Ontogenia dos comportamentos de ratos desnutridos no labirinto em T Luciene Rocinholi Introdução Desnutrição Anormalidades Morfológicas, Neuroquímicas, Neurofisiológicas no SNC (Morgane et al., 1993; 2004) Alterações comportamentais 2006) (Almeida et al., 1994 e Alterações Comportamentais da desnutrição Ratos desnutridos (desnutrição proteica) apresentam menor ansiedade/maior impulsividade do que ratos controles no Labirinto em Cruz Elevado - LCE aos 70 dias de idade. (Almeida et al., 1991) Ratos desnutridos (desnutrição proteico calórica) apresentaram Esquiva maior do que os controles no Labirinto em T Elevado – LTE aos 70 dias de idade, revelando também menor ansiedade/maior impulsividade (Silva-Hernandez et al., 2006) Animais Desnutridos (desnutrição proteica) revelaram ainda mais alta transição no teste claro-escuro, menor aquisição no reforçamento diferencial de baixas taxas (DRL) (Brioni e Orsingher, 1988; Tonkiss et al 1990) Desnutrição Técnicas mais utilizadas Redução da quantidade de proteína na dieta Redução da quantidade de dieta oferecida Controle: Dieta à vontade Desnutrido: 40 ou 50% da dieta oferecida ao grupo Controle Aumento do número de filhotes na ninhada Controle: 16% proteína Desnutrido: 6% proteína Controle: 8 filhotes Desnutrido: 16 filhotes Utilização de ratas tias Controle: ninhadas mantidas 12 horas pela rata-mãe e 12 horas por uma rata-mãe de outra ninhada Desnutrido: ninhadas mantidas 12 horas pela rata-mãe e 12 horas por uma rata-tia Efeitos da desnutrição no desenvolvimento A Desnutrição pode produzir menor ansiedade/maior impulsividade ou um atraso na ontogenia do comportamento exploratório em uma situação de ansiedade A hipótese de atraso na ontogenia é reforçada por trabalhos que descreveram que anormalidades comportamentais e Bioquímicas desaparecem mais tarde se animais desnutridos são mantidos recebendo dieta inadequada.(Almeida et al 1992); ou seja, o animal desnutrido é capaz de apresentar comportamentos semelhantes aos controles num período mais distante do desenvolvimento. Uma vez que Ratos desnutridos jovens, aos 22 dias, exploraram mais os braços abertos do LCE do que animais aos 35 dias, revelando também menor ansiedade/maior impulsividade em animais mais jovens (Riul et al.,1998) torna-se interessante investigar o comportamento destes animais ao longo do desenvolvimento em outros modelos animais. T-maze (Plus-maze modificado) Vantagem Medo aprendido: LB, E1, E2 Permite a distinção em um mesmo animal dos dois diferentes tipos de medo e possibilita investigar a aprendizagem e a memória Esquiva Inibitória Medo Inato: F1, F2 Fuga Justificativas Conhecendo alguns efeitos produzidos pela desnutrição no início da vida (até 49 dias) no comportamento de animais adultos as vantagens de se utilizar o T-maze Comportamento diferenciado de animais jovens comparados aos adultos Objetivo Investigar no T-maze os efeitos da desnutrição proteico-calórica em ratos no período de desenvolvimento (21 e 50 dias de idade). Tabela - Delineamento Experimental Dieta Controle-C: Dieta à vontade 20 ninhadas (6 Machos 2 Fêmeas) Sexo Idade (dias) Macho (M) 21 Grupos Fêmea (F) CM21 (n=8) CM50 (n=8) CF21 (n=8) CF50 (n=8) 50 Macho (M) 21 Malnutrido:M 40% da quantidade Fêmea (F) ingerida pelos 50 controles 20 ninhadas (6 Machos 2 Fêmeas) MM21 (n=8) MM50 (n=8) MF21 (n=8) MF50 (n=8) Todos os animais foram pesados uma vez por semana T-maze (Plus-maze modificado) LB, E1, E2 F1 Coloca-se o rato no braço fechado Registra-se o tempo para o animal sair com as quatro patas Intervalo 