Harmonização Internacional
de Protocolos de Validação
Buscando um sistema harmonizado
de reconhecimento internacional
para Validação de Métodos
Microbiológicos
Philip Feldsine
BioControl Systems,Inc.
AOAC Liaison Officer to ISO TC34/SC9
Por: Luis Henrique da Costa
AOAC 62693
1
Harmonização Internacional de
Protocolos de Validação




Iniciado há 9 anos em Amsterdam durante
a finalização do Projeto MicroVal.
O grupo de trabalho finaliza a ISO 16140
(Protocolo para Validação de Métodos Alternativos) em 2004.
O grupo SC9 está atualmente revisando a
ISO 16140
SC9 é a Sub-Comissão 9 - Grupo de
especialistas em métodos microbiológicos
dentro dos comitês ISO.
2
2002 -Sistemas de validação…










AOACI Peer Verified
AOAC-RI Performance Tested
AOACI Official Methods
ISO 16140
AFNOR - França
NORDVAL – Noruega, Suécia, Finlândia
EMMAS – Reino Unido
NNI – Holanda
DIN- Alemanha
Cada um tinha seu próprio protocolo e não
aceitava os estudos feitos pelo outro.
3
Após 2002
Atualizações…
e-CAM
AOAC Micro Guidelines






ISO 16140
suporte


AOACI Peer Verified
AOAC-RI Performance Tested
AOACI Official Methods
AFNOR - França
NORDVAL – Noruega,Suécia,Finlândia
EMMAS – Reino Unido
NNI – Holanda
DIN- Alemanha
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e-CAM
e-CAM significa Compilação Eletronica de
Métodos Analíticos
(electronic Compilation of Analytical Methods)

AOAC classificou as validações em 5 categorias e
formatou essas categorias para serem aceitas
dentro do sistema ISO 17025
5
As 5 Categorias e-CAM
RRM: (Reference/Regulatory Methods)
HCV: (Harmonized Collaboratively Validated Methods)
MLV: (Multiple-Laboratory Validated Methods)
SLV: (Single-Laboratory Validated Methods)
RNV:
(Research Non-Validated Methods)
6
A categoria: RRM
Reference/Regulatory Methods



Referência (REF) – métodos de referência
ex.: ISO, FDA BAM
Regulatória (REG) – específico para uso em
laboratórios e agencias regulatórias para situações
de emergência.
RRM serão usados para:




Monitoramento de conformidade
Estabelecer especificações
Disputas judiciais
Validar métodos alternativos
7
A categoria: HCV
Harmonized Collaboratively Validated Methods
Métodos validados através de estudo
colaborativo completo atendendo a ISO 16140
ou AOAC Microbiology guidelines

Formato do Estudo Colaborativo:


Método Qualitativo - mínimo de 10 labs
com dados validos.
Método Quantitativo – mínimo de 8 labs
com dados válidos.
8
A categoria: MLV
Multiple-Laboratory Validated Methods
Requisitos do estudo



Os protocolos devem seguir a ISO 16140 ou AOAC
Micro Guidelines exceto para a quantidade
mínima de laboratórios participantes.
Dados válidos de no mínimo 2 laboratórios, um dos
quais deve ser o laboratório que está organizando o
estudo.
Mínimo 1 alimento para cada método alternativo:


Métodos Qualitativos, 20 amostras por tipo de alimento
Métodos Quantitativos, 5 amostras para cada 3 níveis de
inoculação ou 3 lotes de alimentos naturalmente
9
contaminados.
As categorias: SLV
Single Laboratory Validated Methods

Métodos validados por um único laboratório
atendendo os parâmetros de:



ISO 16140 ou AOAC Micro Guidelines
Um laboratório conduz um estudo comparativo de
métodos seguindo a ISO 16140 ou AOAC Micro
Guidelines
Não é necessário o estudo colaborativo
10
A categoria: RNV
Research Non Validated Methods



Método que pode ser útil mas não
tenha sido validado seguindo o critério
do Single Laboratory Validation(SLV)
Não há requisitos mínimos de dados
Uma nota irá informar:

“método não revisado ou validado por critérios
reconhecidos”.
11
Diferenças entre AOAC e os parametros
Europeos antes de 2004

Exemplo:

AOAC



100 a 200 cepas do microrganismo de estudo e 50
potenciais cross-reactors
requere 20 tipos diferentes de alimentos para estudo
pré-colaborativo e 6 para o colaborativo
ISO/CEN 16140


