54º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética • 16 a 19 de setembro de 2008
Bahia Othon Palace Hotel • Salvador • BA • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
Utilização da pcr convencional e PCR
em tempo real para a detecção de
Mycobacterium leprae em sangue de
pacientes com hanseníase
Reis, EM1; Nunes, MM1; Lobato, J1; Neves, AF2; Gonçalves, MA1; Costa, AV1; Goulart, LR1,2; Goulart, IMB1
Centro de Referência Nacional em Hanseníase/Dermatologia Sanitária, Hospital das Clínicas, Faculdade de Medicina, Universidade Federal de
Uberlândia
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Laboratório de Nanobiotecnologia, Instituto de Genética e Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia
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Hanseníase é uma doença infecciosa crônica, causada pelo Mycobacterium leprae, um parasita intracelular obrigatório
de macrófagos e células de Schwann. O diagnóstico é clínico-laboratorial, realizado por meio de técnicas baciloscópicas
de baixa sensibilidade e especificidade, principalmente na detecção de formas clínicas paucibacilares. A PCR tem
mostrado grande especificidade e sensibilidade na detecção de DNA em várias amostras de pacientes, no entanto,
não tem estudos demonstrando a detecção de DNA no sangue de paciente nas várias formas clínicas. Neste estudo,
foi avaliada a utilização da PCR convencional e PCR em tempo real para a detecção de M. leprae em sangue de
pacientes com hanseníase, dispondo-se de um par de primer específico para a região ML0024 do DNA do bacilo. A
especificidade foi demonstrada na ausência de amplificação para outras microbactérias: M. fortuitum, M. avium, M.
abcessus e M. gordonae, além dos parasitas intracelulares Plasmodium falciparum, P. vivax, Leishmania amazonensis,
L. braziliensis e Trypanossoma cruzi. Foi extraído DNA de sangue total de 120 pacientes virgens de tratamento,
sendo 20 pacientes de cada forma clínica. O sistema TaqMan para amplificação da região ML0024 mostrou-se mais
sensível quando comparado com os resultados obtidos pela PCR convencional para amplificação da mesma região. Dentre
os 120 pacientes analisados, 3,3% (4/120) foram positivos na PCR convencional e além destes, mais 20 pacientes, 20%
(24/120), foram positivos pela técnica de PCR em tempo real. Por forma clínica, observou-se uma maior positividade
entre os pacientes DT-PB (2/120) na PCR convencional. Com a PCR em tempo real, a maior positividade foi no
grupo virchoviano (V), 6,7% (8/120). A nova tecnologia conseguiu detectar M. leprae em todas as formas clínicas, com
exceção do grupo dimorfo-dimorfo (DD), enquanto que a técnica convencional deixou de identificar positivos entre
os tuberculóides (T), DD e dimorfo-virchovianos (DV). A escassez de publicações que abordem a detecção de DNA
de M. leprae no sangue de pacientes e contatos com hanseníase sugere a dificuldade de se encontrar o bacilo nesse tipo
de amostra biológica. Neste trabalho, a PCR em tempo real mostrou-se sensível e específica na detecção da bactéria
no sangue. Esse achado tem um valor singular, pois, uma vez que esta técnica foi validada em pacientes, ela poderá ser
utilizada no rastreamento da população designada como grupo de risco. Além disso, a presença de M. leprae no sangue
elucida a possibilidade da transmissão sanguínea do bacilo, uma teoria de extrema importância para a sociedade que
deve ser cuidadosamente pesquisada.
Apoio: FAPEMIG, CNPq, CAPES, FNS/MS.
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