UNIVERSIDAD NACIONAL DE MOQUEGUA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA
AMBIENTAL
MAQUETA: SECUENCIADOR AUTOMÁTICO DE ADN – MÉTODO SANGER
CURSO: BIOTECNOLOGIA
DOCENTE: Dr. HEBERT HERNAN SOTO GONZALES
ESTUDIANTE: ELVIS JOEL ZEGARRA PUMA
CICLO: VII
INTRODUCCION
• La secuenciación de ADN es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas
cuya finalidad es la determinación del orden de los nucleótidos en un
fragmento de esta molécula, es analizar la composición de un fragmento de
ADN para saber qué genes tiene y qué producen esos genes.
• La secuencia de ADN constituye la información genética heredable que
forman la base de los programas de desarrollo de los seres vivos .
• Los primeros intentos de secuenciar el material genético datan de mediados
del siglo XX.
PROCEDIMIENTO
• MATERIALES:
• Cartulina negra y
• Tempera negra,
•
•
•
•
•
Cartulina cartón
• Pincel
Silicona
• Cuerda
Cartones
• Tijeras
Hojas bond
• Tapas de botella
celeste
Cajas de te
blanca y roja
SECUENCIADOR DE SANGER
GENETIC ANALYZER 3500.
MATERIALES:
Pasos
 Primeramente, para realizar el procedimiento del método Sanger se cortó un trozo de una caja de cartón y se le pego
cartulina negra encima para tenerlo como base.
 Para el procedimiento se imprimieron algunas imágenes y se les coloco sobre trozos de cartón.
 Para el láser y el detector se empleó 2 cajas de cartón las cuales se forraron con cartulina cartón y se les coloco a
cada uno una tapa de botella pintada de negro. Para el tubo capilar se enrollo un cartón de 24 cm de altura al cual se
lo forro con una hoja bond y se le marco con colores. Para el láser se pintó una cuerda de color rojo.
 Para hacer un modelo del secuenciador de ADN se emplearon 2 cajas grandes de te que se cortaron y forraron con
cartulina cartón y para el ordenador se empleó un trozo de cartón de 32 cm x 20 cm del cual se le pegaron unas
imágenes del teclado y de la pantalla.
 Una vez tenido todo lo anterior se lo unió en la base.
 Con trozos de cajas de cartón se cortaron para formar una maqueta secuenciador automático de ADN con las
características de tamaño requerido al cual se lo forro con cartulina cartón.
MAQUETA
FUNDAMENTO TEORICO
• Método enzimático de Sanger
Para este método resulta esencial disponer de un ADN de cadena simple y un iniciador,
cebador o "primer" complementario de una región del ADN molde anterior a donde va a
iniciarse la secuencia. Este cebador se utiliza como sustrato de la enzima ADN polimerasa
I que va a extender la cadena copiando de forma complementaria el molde de ADN.
• Secuenciación automática empleando el método enzimático
Consiste en marcar el oligo, cebador o los terminadores con un compuesto fluorescente y
activar la reacción de secuencia. Los productos de la reacción se detectan directamente
durante la electroforésis al pasar por delante de un láser que al excitar los fluoróforos
permite detectar la fluorescencia emitida.
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
• Método que permite obtener un gran número de copias de ADN a partir de un ADN molde.
• Materiales
• Procedimiento
 ADN molde.
 Mezcla maestra.
 Iniciadores o primers.
 Desnaturalización del ADN.
 dNTPs,.
 Alineación.
 Polimerasa,
 Ciclo de PCR.
 Iones
 Cuantificación.
 Termociclador.
Termociclador.
Secuenciación Sanger por electroforesis capilar
Pasos de la secuenciación:
• Amplificación
Amplificación por PCR de los fragmentos de ADN
en un termociclador, añadiendo dNTPs marcados
con fluoróforos al mix estándar.
• Purificación
Para eliminar los componentes del mix de PCR.,
dejando nuestro ADN amplificado puro. Puede ser
llevado a cabo por kits de purificación comerciales.
Cada fragmento acabado en didesoxinucleótido está
marcado fluorescentemente, de manera que cada
didesoxinucleótido (ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP)
implica un color de fluoróforo diferente. De este modo,
se produce una "escalera" de ADN de fragmentos que
difieren en una base de longitud.
Electroforesis capilar
Los fragmentos de ADN se inyectan en el capilar de
electroforesis, y los picos de fluorescencia
correspondientes a cada nucleótido, llegarán a un
detector en tiempo real, y cuyos datos se pueden
transformar informáticamente en un cromatograma
que nos dará los datos de la secuencia de nuestra
muestra de ADN.
La secuencia del ADN inicial a partir de los fragmentos
de ADN secuenciados, se deduce bioinformáticamente
por análisis de secuencias solapadas de los fragmentos de
ADN.
CONCLUSIONES
• La secuenciación de ADN nos ha aportado grandes avances en diferentes
ámbitos y sus aplicaciones son muy variadas, llegando a ser aplicable a
tecnologías ambientales (calidad de aire y contaminación).
• La secuenciación de Sanger es útil para segmentos relativamente largos de
ADN donde arroja secuencias de alta calidad. La técnica suele utilizarse para
secuenciar fragmentos individuales de ADN, como plásmidos bacterianos o
ADN copiado en la PCR. Sin embargo, la secuenciación de Sanger es costosa
e ineficiente para proyectos a gran escala.
APLICACIONES
• Análisis de la calidad del aire
El estudio del microbioma existente en el aire permite evaluar sus posibles efectos sobre la salud humana y el medio ambiente. Relacionado
con el ámbito de la salud pública está el estudio de la diversidad taxonómica de las comunidades fúngicas en el aire por sus efectos tóxicos
y/o alergénicos. Los estudios al ADN ambientales se centran en las propiedades físicas y químicas y la mayoría de los datos existentes sobre
las comunidades microbianas en el aire son a nivel familiar o de género y sobre sus potenciales alérgenos y patógenos.
• Respuesta a la contaminación
El ADN ambiental en estas áreas de las Ciencias Ambientales se utiliza principalmente para el estudio de las respuestas del medio ambiente
ante los cambios provocados por la contaminación. Se usa, además.
Existen bacterias que pueden utilizarse como bioindicadores, al sobrevivir en áreas expuestas a los hidrocarburos. La identificación de estas
bacterias mediante ADN ambiental permite categorizar el grado de contaminación de un área determinada, por ejemplo el suelo de una
antigua planta petroquímica se observan cambios drásticos en las comunidades fúngicas y una disminución de la diversidad bacteriana. Los
residuos nucleares también son susceptibles de ser identificados e incluso cuantificados mediante ADN ambientales, las comunidades
microbianas pueden ser usadas como marcadores ambientales para evaluar el impacto de los residuos nucleares.