Um painel microrganismos, geralmente aprox. 30
microrganismos e 20 potenciais cross-reactors
5 alimentos para o estudo in-house e mínimo 3 tipos
diferentes de amostras de alimentos para estudo
colaborativo.
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Resumo comparativo ATUAL entre AOAC
e Europeus.
13
MicroVal e a ISO 16140



ISO 16140:2002
Define os procedimentos para validação
de métodos microbiológicos alternativos
para alimentos e rações animais.
Os padrões estão atualmente sob
revisão afim de considerar quatro
categorias ( Quatro formatos diferentes
de validação).
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Esquema da
Harmonização Internacional
Foco em métodos microbiológicos
Qualitativos e Quantitativos
Estão propostas quatro categorias:
HCV Harmonized Collaborative Validation
MLV Multi-Laboratory Validation
SLV Single Laboratory Validation
IHV In-House Verification
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As categorias: HCV
Harmonized Collaboratively Validated Methods

Validada por estudos colaborativos
completos seguindo todos os requisitos:

ISO 16140

AOAC Micro Guidelines
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As categorias: HCV
Harmonized Collaboratively Validated Methods
Métodos validados através de estudo
colaborativo completo atendendo a ISO 16140
ou AOAC Microbiology guidelines

Formato do Estudo Colaborativo:


Método Qualitativo - mínimo de 10 labs
com dados validos.
Método Quantitativo – mínimo de 8 labs
com dados válidos.
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As categorias: MLV
Multiple-Laboratory Validated Methods
Requisitos do estudo



Os protocolos devem seguir a ISO 16140 ou AOAC
Micro Guidelines exceto para a quantidade
mínima de laboratórios participantes.
Dados válidos de 2 ou mais laboratórios, um dos
quais deve ser o laboratório que esta organizando o
estudo.
Mínimo 1 alimento para cada método alternativo:


Métodos Qualitativos, 20 amostras por tipo de alimento
Métodos Quantitativos, 5 amostras para cada 3 níveis de
inoculação ou 3 lotes de alimentos naturalmente
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contaminados.
As categorias: SLV
Single Laboratory Validated Methods

Métodos validados por um único laboratório
atendendo os parâmetros de:



ISO 16140 ou AOAC Micro Guidelines
Um laboratório conduz um estudo comparativo de
métodos seguindo a ISO 16140 ou AOAC Micro
Guidelines
Não é necessário o estudo colaborativo
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As categorias: IHV
Verification of In House Methods
O propósito é definir que níveis ou tipos
de dados são necessários para a
verificação de estudos in-house:
-
Quantas amostras?
Que tipo de amostras?
Inoculadas? Como?
20
Um passo prático:Estudo
Colaborativo de Salmonella

Europa e Estados Unidos trabalharam juntos usando método
de referencia AOAC e ao mesmo tempo o procedimento ISO
Salmonella (ISO 6579).

Amostras foram enviadas a vários laboratórios em Europa e
Estados Unidos.

USA representados por 6 FDA labs, BioControl Lab, Ohio
Department of Agriculture e 2 Silliker Lab.
3 Matrizes de alimentos foram preparadas na Europa e enviadas para USA e
também distribuídos para laboratórios credenciados em Europa:
a) Queijo fresco de França
b) Carne de frango da Inglaterra
c) Ovo em pó da Holanda
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Um passo prático:Estudo
Colaborativo de Salmonella
RESULTADO: EQUIVALENCIA TOTAL DE RESULTADOS
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Finalizando.





É inegável a necessidade do mercado de alimentos em obter resultados mais
rápidos das condições microbiológicas de seus produtos antes que os mesmos
cheguem ao consumidor final.
Os responsáveis por estes resultados microbiológicos buscam métodos
alternativos que atendam essa rapidez mas que tenham respaldo de validação
confiável. Cuidado com tentativas de “validação” in-house.
É ilógico manter sistemas de validação isolados correndo risco de que barreiras
políticas/comerciais utilizem esses sistemas camuflando-se como barreiras
técnicas.
ISO/CEN e AOAC estão movendo-se para harmonizar seus protocolos para
validação de métodos alternativos. Sempre haverão diferenças.
O estudo com os métodos para Salmonella comprovou que as diferenças entre
AOAC-OMA e ISO não interferem nos resultados. Isso estabelece um
importante precedente para reciprocidade dos sistemas de validações e
respalda o trabalho de harmonização.
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