Identificação de
Enterobactérias.
Dra. Tânia Mara Ibelli Vaz
Pesquisador Científico
Instituto Adolfo Lutz - São Paulo
Família Enterobacteriaceae
Patogenia
Isolamento e identificação de enterobactérias
Aspecto das colônias
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Reação de VM e VP
Escherichia coli
Salmonella
Shigella
Klebsiella
Enterobacter
Serratia
Citrobacter
Proteus - Providencia - Morganella
Fluxograma BGN OXIDASE
Considerações finais
índice
Família Enterobacteriaceae
Introdução
Definição
•
•
•
•
•
Bacilos Gram negativos
AAF / Fermentadores da glicose
Oxidase negativa e catalase +
Móveis / imóveis
Cresce em meios comuns
Habitat
Plantas, solo, água, intestino do homem e animais
Família Enterobacteriaceae
Introdução
Nomenclatura e Classificação
•
•
Métodos Fenotípicos
Moleculares  novas espécies
reclassificação
Classificação
• Gêneros ( 42)
• Espécies ( centenas )
• biotipos e sorotipos
 Complexos
Identificação de Enterobactérias
Classificação - patogenia
- Enteropatógenos
- Infecções nosocomiais - espécies importantes
- Outras espécies - raras em material clínico
isoladas em : meio ambiente
plantas
animais
Família Enterobacteriaceae
Patogenia
Enterobactérias - principal componente da flora intestinal normal
do homem.
• Infecções -intestinal, feridas e trato urinário
• Abcessos, pneumonia, meningites
• Infecções nosocomiais
Família Enterobacteriaceae
Patogenia
Infecções intestinais
Características
•
normalmente na comunidade
•
DTA – doença transmitida por alimento
•
surtos / casos isolados
•
hospitalar
Patógenos entéricos clássicos
Salmonella spp
Shigella spp
E.coli - categorias diarreiogênicas
Yersinia enterocolitica
Família Enterobacteriaceae
Patogenia
Infecções extra-intestinais
Comunidade
Hospitalar
• Qualquer espécie
• Fatores de risco:
Paciente
Veículos de transmissão
Alimentos contaminados
Espécies mais comuns
Escherichia coli
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella oxytoca
Proteus mirabilis
Enterobacter spp
Salmonella ( sorotipos)
Serratia marcescens
Citrobacter spp
Providencia spp
Família Enterobacteriaceae
ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS
Crescem bem nos meios comuns e meios seletivos para BGN
( 18 a 24h  1 mm de diâmetro).
1- Exame macroscópico da cultura:
• Aspecto morfológico das colônias ( AS, MC,SS, TSA )
• Tempo de crescimento e tamanho da colônia
• Observar pureza da cultura
2-Exame microscópico da cultura:
• Gram: tamanho, morfologia, reação tintorial, etc
Aspecto das colônias
Agar MacConkey
Aspecto das colônias
Salmonella.
E.coli
E.cloacae
Salmonella.
E. coli
E. cloacae
Aspecto das colônias
Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica ( cultura pura)
Meios presuntivos
• IAL (Pessoa e Silva)
• EPM-MILI
• TSI
IAL
Família Enterobacteriaceae
Identificação Bioquímica
Série completa - 47 testes
Provas complementares:
Fermentação de açúcares
LDC- ODC - ADH
CiSi
Pesquisa de enzimas
DNase
gelatinase,lipase, NAR, ONPGase
Gram
Oxidase
VM e VP
Família Enterobacteriaceae
Reação de VM e VP
Enterobactérias VP+
Enterobactérias VP -
•
•
•
Maioria das espécies dos outros Gêneros
• Salmonella
• Shigella
• E.coli
• Proteus
• Morganella
• Providencia
• Citrobacter
• Kluyvera
Enterobacter
Klebsiella
Serratia
Escherichia coli
Diagnóstico Diferencial
lac+
CISI -
K.oxytoca ( LDC+/ motil.-CiSi+)
Citrato de Simmons
Prova
Citrobacter amalonaticus e C. diversus
( LDC-/motil.+CiSi+)
Marcadores Epidemiológicos
Infec. Intestinais
Sorotipagem
Fatores de virulência
Infec. Extra-intestinais
Sorotipagem
Met. moleculares
Glicose+/Gás+/sacarose+/urease*H2STDAindol+
LDC+/Motilidade+/- Aeromonas
Salmonella
Diagnóstico diferencial
Citrobacter spp ( H2S + )
Proteus
Prova de
Fermentação
glicerol
Marcadores Sorotipagem
Fagotipagem
Moleculares
Glicose+/gás v
sac H2S +
ureaseTDA indol LDC +
Mov. +
CiSi+
Lac -
Shigella
Diagnóstico diferencial
E.coli ( LDC - / Mov.-)
Lactose
Ci Christ.
