Biotécnicas da Reprodução Animal: resultados e avanços da tecnologia de embriões FIV no Ceará Yeda F. Watanabe WTA – Vitrogen – GEN Pecnordeste – Fortaleza - 2014 Aplicações da OPU-FIV • aumentar a produção de embriões (produção em escala) • IA 1 gestação/ano • TE 20 a 30 gestações/ano • FIV 2-5 gestações/OPU – 48 a 120/ano • novilhas pré-púberes Intervalo entre gerações • implantação nova raça: Senepol •sêmen sexado – projetos de leite/carne Histórico da FIV em bovinos 1981 - 1º Bezerro de FIV – EUA 1992 – 1º Bezerro de FIV – Brasil (Jaboticabal) 1996 – aplicação rebanho comercial (PMGRN) 1998 - Inicio OPU-FIV comercial Brasil – Vitrogen 2012 – Fortaleza - UECE Transferência de embriões produzidos in vivo (TE) e in vitro (FIV) no Brasil 350.000 Total de embriões produzidos 300.000 250.000 200.000 1992: 1º calf IVF 150.000 100.000 50.000 0 1995 1996 1997 1998 1999 2000 FIV 2001 2002 TE 2003 Total 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 Metodologia OPU: Aspiração Folicular (8-10 horas) – 24 hs MIV: Maturação in vitro (24 horas) FIV: Fecundação in vitro (22 horas) CIV: Cultivo in vitro (7 dias) TE: Transferência Embrionária (8-10 horas) – 3dias MIV FIV CIV Logística OPU FIV CIO Aspiração Folicular Seleção Oócitos Produção in vitro de embriões pelo grupo Vitrogen – 2000 a 2007 Ano N° Lab Oócitos Viaveis Blast % Blast Total de TE TE Palpada P30 % P30 2000 1 18.246 5.814 32% 4.601 4.303 1.205 28% 2001 2 45.575 14.354 31% 10.198 9.179 2.927 32% 2002 3 133.134 38.796 29% 32.538 29.903 10.961 37% 2003 6 282.634 85.863 30% 73.173 49.336 17.578 36% 2004 7 341.737 106.932 31% 88.579 65.474 25.238 39% 2005 9 281.415 98.029 35% 80.992 64.403 24.883 39% 2006 9 269.169 87.375 32% 71.372 48.735 17.059 38% 2007 7 103.071 35.226 34% 27.469 11.379 4.602 40% 1.474.981 472.389 32% 388.922 282.712 Total 104.453 37% Produção de Embriões e Prenhez por Raça Como melhorar a taxa de prenhez??? Variação entre Doadoras Variação entre Touros Interação Touro x Doadora Sincronizacao e Qualidade Receptoras Manejo Doadoras Embriões por Doadora (10 OPU) 140 120 100 80 60 40 20 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Produção de Embriões Prenhez de uma Unica Doadora Interação Vaca x Touro na taxa de Prenhez Taxa de Embriões e Prenhez Interação Vaca x Touro Projeto Senepol – 2001/2002 15.435 16000 14000 90 dias 4555 TE = 2050 P 3,6 x Fase I 12000 10000 8.686 8000 4.555 6000 2.588 4000 2.178 30% 30% 2000 2.571 1.197 84% 56% 561 26% 47% 0 Oócitos Embriões TE Fase 1 Fase 2 Prenhes Projeto Senepol Nova Vida - Vitrogen Larga Escala Implantação nova raça Nascimento - 1ª fase 2001 Sêmen Sexado TOURO RAÇA Nº DOADORA VIAV. BL (TOTAL) %Bl (TOTAL) HELÍACO NEL 16 493 112 23% DIAMANTE GIR 2 20 6 30% BVLGARI NEL 17 921 326 35% ENLEVO NEL 14 493 112 23% TEATRO GIR 20 463 186 40% METEORO