Faculdade de Medicina da
Universidade Federal da Bahia
Citometria de fluxo
Com material obtido em parte da:
Purdue University Cytometry Laboratories
(http://www.cyto.purdue.edu/flowcyt/educate/pptslide.htm)
Agradecimentos:
•Dr. Robert Murphy, Carnegie Mellon University, Pittsburgh, PA
•Dr. J. Paul Robinson, Purdue University Cytometry Laboratories
Dr. Carleton Stewart,RPCI Laboratory of Flow Cytometry, Buffalo,NY
•B. H. Davis, William Beaumont Hospital, Royal Oak, Michigan
O que é a citometria de fluxo:
Avaliação de sub-populações
celulares: quadrantes CD4 e CD8.
2
2%
1
10
100
45%
27% 3
26%
4
.1
Log PE Fluorescence (CD4)
1
.1
1
10
100
Log FITC Fluorescence (CD8)
1000
Avaliação de ativação celular:
explosão respiratória.
DCFH-DA
DCFH-DA
DCFH
DCF
H 2O 2
Análise de divisão celular.
G2
M
G0
DNA Analysis
G1
G0G1
s
C
o
u
n
t
G2 M
s
0
200
400
2N
600
800
4N
DNA content
1000
150
75
0
Counts
225
300
Análise de DNA
0
200
400
2N
600
800
4N
PI Fluorescence
1000
600
400
200
Stimulation
0
RATIO [short/long]
800
1000
Influxo de cálcio
0
36
72
108
Time (Seconds)
144
180
112
112
150
150
Análise de reticulócitos
RMI = 34
Count7 5
Coun7t5
RMI = 0
R4 R3 R2 R1
0
0
37
37
R4 R3 R2 R1
.1
1
10
100
log Thiazole Orange
1000
.1
1
10
100
1000
log Thiazole Orange
Citômetro de fluxo
Computer System
Detector &
Mechanical Fluidics
Célula de Fluxo
Injector
Tip
Fluorescence
signals
Focused laser
beam
Sheath
fluid
90 Degree Light Scatter
Laser
FALS Sensor
90LS Sensor
Detectores de fluorescência
Freq
FALS Sensor
Fluorescence
Fluorescence detector
(PMT3, PMT4 etc.)
Marcadores fluorescentes
Wavelength
400 nm
500 nm
600 nm
RelativeIntensity
Excitation
Emission
Fluorescein (FITC)
700 nm
Cromógenos
Common
Laser
Lines
350
300 nm
457 488
400 nm
514
500 nm
610
600 nm
632
700 nm
PE-TR Conj.
Texas Red
PI
Ethidium
PE
FITC
cis-Parinaric acid
Imunofenotipagem:
marcação celular
CD4
CD # = cluster designation number
CD2
0
0
3
0
Count
7
0
1
1
0
1
5
Imunofenotipagem
.1
1
10
Log FITC
100
1000
Light scatter gating
1000
Side Scatter Projection
Forward Scatter Projection
Neutrophils
800
1000
100
50
600
200
40
20
Monocytes
400
30
15
Lymphocytes
0
8
200
Forward Scatter
Scale
0
200
400
600
800
90 Degree Scatter
1000
Avaliação de sub-populações
celulares: quadrantes CD4 e CD8.
2
2%
1
10
100
45%
27% 3
26%
4
.1
Log PE Fluorescence (CD4)
1
.1
1
10
100
Log FITC Fluorescence (CD8)
1000