INSTRUÇÕES DE
UTILIZAÇÃO – MEIOS EM
PLACAS PRONTOS A
USAR
PA-254539.01
Rev.: Junho de 2003
BD PALCAM Listeria Agar
UTILIZAÇÃO PRETENDIDA
O BD PALCAM Listeria Agar é um meio para diferenciação selectivo utilizado para o
isolamento e detecção de Listeria monocytogenes e de outras espécies de Listeria provenientes
de alimentos e amostras clínicas.
PRINCÍPIOS E EXPLICAÇÃO DO PROCEDIMENTO
Método microbiológico.
O agar PALCAM baseia-se na formulação de van Netten et al., que desenvolveram este meio
selectivo para diferenciação para ser utilizado no isolamento e enumeração de Listeria spp. em
amostras de alimentos.1 O meio PALCAM é recomendado pela APHA e pela AFNOR para ser
utilizado na detecção de Listeria monocytogenes em alimentos e pela Federação Internacional
de Lacticínios como um meio em placas adicional para detecção de Listeria spp. no leite e
produtos lácteos.2-4 O meio PALCAM e também recomendado pela Health Canada para a
detecção de L. monocytogenes em amostras de alimentos e ambientais e pelo OADC para a
detecção de organismos existentes em alimentos.5,6 Este meio pode ainda ser utilizado para o
isolamento de L. monocytogenes em amostras clínicas.7,8
No BD PALCAM Listeria Agar, a base de agar de sangue de Columbia fornece os nutrientes e
os cofactores para o desenvolvimento de Listeria. A selectividade do meio é obtida através da
presença de cloreto de lítio, sulfato de polimixina B, acriflavina HCl e ceftazidima, que suprimem
o desenvolvimento da maioria das subespécies não pertencentes às Listeria presentes nos
alimentos e amostras clínicas. A concentração de ceftazidima é reduzida de 20 mg/L para
8 mg/L para reforçar o crescimento de recuperação de Listeria. A diferenciação no meio
PALCAM baseia-se na hidrólise da esculina e na fermentação do manitol. Todas as Listeria spp.
hidrolisam a esculina, como se pode verificar pelo escurecimento do meio. O produto da
hidrólise, a esculetina (=6,7-diidroxi-cumarina) reage aos iões férricos resultando num complexo
castanho a preto. Ocasionalmente, poderá verificar-se o crescimento neste meio de outros
organismos que não as Listeria como, por exemplo, os estafilococos ou os enterococos. O
manitol e o indicador de pH, vermelho de fenol, foram adicionados para diferenciar as estirpes
fermentadoras do manitol dessas espécies das Listeria. A fermentação do manitol é
demonstrada por uma alteração da cor do meio de vermelho para amarelo devido à produção
de ácidos.
REAGENTES
BD PALCAM Listeria Agar
Fórmula* por Litro de Água Purificada
Bacto Columbia Blood Agar Base (base
de agar de Columbia)
Manitol
Glucose
Esculina
Citrato de amónia férrico
Cloreto de lítio
Vermelho de fenol
Acriflavina HCl
Sulfato de polimixina B
Ceftazidima
Agar Bacto
pH 7,2 ± 0,2
39,0 g
10,0
0,5
1,0
0,5
15,0
0,08
0,005
0,01
0,008
2,0
*Ajustada e/ou suplementada, conforme necessário, para cumprir os critérios do desempenho.
PA-254539.01
-1-
PRECAUÇÕES
. Apenas para uso profissional.
Não utilizar as placas que apresentem sinais de contaminação microbiana, descoloração,
secura, fissuras ou outros sinais de deterioração.
Consultar as INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO para informação sobre os
procedimentos de manuseamento asséptico, os riscos biológicos e os procedimentos de
eliminação do produto usado.
ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE
Após recepção das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8°C, dentro do
invólucro original até ao momento da utilização. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As
placas podem ser inoculadas até ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e
incubadas durante o tempo de incubação recomendado.
As placas são fornecidas em pilhas de 10 e, quando uma destas pilhas é aberta, as respectivas
placas terão de ser utilizadas no prazo máximo de uma semana, se forem conservadas em
local limpo a uma temperatura entre 2 e 8°C.
CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR
Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as
INSTRUÇÕES GERAIS DE UTILIZAÇÃO). Incubar o meio. Incubar em condições aeróbias
durante 42 a 48 h, a uma temperatura entre 35 a 37°C, e ler os resultados após 18 a 24 e 42 a
48 h.
Estirpe
Resultados de crescimento
Crescimento razoável a excelente; colónias cinzentas
Listeria monocytogenes
ATCC 19112
esverdeadas circundadas por halos castanhos-escuros
a pretos no meio
Crescimento bom a excelente; colónias cinzentas
Listeria monocytogenes
ATCC 19115
esverdeadas circundadas por halos castanhos-escuros
a pretos no meio
Escherichia coli ATCC 25922
Inibição (parcial a) completa
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Inibição completa
Inibição (parcial a) completa
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853
Inibição parcial; colónias amareladas, circundadas por
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
halos amarelos
Não inoculadas
Vermelho, transparente a indícios de opacidade
PROCEDIMENTO
Materiais fornecidos
BD PALCAM Listeria Agar (placas Stacker de 90 mm). Microbiologicamente controlado.
Materiais não fornecidos
Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento laboratorial, conforme necessário.
Tipos e transporte de amostras
Este meio é especialmente utilizado para o isolamento de Listeria em alimentos e materiais
lácteos. Também pode ser utilizado para o isolamento de amostras clínicas como, por exemplo,
fezes em estudos epidemiológicos de velocidades de transporte de Listeria ou para outras
amostras clínicas fortemente contaminadas com flora normal (consultar também
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO).