30 s entre as medidas Tempo máximo 5 minutos Coloca-se o rato 30 s após E2 em um dos braços abertos Registra-se o tempo para o animal sair deste braço, com as quatro patas Tempo máximo 5 minutos T-maze (Plus-maze modificado) E3 F2 Coloca-se o rato no braço fechado 72 h após F1 Registra-se o tempo para o animal sair do braço com as quatro patas Tempo máximo 5 minutos Coloca-se o rato em um dos braços abertos, 30s após E3. Registra-se o tempo para o animal sair do braço com as quatro patas Tempo máximo 5 minutos Resultados: Peso Corporal C CM MM M CF MF 250 Peso (g) 200 150 100 50 0 0 Dia 21 50 Dias Dia o: Semelhantes para as duas ninhadas Dia 21: Diferenças Entre Controles e Desnutridos Dia 50: Diferenças Entre Controles e Desnutridos e Diferenças Entre Machos e Fêmeas Resultados: T-maze: LB, E1, E2 LB Male E1 Latency (s) 300 E2 200 100 0 C21 Dias C50 Dias Control M21 Dias M50 Dias Malnourished LB E1 E2 Female 300 Latency (s) Efeito de Idade 200 100 0 C21 Dias C50 Dias Control M21 Dias M50 Dias Malnourished Ratos (machos ou fêmeas; controles ou desnutridos) apresentam LB, E1 e E2 maiores aos 21 do que aos 50 dias de idade. Resultados: T-maze: E3 Male E3 Latency (s) 400 Female 300 200 100 0 C21 Dias C50 Dias Control M21 Dias M50 Dias Malnourished Efeito Interação: Dieta x Sexo Fêmeas Controles apresentaram E3 maiores do que Fêmeas Desnutridas Resultados: T-maze: F1e F2 Male F1 F2 Latency (s) 50 40 30 20 10 0 C21 Dias C50 Dias Control D21 Dias D50 Dias Malnourished Female F1 Latency (s) 50 F2 40 30 20 10 0 C21 Dias Control C50 Dias D21 Dias D50 Dias Malnourished Efeito de interação: Sexo x Idade Ratos Machos apresentaram F2 maior aos 21 do que aos 50 dias de idade. Discussão Idade Neste estudo animais jovens apresentam latências de esquiva maiores do que ratos mais velhos, ou seja ansiedade diminuiu com a idade em animais testados no T-maze. Enquanto na literatura a ansiedade aumenta com a idade em ratos testados no Plus-maze (Imhof et al 1993; Riul et al.,1998) Diferenças no modelo? Diferenças devido a análise de medidas mais sensíveis para indicar diferenças? Discussão Dieta x Sexo A Esquiva 3 foi maior nas fêmeas Controles do que nas desnutridas A desnutrição pós-natal pode promover alterações em estruturas neurais, como hipocampo, que está envolvido com a memória. Pq o efeito somente nas fêmeas? Sexo x Idade Machos apresentaram F2 maior aos 21 do que aos 50 dias de idade. Permanecer mais tempo no braço aberto está relacionado com menor ansiedade aos 21 do aos 50 dias. F2 é uma medida do medo inato. Seria adequado realizar esta segunda medida? Dados na literatura não mostram efeito na Fuga em animais aos 70 dias de idade Discussão Desnutrição Desnutrição protéico calórica X Desnutrição proteica Nenhum efeito de dieta ou interação dieta idade foi encontrado nos animais deste trabalho. Em contraste, estudos na literatura tem mostrado esses efeitos na ontogenia do comportamento exploratório de ratos, entretanto, as diferenças aparecem somente quando se compara animais controles e desnutridos aos 80 e 100 dias de idade,mas não em ratos jovens (21 e 50 dias). Fim LB, E1, E2 - Medianas LB Male E1 Latency (s) 300 E2 200 100 0 CM21 CM50 DM21 Control DM50 Malnourished Latency (s) Male 300 200 100 0 CF21 CF50 Control DF21 Malnourished DF50 E3 MEDIANA Esquiva 3 Male Latency Female 300 200 100 0 C21 Dias C50 Dias C M21 Dias M50 Dias M F1, F2 MEDIANA F1 Male Latency F2 30 20 10 0 C21 Dias C50 Dias C D21 Dias D50 Dias M F1 Male F2 Latency 25 15 5 -5 C21 Dias C50 Dias C D21 Dias M D50 Dias