INFECÇÃO HOSPITALAR POR STAPHYLOCOCCUS AUREUS COM RESISTENTÊNCIA À METICILINA (MRSA) Beatriz Villas Bôas Gabriela Carnevale Giovana Giacomini Milena do Valle PROBLEMA: A resistência bacteriana a antibióticos é um grave problema de saúde pública. Você foi convidado para fazer parte da comissão de infecção hospitalar de um hospital da rede pública para investigar a origem clonal de cepas de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA) em pacientes internados. Proponha uma estratégia baseada em tecnologia de DNA, indicando as etapas e métodos a serem utilizados para fazer essa investigação. BRAINSTORM Genômico (total) Sequenciamento Coleta de sangue dos pacientes Cultura de S.aureus com Meticilina Hot Spot (parcial) Extração de DNA PCR SSP ou RFLP Digestões (polimorfismos bem descritos) ESCOLHAS Quais são os polimorfismos relacionados à resistência de Staphylococcus aureus a meticilina? Hospital público --- Relação custo X benefício STAPHYLOCOCCUS AUREUS O Staphylococcus aureus é encontrado colonizando a microbiota normal, podendo tornar-se patogênico em condições como a quebra da barreira cutânea ou diminuição da imunidade. É umas das causas mais comuns de infecções nosocomiais (infecção hospitalar). RESISTÊNCIA À METICININA _ O QUE É? Resistência à penincilina.---- Beta-lactamases são enzimas produzidas por algumas bactérias e são responsáveis por sua resistência a antibióticos beta-lactâmicos. Foi criado o beta-lactâmico sintético meticilina, que era resistente à ação das beta-lactamases que o S. aureus produzia. MRSA (Staphylococcus aureus resistente à meticilina) -penicillinbinding protein, PBP2 e são resistentes a todos os antimicrobianos beta-lactâmicos. RESISTÊNCIA À METICININA _ COMO SE DÁ? ISS- 3’ orfx "cassete cromossômico estafilocócico mec" fonte: http://www.staphylococcus.net/ TIPOS DE SCC Existem 7 tipos de SCC (I - VII), sendo que o SCCI -III estão relacionados à infecções hospitalares (HA-MRSA) Todos possuem a estrutura geral: (mec element) mecA 2.1-kb mecA ESCOLHA JUSTIFICADA - IMPLEMENTAÇÃO Swab das feridas dos pacientes Cultura de S. aureus em meio met+ Extração de DNA PCR do gene mecA Sequenciamento do gene mecA QUESTÕES Onde estão os polimorfismos? Quantos são conhecidos? Qual seria o tamanho ideal do fragmento para sequenciamento ou digestão? Quantas etapas seriam necessárias no processo? Relação custo X benefício campo pulsado). no uso de enzimas de restrição (eletroforese de Polimorfismos existentes no complexo mec. Análise genética de diversidade e os segmentos de DNA amplificados são aleatórios. Resolução ideal X urgência.