TESTE DE
SUSCEPTIBILIDADE AOS
ANTIMICROBIANOS (TSA) OU
ANTIBIOGRAMA
Thiago C. Nascimento
Conceito: Teste para verificar o comportamento dos
microrganismos (sensibilidade ou resistência) “in vitro”,
frente a diversos antimicrobianos, para a escolha do
antimicrobiano ideal.
Indicações:
• Para microrganismos isolados e identificados como
agentes causadores de infecção;
• Quando o microrganismo causador da infecção
apresenta, estatisticamente, grande variabilidade no
espectro de resistência ou tendência à mesma.
Ex: Staphylococcus aureus, Pseudomonas sp.
Dispensado: Para microrganismos cuja sensibilidade não
apresenta variação ao longo do tempo.
Ex: Neisseria meningitidis, Streptococcus pyogenes
(sensíveis à penicilina G)
Os resultados servem de base para:
1. Nortear a escolha do agente antimicrobiano
mais adequado;
2. Predizer a chance de sucesso de um
esquema terapêutico.
O diagnóstico laboratorial das doenças infecciosas começa com a
indicação clínica adequada do exame microbiológico, o que requer
conhecimento da epidemiologia e da fisiopatologia do processo
infeccioso
Cultura + Antibiograma
Rede Brasileira de
Monitoramento da
Resistência
Microbiana
(ANVISA)
Laboratórios
brasileiros
CLSI
Tipos de Teste:
1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória
mínima (CIM).
A. Diluição: em tubo ou em placa;
B. Teste E (Teste epsilométrico).
1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (KirbyBauer)
16 a 24h, 35 ºC
Suspensão bacteriana
(0,5 McFarland)
Disposi ção dos discos
impregnados com
antimicrobianos
Ágar Mueller -Hinton
Princípio: medida do halo de inibição (mm)
1. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (KirbyBauer)
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória
mínima (CIM).
CIM
A. Diluição: em tubo;
1
2
3
4 5
6
7
8
9 10 11 12
Inoculo
padronizado da
amostra teste
Aerobiose
~24 H - 37ºC
Caldo + droga em concentrações crescentes
0,0625µg/mL -1024,0 µg/mL
Caldo
Controle
Ágar
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória
mínima (CIM).
A. Diluição: em placa;
Controle
Concentração
Inibitória Mínima
Aerobiose
24h - 35ºC
Suspensão
bacteriana (0,5
McFarland)
Replicador de Steers
Ágar + Droga
0,0 µg/mL
0,0625 µg/mL
0,125µg/mL
?
0,25µg/mL
0,5µg/mL
2,0µg/mL
4,0µg/mL
1,0µg/mL
8,0µg/mL
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória
mínima (CIM).
B. Teste E (Teste epsilométrico).
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória
mínima (CIM).
B. Teste E (Teste epsilométrico).
Vários estudos demonstram que a CIM determinada pelo Etest® apresenta
concordância com os métodos de diluição em ágar ou tubo, para dierentes
antimicrobianos, em geral, com uma variação permitida de +/- 1 diluição.
2. Quantitativo: determinação da concentração inibitória
mínima (CIM).
B. Teste E (Teste epsilométrico).
DEMONSTRAÇÃO
E
INTERPRETAÇÃO
2. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (KirbyBauer)
Halo de
leitura
em mm
Leitura
• Ausência de halo: resistência
• Presença de halo: sensibilidade ou resistência
2. Qualitativo: método de difusão de discos em ágar (KirbyBauer)
Medir os halos de cada
placa distribuída
Anotar os resultados
Consultar o CLSI
Resultado
• Sensível
• Resistente
• Resistência Intermediária
Correlação entre tamanho do halo e CIM
Quando os halos de inibição são correlacionados aos valores
logarítmicos da CIM, pela análise de regressão linear, encontra-se
uma relação linear consistente demonstrando que o halo de inibição
é inversamente proporcional à CIM daquele antimicrobiano
Do ponto de vista clínico, o que significa dizer que uma
bactéria é sensível, resistente, ou apresenta resistência
intermediária?
• Resistente: significa que a bactéria não é inibida pelas
concentrações de antimicrobiano alcançadas pelas doses
habituais e há grande chance de falha terapêutica; a bactéria
cresce na concentração sérica máxima do antimcrobiano no
paciente;
• Resistência intermediária: isolados cujas CIMs são próximas
à concentração sérica máxima obtida por aquele
antimicrobiano;
• Sensível: a categoria sensível implica que a infecção causada
pela bactéria isolada pode ser adequadamente tratada com a
dosagem recomendada para aquele tipo de infecção e para
aquela espécie bacteriana, portanto o antimicrobiano pode ser
utilizado para o tratamento;
Fatores que influenciam o resultado do TSA:
1. Composição química do meio de cultura: ágar Muller-Hinton, com 4 a 6
mm de espessura ;
2. Densidade do inóculo: 108 células/mL;
3. Temperatura: 35ºC a 37ºC;
4. Concentração dos antimicrobianos nos discos;
5. Validade e conservação dos discos;
6. Ação e estabilidade da droga:
6.1 . Algumas drogas podem sofrer hidrólise nas primeiras horas de incubação
6.2 . Velocidade de crescimento maior que velocidade de difusão da droga
7. Tempo de incubação : 18 a 24h
Os resultados dos TSA devem ser muito bem
interpretados pela equipe do laboratório de microbiologia,
antes que o relatório final seja emitido ao médico.
Fatores relacionados à ação dos antimicrobianos:
Parâmetros da farmacocinética e farmacodinâmica
relacionados com a evolução clínica:
A partir dos estudos farmacodinâmicos os antimicrobianos podem ser classificados em:
• tempo-dependentes: ação regida pelo tempo de exposição das bactérias às suas
concentrações séricas e teciduais;
• concentração-dependentes: aqueles que exibem propriedades de destruição de
bactérias em função da concentração.
Antimicrobianos
de espectro estreito
x
Antimicrobianos
de amplo espectro
Antimicrobianos de escolha
x
Antimicrobianos de reserva
Triste Realidade
Quais são os principais problemas relacionados à qualidade do
uso clínico dos antimicrobianos?
1. diversos estudos têm demonstrado que aproximadamente 50% das
prescrições médicas de antimicrobianos são feitas de forma
inadequada;
2. o uso excessivo destes fármacos não apenas está associado à
emergência e seleção de linhagens bacterianas resistentes, mas
também a eventos adversos, elevação dos custos e da morbimortalidade.
O uso racional de antimicrobianos é uma das metas
definidas pela Organização Mundial da Saúde (OMS)
para o século XXI.
Obrigado