GIR 24 702 259 37% SANSÃO GIR 44 853 281 31% FAJARDO NEL 7 189 41 22% GREATLY GIROL 1 7 2 29% LACROSSE GIR 1 11 3 27% LADU NEL 4 138 50 36% MILENNIUM GIR 3 96 43 45% PALADINO GIR 4 85 46 54% TALENTO GIR 2 64 22 34% Logística OPU – MIV mobilidade Heat Seleção Oócitos MIV - Transporte Oócitos Sistema Antigo Sistema Manual de MIV Tank with gas mixture Gas exchange is done each tube (each 6 hs) for 24h. MIV - Transporte Oócitos Sistema Controlado Touch screen Portable IVF laboratory Oocyte and Embryo transporter Self contained gas mixture tank GPS and Data log (400 hr) MIV – Logística Logística CIV – TE Heat CIV – Logística Projeto Matinha – 2010 a 2013 CIV – Logística Projeto Matinha – Estação Monta – 2011/12 LABMIX - PRENHEZES DE EMBRIÕES FIV (CIV em D4-D5-D6) DIA OPU DIA CIV TE D7 P 30 % P 30 P 60 % P 60 10/11/11 D4 62 34 55% 33 53% 08/12/11 D4 63 26 41% 23 37% 19/01/12 D4 185 83 45% 83 45% 02/02/12 D4 131 64 49% 64 49% 4 D4 441 207 47% 203 46% 09/11/11 D5 186 87 47% 86 46% 07/12/11 D5 83 50 60% 46 55% 18/01/12 D5 83 45 54% 45 54% 01/02/12 D5 87 49 56% 49 56% 4 D5 439 231 53% 226 51% 08/11/11 D6 93 44 47% 43 46% 06/12/11 D6 109 48 44% 46 42% 17/01/12 D6 103 52 50% 52 50% 31/01/12 D6 87 39 45% 39 45% 4 D6 392 183 47% 180 46% 1272 621 49% 609 48% TOTAL Laboratórios Móveis Grandes incubadoras Laboratórios Satélites EVE- incubadora de bancada Câmaras de cultivo independentes: Controle Temp. – Gás - Pressão Taxa de prenhez com mesmo acasalamentos EVE CONVENTIONAL DONORS FGVP 1156 JAS 120 JAS 79 JAS 81 TOTAL TE P 30 % P30 TE P 30 % P30 3 1 33% 3 1 33% 5 2 40% 4 0 0% 4 3 75% 7 2 29% 4 2 50% 5 1 20% 16 8 50% 19 4 21% Vitrificação de embriões FIV Sistema fechado x aberto Base for Vitrification Solution Vitrification Device Culture # Blastocysts Method Vitrified. Survival Rate 48 hours Hatching Rate N. % N % EVE 46 44 96% 42 91% THERMO 164 151 92% 139 85% EVE 84 82 98% 81 96% THERMO 47 44 94% 42 89% EVE 68 65 96% 66 97% THERMO 66 63 95% 59 89% EVE 77 76 99% 76 99% THERMO 55 50 91% 47 85% 607 575 95% 552 91% CRIOTOP H199 + FSB + BSA HSV CRIOTOP IMV (No Animal Protein) HSV TOTAL Prenhez de Embriões FIV Vitrificados Resultados da tecnologia de embriões FIV no Ceará Nov 2013 a Abr 2014 Laboratório Fortaleza IncubaUece Fazendas Ceará - 5 8 visitas – 19 OPU 734 Embriões 461 TE 147 Prenhezes 6 Embr/Doad 40% Prenhez 2,4 Pr/Doad Vitrif = 6/12 Considerações Finais Vantagens OPU em qualquer fase do ciclo estral (prenhez); Idade das Doadoras (Novilhas) diminuir - IEP Dispensa o uso de hormônios; Uso sêmen sexado (produção de carne e leite); Multiplicação rápida – Projetos de Larga Escala Desvantagens Risco de lesões ovarianas nas doadoras. Melhorar a viabilidade para criopreservação Disponibilidade de Receptoras OBRIGADO!!! Parceiros Campo [email protected] [email protected]