GRUPO HOSPITALAR CONCEIÇÃO
HOSPITAL NOSSA SENHORA DA CONCEIÇÃO
C.R. LABORATÓRIO DE ANÁLISES CLÍNICAS – SETOR DE BIOQUÍMICA
CORTISOL
SORO / PLASMA
Automação Roche – E601
Elaborado por: Antônio do Amaral Batista
Procedimento Operacional Padrão
Data da 1ª versão: 20.05.2006
Versão/Revisão: 4/0
Data da efetivação: 20.02.2014
POP n.º: B39
Página 1 de 7
Revisado por: Daniela Sandra de Castilhos
Aprovado por: Andréa Cauduro de Castro
1. Sinonímia:
CORTISOL, HIDROCORTISONA. Mnemônico: COR
CORTISOL ÀS 8h. Mnemônico: CO8
CORTISOL ÀS 16h. Mnemônico: C16
CORTISOL SOB SUPRESSÃO (teste de supressão noturna com dexametasona).
Mnemônico: CSS
2. Aplicabilidade:
Bioquímicos do setor de bioquímica do LAC-HNSC.
3. Aplicação clínica:
Determinação quantitativa in vitro do cortisol em soro ou plasma humano.
4. Princípio do teste:
Eletroquimioluminescência (ECLIA): Princípio de competição.
Duração do ensaio: 18 minutos.
1ª incubação: 20 µl de amostra são incubados com um anticorpo biotinilado específico do
cortisol e um complexo de rutênio marcado com derivado do cortisol. Conforme a
concentração do analito na amostra e a formação do respectivo complexo imune, o local de
ligação do anticorpo marcado é ocupado em parte com analito de amostra e em parte com
hapteno marcado com rutênio.
2ª incubação: Após a incorporação das micropartículas revestidas de estreptavidina, o
complexo formado liga-se à fase sólida pela interação da biotina e da estreptavidina.
A mistura de reação é aspirada para a célula de leitura, onde as micropartículas são fixadas
magneticamente à superfície do eletrodo. Os elementos não ligados são removidos com
ProCell M. A aplicação de uma corrente elétrica ao eletrodo induz uma emissão
quimioluminescente que é medida por um foto multiplicador. Os resultados são determinados
com base numa curva de calibração, que é gerada especificamente pelo analisador por uma
calibração de 2 pontos e uma curva principal incluída no código de barras do reagente.
5. Amostra:
5.1 Preparo do paciente:
Sem restrições (coleta preferencial pela manhã: 7-10h e a critério médico: 16-20h).
5.2 Tipo de amostra:
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Soro ou plasma. Tubos sem anticoagulante e com gel separador ou tubos com anticoagulante:
EDTA e heparina (Li, Na, NH4+).
5.3 Colheita:
Quantidade mínima de sangue: 1 ml. Quantidade ideal: 5 ml.
5.4 Preservação e transporte:
Transportar o material colhido à temperatura ambiente e dentro das normas de segurança
legais.
5.5 Identificação da amostra:
Etiqueta com código de barras gerado pelo sistema de gerenciamento de dados do LAC
(Sistema Pleres). A etiqueta deve ser posicionada nos frascos de colheita a partir da tampa
para o fundo em linha reta de forma que o código de barras fique visível e alinhado, sem
enrugamentos.
5.6 Estabilidade e armazenamento:
A estabilidade da amostra colhida é de 5 dias se refrigerada (2 a 8°C) e 3 meses a -20°C.
Congelar apenas uma vez. Amostras descongeladas devem ser invertidas várias vezes e estar
a temperatura ambiente antes da análise.
5.7 Amostras Inadequadas:
Amostras mal identificadas. Amostras inativadas pelo calor. Amostras com volume
insuficiente. Amostras com fibrina. Amostras com anticoagulante citrato (<10%).
6. Reagentes e materiais:
Reagentes para automação Roche / E411:
Dispositivo de reagentes Cortisol – 100 testes.
M – Micropartículas revestidas de estreptavidina (tampa transparente), 1 frasco, 6,5 ml:
micropartículas revestidas de estreptavidina, 0,72 mg/ml, capacidade de fixação: 470
ng/biotina/mg micropartículas; conservante.