Relativamente às amostras provenientes de locais estéreis primários do corpo humano,
consultar Procedimento do teste. As amostras deverão ser enviadas para o laboratório
directamente ou utilizando meios de transporte. Podem ser utilizados meios de enriquecimento
líquido para a Listeria como um meio de transporte.2-7 Nos casos em que o período de
PA-254539.01
-2-
transporte ultrapassa as 24 h, as amostras poderão ser congeladas para evitar o
desenvolvimento excessivo de contaminantes.7
Procedimento do teste
Espalhar a amostra directamente ou a partir de um caldo de enriquecimento sobre a superfície
do meio. O BD PALCAM Listeria Agar deverá ser inoculado com amostras clínicas se se
suspeitar de uma contaminação abundante. As amostras clínicas provenientes de locais
estéreis primários do corpo, por exemplo, líquido cerebrospinal, líquido amniótico, placenta ou
as amostras fetais, devem ser, em primeiro lugar, espalhadas num meio não selectivo como
uma placa de BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood ou BD Chocolate Agar (GC Agar
with IsoVitaleX). Os meios selectivos para bactérias gram-positivas, como é o caso do BD
Columbia CNA Agar with 5% Sheep Blood, também podem ser incluídos.7,8 Incubar o meio
inoculado de BD PALCAM Listeria Agar em condições aeróbias (e todos os meios contendo
sangue numa atmosfera aeróbia enriquecida com CO2) durante 18 a 24 h, a uma temperatura
entre 35 e 37°C. Se se verificar um resultado negativo, voltar a incubar durante mais 24 h.
Resultados
No BD PALCAM Listeria Agar, as colónias Listeria aparecem com uma cor cinzenta
esverdeada com um halo preto.
A confirmação da presença de Listeria é feita através de uma repicagem subsequente num
meio apropriado e através da identificação bioquímica/serológica.2,3,7 As colónias dos
organismos fermentadores de manitol como, por exemplo, os estafilococos, que se poderão
desenvolver neste meio, aparecem a amarelo com um halo amarelo.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO
O BD PALCAM Listeria Agar é um dos meios aprovados utilizados para o isolamento selectivo
de Listeria monocytogenes e de outras espécies de Listeria provenientes de alimentos e
amostras clínicas.2-8
Neste meio, irá verificar-se o crescimento de todas as espécies de Listeria e todas terão a
mesma aparência das colónias. Por essa razão, todos os isolados devem ser identificados
através de procedimentos bioquímicos e/ou serológicos de acordo com o nível das espécies.
A incubação deste meio numa atmosfera aeróbia enriquecida com dióxido de carbono ou numa
atmosfera microaeróbia poderá resultar numa alteração da cor de indicador de pH, o vermelho
de fenol, de vermelho para amarelo ou cor-de-laranja, assemelhando-se a uma fermentação do
manitol falsa positiva. Por essa razão, dá-se preferência a uma atmosfera aeróbia.
Determinadas estirpes de Listeria poderão desenvolver-se lentamente neste meio. Assim, as
placas inoculadas devem ser novamente incubadas se ocorrerem resultados negativos após 18
a 24 h.
As espécies de Listeria poderão estar presentes em número bastante reduzido em
determinadas amostras que se encontrarem abaixo do nível de detecção deste meio. Nestes
casos poderá ser necessário um pré-enriquecimento.3-7
BIBLIOGRAFIA
1. Van Netten, P., I. Perales, A. Van de Moosalijk, G. D. W. Curtis, and D. A. A. Mossel. 1989.
Liquid and solid selective differential media for the detection and enumeration of L.
monocytogenes and other Listeria spp. Int. J. of Food Microbiol. 8:299-317.
2. L’association française de normalisation (AFNOR). 1993. Food Microbiology- Detection of
Listeria monocytogenes-Routine Method, V 08-055. AFNOR, Paris.
3. International Dairy Federation. 1990. Milk and milk products - Detection of Listeria
monocytogenes. IDF Provisional International Standard no. 143. International Dairy
Federation, Brussels.
4. Ryser, E.T., and C.W. Donnelly. 2001. Listeria. In: Downes, F.P., and K. Ito. Compendium of
methods for the microbiological examination of foods. 4th edition. American Public Health
Association (APHA). Washington, D.C. USA.
5. Farber, J. M., D. W. Warburton, and T. Babiuk. 1994. Isolation of Listeria monocytogenes
from all food and environmental samples. Health Protection Branch Ottawa, MFHPB-30.
Polyscience Publications, Quebec.
PA-254539.01
-3-
6. Bacteriological Analytical Manual. American Organization of Analytical Chemists., 8th ed.,
revision A, 1998. AOAC International, Gaithersburg, MD, USA.
7. Bille, J., J. Rocourt, and B. Swaminathan. 2003. Listeria and Erysipelothrix. In: Murray, P.
R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
8. Halle, E., et al. 2000. Genitalinfektionen Teil II. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S.
Gatermann (eds.): MiQ -Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen
Diagnostik, vol. 11. Urban & Fischer, Munich, Germany.
EMBALAGEM/APRESENTAÇÃO
BD PALCAM Listeria Agar
No. de cat. 254539
Meios em placas prontos a usar, 20 placas
INFORMAÇÕES ADICIONAIS
Para obter informações adicionais, contacte o representante local da BD.
BD Diagnostic Systems
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
[email protected]
BD Diagnostic Systems Europe
Becton Dickinson France SA
11 rue Aristide Bergès
38800 Le Pont de Claix/France
Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292
http://www.bd.com
BD and BD logo are trademarks of Becton, Dickinson and Company.
Bacto is a trademark of Difco Laboratories, division of Becton, Dickinson and Company.
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
 2003 Becton, Dickinson and Company
PA-254539.01
-4-