Acetato Trab.
Citrato
Sódio
Marcadores Sorotipagem
Met.moleculares
Glic.+ /gás sac urease TDA H2S
indol v
LDC Mov. -
CiSi Lac -
Klebsiella
Diagnóstico diferencial
Enterobacter ( LDC+ / Mov.-)
ADH
ODC
Fermentação
Marcadores Sorotipagem
Met. moleculares
Lac+
CiSi +
Enterobacter
Diagnóstico diferencial
Enterobacter
Klebsiella
Serratia
LDC,ODC,ADH
Motilidade
DNase
Fermentação
E.cloacae
Marcadores Sorotipagem
Met. moleculares
Lac+
CiSi+
Serratia
Espécies de Serratia
LDC,ODC,
malonato,
fermentação , pigmento
Marcadores: Sorotipagem
Met.moleculares
Glic.+ / gássac. urease H2S TDA indol LDC +
Mov. +
DNase +
Gelatinase +
Lipase +
CiSi +
Lac -
Citrobacter
Espécies de Citrobacter
ODC, indol, H2S malonato
fermentação
Glic.+ / gássac =V
CiSi +
urease Lac +
H2S = V
TDA indol = V
LDC Mov. +
Proteus - Providencia - Morganella
Diagnóstico diferencial
Proteus
Providencia
Espécies H2S +
BGN NF
Swarming
TDA, H2S, ODC,
gelatinase,
fermentação
Glic.+/ gás sac. urease +
TDA +
H2S = V
indol = V
LDC Mov. +
CiSi +
Lac +
Fluxograma
BGN Oxidase
Lac +
Lac -
Ágar Mac Conkey
IAL
IAL
E.coli
Enterobacter
Klebsiella
Kluyvera
Citrobacter
Shigella
Salmonella
Serratia
Proteus
Providencia
Morganella
+
Enterobacter
Klebsiella
Kluyvera
Citrobacter
VP +
Salmonella
Serratia
Proteus/Prov.(V)
+
Cit. Simmons
Cit. Simmons
-
E.coli
Shigella
Morganella
-
IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS
Enterobactérias em microbiologia clínica  Poucas espécies
Espécies incomuns , novas espécies, espécies atípicas  podem ocorrer
(isoladas de material clínico, ambiente, plantas e animais)
PROBABILIDADES
•
•
•
•
•
•
Tratar-se de uma espécie rara
Cepa contaminada
Uma ou mais testes não adequados na identificação ( turvação)
Manipulação errada ( concentração do inóculo)
Composição e quantidade do meio ( substrato presente)
Controle de Q
IDENTIFICAÇÃO DE ENTEROBACTÉRIAS
O que fazer?
Checar tudo:
• Pureza da cultura
• Repetir todos os testes no mesmo sistema ou utilizando
meios anteriormente utilizados
•Repetir todos os testes em outro sistema de
utilizar partidas diferentes do meio.
•Encaminhar para laboratórios de referência
os
identificação ou
Considerações finais
Importância da caracterização das espécies
• Evitar falsos surtos
• Não identificação do surto
• Atenção para cepas atípicas
• Atenção para espécies raras
• Atenção para pureza das culturas