R1 – Anticorpo anti-Cortisol-biotina (tampa cinza), 1 frasco, 9 ml: anticorpo anti-Cortisol
policlonal biotinilado (ovino) 90 ng/ml, tampão MES: 100 mmol/l , pH 6,0; conservante.
R2 – Cortisol-peptídio-Ru (tampa preta), 1 frasco, 9 ml, derivado de cortisol (sintético),
marcado com complexo de rutênio 25 ng/ml; danasol 20 µg/ml; tampão MES 100 mmol/l, pH
6,0; conservante.
Reagentes para calibração e controle de qualidade:
Calibrador: Elecsys Cortisol CalSet.
Preparação: pronto para uso. Estabilidade: a –20°C: 12 semanas.
ProCell M: tampão do sistema E 170.
CleanCell M: solução de limpeza para célula de leitura do sistema E 170.
Elecsys Precicontrol Universal 1 e 2: soros controles.
Elecsys Diluent Universal: diluente da amostra.
Preparação, estabilidade e conservação: Ver POP Calibradores/Controles.
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6.1 Preparo: pronto para uso.
6.2 Estabilidade: estável até o fim do prazo de validade, quando fechado e acondicionado
entre 2 e 8 °C. Após abertura: 12 semanas. No analisador: 8 semanas.
6.3 Armazenamento:
Entre 2 e 8 °C.
7. Equipamentos:
E 601(Roche). Para maiores detalhes vide POPE-B20 – E 601.
8. Calibração:
O dispositivo de reagente contém um código de barras com informações específicas para a
calibração do lote de reagentes em questão. A curva principal previamente definida é
adaptada ao analisador através do código de barras do Cortisol CalSet. O software do
analisador verifica automaticamente a validade da curva e alerta para eventuais desvios.
8.1 Freqüência das calibrações:
• Uma calibração por lote de reagente dentro de um máximo de 24h após ter sido registrado
no analisador.
• Passado 1 mês (28 dias) quando se utiliza o mesmo lote de reagentes.
• Passados 7 dias quando se utiliza o mesmo dispositivo de reagentes no analisador.
• Sempre que necessário, quando os resultados de ensaios de controle de qualidade
estiverem fora dos limites específicos.
9. Procedimento:
9.1 Fluxo:
As amostras devem ser centrifugadas. O auxiliar de laboratório as leva para a estante da mesa
do E601, onde será realizada a análise pelo bioquímico. E601: Após a manutenção diária do
equipamento, colocar o reagente, com a tampa destravada, no disco dos reagentes do
analisador evitando a formação de espuma. O sistema regula automaticamente a temperatura
do reagente e a abertura dos frascos. Selecionar a tecla REAGENTE SCAN para a leitura do
código de barras do Kit (onde serão lidos os parâmetros específicos do teste) e a ressuspensão
das micropartículas automaticamente antes de ser usada. Após a corrida dos soros controles,
colocar o tubo primário com identificação da amostra por código de barras na rack e autorizar
a corrida na tecla START. Caso não seja possível utilizar tubo primário, transferir a amostra
para copinhos específicos informando a rack e a posição respectivamente na tela
WORKPLACE – Test Selection. O analisador calcula automaticamente a concentração do
analito de cada amostra e envia para o LINK do interfaceamento para ser avaliado e liberado
pelo operador. Rotina: 5ªs feiras.
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9.2 Definição do teste:
Intervalo do teste: 0,018-63,4 µg/dl
Intervalo pós-diluição: 0,018-634 µg/dl
Sensibilidade analítica: 0,018 µg/dl
Os valores inferiores ao limite de detecção são liberados como < 0,018 µg/dl
Nº do teste no E601: 24.
Unidade: µg/dl
9.2 Diluição:
As amostras poderão ser diluídas automaticamente com diluente universal na proporção de
1:10. O equipamento calcula automaticamente o resultado.
10. Controle de qualidade:
10.1 Interno:
Controles: Precicontrol Universal 1 e 2.
Freqüência: Quintas; a cada troca de lote; após calibração.
