizado dependerá
das necessidades e dos recursos locais;
Na avaliação dos testes de sensibilid., a maioria
dos investigadores utiliza a seguinte convenção:
• Erro muito importante: classificação de
um microrganismo isolado resistente como
suscetível;
• Erro importante: classificação de um
microrganismo isolado suscetível como
resistente;
Seleção dos Agentes
Antimicrobianos
cadafinal
comunidade
devem
ser conhecidos
A Em
escolha
dos agentes
antimicrobianos
para
levados emdeve
consideração;
o eprontuário
ser decidida junto com a
equipe médica;
Os padrões de uso do agente
antimicrobiano
Padrões da resistência
bacteriana
Importância da
padronização
A principal melhora na orientação laboratorial
dos antibiogramas nas últimas décadas provém
do desenvolvimento de procedimentos padrões;
É importante aderir aos protocolos para obter
resultados passíveis de reprodução;
Fatores importantes do Antibiograma:
• Meio de crescimento: O caldo de cultura e o
ágar Mueller-Hinton foram escolhidos para as
bactérias aeróbicas e anaeróbicas facultativas;
Fatores importantes
do antibiograma
• pH: Deve estar entre 7,2 e 7,4 a temperatura
ambiente. O pH do meio em caldo de cultura
pode ser testado diretamente com um eletrodo
de pH, e o meio do ágar pode ser testado pela
maceração de ágar suficiente, de modo que a
ponta do eletrodo possa ser imersa;
• Soro: O grau de ligação dos antibióticos às
proteínas apresenta grande variação. Podem ser
obtidos valores diferentes se for adicionado soro
ao meio;
Fatores importantes
do antibiograma
• Concentração [ ] de cátions: A concentração
de cátions divalentes Ca2+ e Mg2+ afeta os
resultados da sensibilidade quando são
testadas determinadas combinações de
espécies bacterianas e antibióticos;
Pseudomonas aeruginosa
Reação cruzada
Fatores importantes
do antibiograma
• Concentração [ ] de cátions:
O
caldo de
Mueller-Hinton
]s
Quando
os cultura
microrganismos
estãoapresenta
crescendo[ em
muito
baixas deem
cátions
divalentes
e deve ser
meio deficiente
cátions,
a permeabilidade
da
suplementado
concentrações
fisiológicas;
parede celular para
aos antibióticos
aminoglicosídeos
e a outros compostos aumenta;
Alguns lotes do ágar Mueller-Hinton podem na
Assim,
microrganismos
são mais
sensíveis à
verdadeos
apresentar
concentração
anormalmente
ação
dos aminoglicosídios,
produzindo
alta desses
cátions, de modo
que [ são]
inibitória
mínima
falsamente
baixa ou grandes
produzidas
pequenas
zonas inibidoras
quando
zonas
inibidoras;
P. aeruginosa
é testado com aminoglicosídeos;
Fatores importantes
do antibiograma
• Atmosfera: O ágar ou caldo de cultura é
incubado em uma incubadora em ar ambiente.
Uma incubadora com CO2 não deve ser utilizada
para testes de rotina. O ácido carbônico formado
na superfície do ágar ou no caldo pode causar
redução do pH;
Nos laboratórios com pequena carga de trabalho
e onde existe apenas incubadora de CO2, é
aceitável colocar as placas ou tubos de
sensibilidade em uma jarra selada;
Fatores importantes
do antibiograma
• Temperatura: As placas e os tubos devem
ser incubados rotineiramente a 35ºC.
Quando em temperaturas mais altas, a
detecção de estafilococos resistentes a
oxacilina fica comprometida. Se houver
suspeita de resistência contra oxacilina e
não houver manifestações em 35ºC, as
placas ou tubos podem ser incubados a
30ºC;
Fatores importantes
do antibiograma
• Inóculo: É, em geral, preparado a partir do
caldo de cultura que foi incubado por 4 a 6
horas, quando o crescimento é considerado
em fase logarítmica;
Devem ser coletadas amostras de várias
colônias de aspecto semelhante para diminuir a
variação na população bacteriana;
A densidade da suspensão é ajustada para
aproximadamente 108 CFU/ml;
Escala de McFarland
É preparado adicionando-se 0,5 ml de 0,048M
BaCl2 (1,175% p/v BaCl2•H2O) a 99,5 ml de 0,36N
H2SO4. Alíquotas de 4 a 6 ml do padrão de
turbidez do BaSO4 são distribuídas em tubos de
mesmo tamanho, fechado com tampa de rosca,
firmemente selados e armazenados, no escuro, a
temperatura ambiente;
Comumente o grau de turbidez no caldo de
cultura é comparado com o padrão, visualizando
os dois contra um fundo branco no qual foram
desenhadas linhas pretas;
Fatores importantes
do antibiograma
• Agentes Antimicrobianos: Discos impregnados
com antimicrobianos devem ser armazenados a
-20ºC ou menos em condição anidrosa. Os
fabricantes de discos precisam controlar
rigorosamente a concentração dos agentes
antimicrobianos nos discos para 60-120% do
teor declarado; a variação existente é em geral
consideravelmente menor;
Fatores importantes
do antibiograma
• Agentes Antimicrobianos: Um pequeno
estoque pode ser mantido em temperaturas
de refrigerador em um dessecador;
Os discos sempre devem ser aquecidos até à
temperatura ambiente antes de se abrir o
dessecador, de modo que a condensação da
umidade do ar não reidrate parcialmente os
discos.;
Seleção dos agentes
antimicrobianos a serem
incluídos no relato
Apenas os agentes antimicrobianos adequados
para a infecção devem ser incluídos no relato;
Os fármacos que são ativos apenas no trato
urinário não devem ser incluídos no relato se o
microrganismo isolado for oriundo de outro local
e os agentes que não penetram em um local,
como cefazolina ou cefalotina nas meninges, não
devem ser incluídos no laudo;
Seleção dos agentes
antimicrobianos a serem
incluídos no relato
O uso de cloranfenicol para infecções do trato
urinário é inadequado porque esse agente não é
excretado na urina;
Os microbiologistas não devem encorajar o
uso inadequado incluindo os resultados do
antibiograma no laudo;
Seleção dos agentes
antimicrobianos a serem
incluídos no relato
Da mesma forma, Streptococcus pneumoniae
isolados do líquido cefalorraquidiano devem ser
testados apenas contra um dos seguintes
antibióticos:
Penicilina, cefotaxima, ceftriaxona, meropenem e
vancomicina;
Infelizmente,
A
maioria das
existem
decisões
pouquíssimas
deve ser tomada
dessas
junto com os
proibições
absolutas;
médicos e farmacêuticos;
Teste de sensibilidade
em Macrodiluição em
Caldo de Cultura
Esteve entre os primeiros testes a serem
desenvolvidos e ainda serve como método
de referência;
Teste de sensibilidade
por Diluição em Ágar
É o segundo método de referência, foi
adaptado com sucesso para uso rotineiro
nos grandes laboratórios avaliando apenas
as [ ]s escolhidas dos antimicrobianos;
Teste de sensibilidade
por Difusão em Disco
Assim que o disco impregnado com agente
antimicrobiano entra em contato com a
superfície úmida do ágar, a água é absorvida
pelo filtro de papel e o agente antimicrobiano se
difunde para o meio circulante;
Interpretação dos
Resultados
Muito
Obrigado!!!