DETECÇÃO DE VEGF EM MEMBRANA CORIOALANTÓIDE DE OVOS EMBRIONADOS
SUBMETIDOS À HIPERCAPNIA PRECOCE DURANTE A INCUBAÇÃO
Diego Faust
AF/Fundação Araucária
Nelson Luis Mello Fernandes (orientador), Douglas Ari Burin, Camila Souza Oro, Jean Paulo
Contini (colaboradores)
Introdução
Resultados e Discussão
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Com o envelhecimento das matrizes, a espessura da
casca sofre alterações, o que influencia na condutância
de gases entre o embrião e o meio externo. O aumento
dos níveis de CO2, nos primeiros dias, pode levar ao
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aumento da vascularização, induzida via VEGF. A
membrana corioalantóide (MCA) é uma estrutura
vascularizada e em conjunto com a porosidade da
casca permite a difusão de O2 e CO2 entre o ambiente
o sangue, o objetivo foi avaliar a vascularização e
quantificar o VEGF na MCA aos 14 dias de incubação.
As medidas obtidas do percentual de vasos das membranas
corioalantóides, não foram estatisticamente significativas
(p>0,05) independente da idade das matrizes, períodos de
armazenamento ou nível de CO2 (figura 1).
Na análise imunohistoquímica, constatou-se positividade para
VEGF (Figura 1, seta). Entretanto, as análises quantitativas,
que poderão demonstrar uma associação entre os níveis de
CO2 (incubação em estágio único) a idade da matriz e o
período de armazenamento estão sendo andamento.
Método
 10.752 ovos foram distribuídos em um DIC em
esquema fatorial 2x2x2 com 2 idades de matrizes
(35 e 62 sem.), 2 períodos de armazenamento (4 e
9 dias), 2 sistemas de incubação (único -10000 ppm
de CO2 e múltiplo - 4000 ppm de CO2)
 Aos 14 dias de incubação, de 16 ovos/trat foram
extraídas as MCA para obtenção de imagens para
medidas da vascularização e para detecção do
VEGF por meio da técnica de imunohistoquímica.
Referências
Verhoelst, E. et al.. The International Journal of
Developmental Biology, p.85-92, 2011.
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Figura 1. Imagens da vascularização da MCA. Figura 2. Células
imunocoradas com VEGF-A antibody, apontados pela seta.
Conclusão
A idade da matriz, o periodo do armazenamento ou o modelo da
incubadora (níveis de CO2) não interferiram na vascularização da
MCA.
A análise de imunohistoquímica detectou a expressão do VEGF,
entretanto, a correlação com a vascularização pode ser confirmada
após o término das avaliações quantitativas.