Preparo: dissolução em 3 ml de água destilada e armazenamento em –20°C em alíquotas de
450 µl.
10.2 Externo:
Ver tabela de CQE 3.2.3 / 3.2.54 POP B114.
11. Resultados:
11.1 Unidades:
Os resultados são expressos em micrograma por decilitro: µg/dl.
11.2 Cálculos:
O aparelho calcula automaticamente a concentração do analito de cada amostra.
11.3 Critérios de aceitação:
Resultados cujas amostras foram coletadas, preparadas e processadas dentro das condições
estabelecidas, dentro dos limites de normalidade e sem nenhum alarme dos equipamentos
podem ser liberadas diretamente na rede, via interfaceamento. Resultados fora dos limites de
normalidade ou com alarmes do equipamento devem ser liberados após avaliação com
exames anteriores e se necessário repetição do processo anotando nas observações: exame
confirmado após repetição.
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12. Valores de referência:
7-10h: 6,2 a 25 µg/dl
16-20h: 2,3 a 13 µg/dl
13. Valores críticos:
N/A
14. Especificações de Desempenho:
14.1Linearidade: Até 63,4 µg/dl
14.2Precisão:
- Fabricante: interensaio: PC Universal 1: 1,70% PC Universal 2: 1,40%
- Validação pelo Laboratório:
- PC Universal 1: 4,23% PC Universal 2: 2,18% (Módulo 1-Célula1)
- PC Universal 1: 3,26% PC Universal 2: 2,49% (Módulo 1-Célula2)
- PC Universal 1: 3,69% PC Universal 2: 3,36% (Módulo 2-Célula1)
- PC Universal 1: 3,53% PC Universal 2: 3,19% (Módulo 2-Célula2)
15. Limitações do método:
15.1 Interferentes:
• Ligados à amostra:
Icterícia: o ensaio não é afetado pela icterícia (bilirrubina até 60 mg/dl).
Lipemia: o ensaio não é afetado pela lipemia (triglicerídios até 2700 mg/dl).
Hemólise: o ensaio não é afetado pela hemólise (hemoglobina até 1,9 g/dl)
Nos pacientes em tratamento com doses elevadas de biotina (> 5 mg/dia), as amostras só
deverão ser colhidas após intervalo mínimo de 8h da última administração. Títulos
extremamente elevados de anticorpos para estreptavidina e para rutênio podem causar
interferência. Anticoagulante citrato de sódio fornece resultados 10% menores. Gravidez,
contraceptivos com estrogênios dão origem a concentrações de cortisol elevadas. Em
amostras de pacientes tratados com prednisona, prednisolona ou metilprednisolona, podem
ser determinadas concentrações falsas elevadas de cortisol. O stress grave também pode dar
origem a níveis elevados de cortisol.
• Ligados ao equipamento de automação:
Aspiração de volumes inadequados de amostra ou reagentes. Antes da determinação,
certifique-se que as amostras dos pacientes, os calibradores e os controles estejam à
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temperatura ambiente (20-25°C). Devido a possíveis efeitos de evaporação, as amostras, os
calibradores e os controles colocados no equipamento deverão ser analisados no prazo de
duas horas.
16. Interpretação dos resultados:
O Cortisol (Hidrocortisona) é o glicocorticosteróide mais proeminente, e é essencial para a
manutenção de várias funções do organismo. À semelhança de outros glicocorticoesteróides,
o cortisol é sintetizado a partir do precursor comum colesterol da zona fasciculada do córtex
da supra-renal. Para o transporte do cortisol no sangue, cerca de 90% do cortisol liga-se à
globulina ligante dos corticosteróides (CBG) e à albumina. Apenas uma pequena quantidade
do cortisol circula não ligado no sangue, e está livre para interagir com os seus receptores.
