Concluído em dezembro de 2010.
Linha de pesquisa: INFLAMAÇÃO E REPARO
Nome do projeto: Análise do surto respiratório e da atividade fagocítica de neutrófilos
humanos em sangue total. Aplicação ao estudo de pacientes com fibrose cística.
Equipe:
Aluna: Anisia Torquilho Praxedes
Orientador: Pedro Paulo Xavier Elsas
Financiamento: CAPES DS (bolsa)
Descrição: A Fibrose Cística (FC) é uma doença autossômica recessiva, caracterizada
pela disfunção de uma proteína, codificada pelo gene CFTR (Cystic Fibrosis
Transmembrane Conductance Regulator), responsável pela regulação do fluxo de
diversos íons, em especial dos íons Cl-. Indivíduos fibrocísticos apresentam alterações
de composição e viscosidade das secreções exócrinas e da interface fluida que
reveste as vias aéreas. Estas alterações são decisivas para que estes fluidos não
sejam eliminados de forma adequada, o que propicia tanto a obstrução de ductos
glandulares como o estabelecimento de infecções pulmonares com suscetibilidade
aumentada para Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus e bactérias do
complexo Burkholderia. Nestes pacientes, infecção e inflamação são fatores
interdependentes e concomitantes, porém distintos, que contribuem para a
deterioração da função pulmonar. Num contexto imunológico, os mecanismos de
imunidade são incapazes de erradicar a infecção. Considerando que as mutações do
gene CFTR podem afetar, direta ou indiretamente, a função dos neutrófilos por
gerarem um defeito seletivo da atividade microbicida, e que este defeito prejudica a
interação dos neutrófilos com os patógenos, este trabalho teve como objetivo avaliar,
em citometria de fluxo, a atividade funcional de neutrófilos humanos em pacientes
fibrocísticos. Para isto, buscou-se definir diferenças quantitativas na atividade
fagocítica e na ativação do surto respiratório entre pacientes e controles saudáveis.
Foram avaliadas 77 amostras de pacientes (pediátricos e adultos), diagnosticados com
Fibrose Cística (FC), atendidos em instituições públicas de referência do Estado do
Rio de Janeiro, e 92 amostras de controles saudáveis (todos adultos). Os
experimentos foram realizados, utilizando amostras de sangue periférico, coletadas
com anticoagulante. A avaliação do surto respiratório foi realizada a partir da oxidação
de dihidrorodamina em rodamina, utilizando forbol-12-miristrato-13-acetato como
ativador celular. Para avaliação da fagocitose, foram utilizadas bactérias
geneticamente modificadas, que superexpressam a proteína fluorescente verde. No
estudo, a mutação no gene CFTR mais comum é a F508, presente tanto em
homozigose (17%) como em associação com outras mutações de CFTR (51%). Nos
fibrocísticos, tanto o surto respiratório como a atividade fagocítica estão afetados, e
uma tendência ao decréscimo com o aumento da idade foi evidenciada para ambos os
parâmetros. Esta queda é altamente significativa a partir dos 18 anos, exclusivamente
em pacientes do sexo masculino. Diferenças significativas no surto respiratório foram
observadas entre pacientes sem a mutação F508 em relação ao grupo controle. Tais
diferenças não foram demonstradas com respeito à atividade fagocítica. Esses
resultados reforçam a idéia de que os neutrófilos desses pacientes têm a capacidade
funcional diminuída com o avanço da idade, mesmo quando não foram colhidos de
sítios inflamados. Estas observações sugerem que um defeito adquirido na imunidade
inata, expresso na população neutrofílica, se desenvolve após vários anos de doença,
em pacientes do sexo masculino, sem necessidade de exposição do neutrófilo a um
microambiente inflamado.