UICC
HPV e
CÂNCER
CERVICAL
CURRÍCULO
UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum
Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing
Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
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01
Capítulo 2.d
Triagem e diagnóstico Análise e tipagem de HPV
Prof. Suzanne Garland MD
Diretora de Pesquisa Microbiológica, Chefe de
Microbiologia Clínica e Doenças Infecciosas
Hospital Real de Mulheres
Melbourne, Austrália
Associado Prof. Sepehr Tabrizi
Cientista de Pesquisa Sênior, Departamento de
Microbiologia
Hospital Real de Mulheres
Melbourne, Austrália
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02
Partículas semelhantes a
Vírus (VLP)
• Análogos não infecciosos de um vírus patogênico
• VLP-L1 se une in vitro a capsídeos vazios ou “VLPs”
• Produção de VLP não padronizada
- Sistemas diferentes de expressão, métodos
preparativos, abordagens de controle de qualidade
- Formatos de identificação variam (direto vs. indireto)
- Sem padrão ouro para estabelecimento de limite para
resultado positivo
- Poucas comparações entre laboratórios
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03
Partículas semelhantes a
Vírus (VLP)
• VLPs podem ser analisadas utilizando técnicas de
microscopia eletrônica
W
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04
Detecção de anticorpo
para HPV
• Anticorpos
- A presença representa infecção passada ou presente
- Pode ser gerado contra proteínas de HPV precoces (E)
ou proteínas tardias (L)
- Anticorpos neutralizantes L1 se correlacionam com
proteção iniciada por vacina
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05
Detecção de anticorpo
para HPV
• Vários ensaios foram desenvolvidos para detectar
anticorpos no soro/mucosa
- Teste imunoabsorvente de ligação a enzima (ELISA):
medidas de Ig total, neutralizantes e não neutralizantes
- Testes de ligação competitiva, por exemplo, teste
Luminex competitivo (cLIA): medidas de Ig neutralizantes
a um epítopo apenas, mas a todas as classes de Ig
- Teste de pseudovírus: medidas de Ig neutralizantes total,
todas as subclasses
- Western blot
- Radio-imuno precipitação
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06
Detecção de DNA do HPV por
microscopia no tecido
• Imuno-histoquímica (antígeno específico para o grupo)
• Exame Papanicolau: detecta células precursoras de
câncer
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07
Técnicas de Detecção Molecular para
DNA do HPV
Métodos de Amplificação
• Amplificação de sinal
- Captura Híbrida (HC2)
• Amplificação Alvo
- Reação em cadeia da polimerase - DNA do HPV por
PCR
- RNAm do HPV
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08
Teste de Captura Híbrida 2
• Teste aprovado atualmente pelo FDA
- formato de tubo em 1995; formato de microtitulação em
1999
• Destinado para trabalhar com amostra de célula cervical
esfoliada
• Kit de coleta recomendado inclui escova e meio de
transporte de amostra
- Coleta de células endo e ectocervicais
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09
Teste de Captura Híbrida 2
• Sensibilidade de 5000 genomas/amostra
• Sonda para detecção de HPV de baixo risco
- HPV dos tipos 6, 11, 42, 43, 44
• Sonda para HPV de alto risco
- HPV dos tipos 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58,
59 e 68
• Resultados não específicos ao tipo
• Sem controle para entrada do número de células
• Boa comparação entre laboratórios
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10
Reação em cadeia da
polimerase
• Muito sensível em cerca de 1 a 10 cópias /100.000 células
• Permite o teste de vários tipos de amostra
• Permite o teste de amostras estocadas com qualidade ruim de
DNA
• Testes de consenso: geralmente com alvo na região L1
- Conservado
- Primers variam:
MY09/MY11
SPF1/SPF2
PGMY09/PGMY11
GP5+/GP6+
- Detecção de variedade dos sistemas:
ELISA
dot blot
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Diferentes metodologias de
PCR
• Teste AMPLICOR ® para HPV
• Teste LINEAR ARRAY® para HPV
• Teste de genotipagem INNO-LiPA ®
- Genotipagem de HPV em cortes incluídos em parafina
- Os cortes do tecido podem ser muito antigos e
submetidos à degradação do DNA (inclusive durante a
extração)
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Diferentes metodologias de
PCR
• Formulário do chip de DNA do HPV
• Microarray para HPV
• Ensaio de citometria de fluxo
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Outras metodologias para detectar os
tipos de HPV
• Tecnologia xMAP® da Luminex
• Norchip - Proficiência ao HPV
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14
Limitações e desafios
• Diversa variação de ensaios
• Sensibilidade e especificidade diferentes
• Falha de leitura dos controles disponíveis, GQ, CQ
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Uso prático de métodos de teste de
DNA para HPV
Clínico
• Triagem
• Triagem de exame Papanicolau equivocados / com
valores limítrofes
• Monitoria de tratamento pós-displasia
Epidemiologia
• Áreas geográficas de vigilância
- Prevalência do HPV
- Prevalência do genótipo do HPV
Vacina
• Execução pré e pós vacina
- Estudos de eficácia para a vacina
- Diferentes regiões em todo o mundo
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Obrigado
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