Os efeitos fisiológicos mais importantes do cortisol são o aumento dos níveis de glicose no
sangue (aumento da gliconeogênese) e da sua ação antiinflamatória e imuno-supressora. A
síntese e a secreção do cortisol pela supra-renal são controladas por um mecanismo de
feedback negativo do eixo do córtex hipotálamo-hipófise-suprarenal. Se o nível do cortisol
for baixo, o hormônio de liberação da corticotropina (CRH) é liberado pelo hipotálamo, o
que faz com que a hipófise libere o hormônio adrenocorticotrópico (ACTH). Isto estimula a
síntese e a secreção do cortisol pela supra-renal. O próprio cortisol atua num mecanismo de
feedback negativo na hipófise e no hipotálamo. Além disso, o stress é seguido de um
aumento da secreção de cortisol. As concentrações de cortisol no soro apresentam
normalmente variações diurnas. As concentrações máximas são normalmente atingidas de
manhã cedo e depois vão diminuindo durante o resto do dia até atingirem um nível noturno
que é cerca da metade da concentração observada de manhã. Por isso, para a interpretação
dos resultados, é importante saber a que horas foi feita a colheita da amostra de sangue. O
nível do cortisol de um paciente é utilizado para o diagnóstico da função ou da disfunção da
supra-renal, da hipófise e do hipotálamo. Assim, a concentraçãos sérica de cortisol é
utilizada para monitorizar várias doenças caracterizadas pela hiperprodução (síndrome de
Cushing) ou pela hipoprodução (doença de Addison) do cortisol.
17. Biossegurança:
Usar equipamento de proteção individual (luvas, óculos etc.). Fazer a descontaminação de
bancadas e equipamentos conforme as normas de segurança do laboratório. Vide Manual de
biossegurança.
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18. Anexos:
18.1 Teste de Estímulo com ACTH (Teste da Cortrosina): Mnemônico: TCS
Coleta de sangue basal, a coleta é realizada pelo setor de Medicina Nuclear. Administração
por via endovenosa de 250 µg de ACTH (produto: Cortrosina). Coleta de sangue 30 e 60
minutos após a administração de ACTH (agendamento na Medicina Nuclear). Dosagem de
CORTISOL: basal, 30 e 60 minutos. Obs: informar medicamentos em uso nos últimos 30
dias, em especial glicocorticóides.
Interpretação: Considera-se uma resposta normal quando ocorre aumento mínimo de 50% em
relação ao valor basal ou valores absolutos de cortisol acima de 18 µg/dl. É o principal teste
diagnóstico para a insuficiência adrenal primária (doença de Addison). Nesta, a resposta ao
teste está diminuída ou ausente. Adenomas e carcinomas de adrenal apresentam respostas
variadas. Indivíduos com atrofia adrenal pelo uso crônico de corticosteróides ou por lesão
hipofisiária de longa duração podem também não responder ao teste. Nos casos de doença de
Cushing dependentes de ACTH há uma resposta exagerada.
18.2 Teste de Liberação do Cortisol* (Hipoglicemia Insulínica com dosagem de
Cortisol): Mnemônico: TCI
Coleta de sangue basal. Administração por via endovenosa de insulina 0,1 UI/Kg (0,15 a 0,2
UI/Kg se houver resistência insulínica). Coleta de sangue: 30, 60, 90 e 120 minutos após a
administração de insulina. Dosagem de cortisol e glicemias basais, 30, 60, 90 e 120 minutos.
Interpretação: É um teste utilizado na avaliação do ACTH hipofisiário. O Cortisol deve
atingir um valor maior que 18-20 µg/dl após hipoglicemia. Nos casos de doença de Cushing
dependentes do ACTH há uma resposta exagerada. Adenomas e carcinomas de adrenal
apresentam respostas variadas. Casos de doença de Addison apresentam respostas
subnormais ou ausentes. (* Necessita acompanhamento médico)
18.3 Teste de Supressão Noturna com Dexametasona (Cortisol sob Supressão):
Mnemônico: CSS
Administração por via oral de dexametasona às 23h do dia anterior. No dia seguinte, coleta
de sangue para coleta de Cortisol às 8h. Dose: adultos: 1 mg de dexametasona; crianças: 10
µg/Kg de peso de dexametasona (máximo de 1 mg).
Interpretação: É o principal teste de triagem para o diagnóstico da síndrome de Cushing.
Indivíduos normais apresentam níveis de Cortisol abaixo de 5 µg/dl após a administração de
dexametasona.
19. Bibliografia:
Bula do kit Cortisol / E601 / Roche.
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