Diagnóstico Genético Pré-Implantacional
PGD-FISH
Manual Pré-caso
O requerimento do kit de pocedimento deverá ser solicitado no dia da coleta de oócitos
da paciente. Estocar as soluções 1 e 2 em temperatura ambiente e a solução 3 a 4°C. Se por
alguma razão o ciclo de FIV tiver que ser cancelado os mesmos são estáveis se estocados
corretamente. Para fazer o requerimento entre em contato pelo telefone 0xx11-2114-6654/
6655.
Este kit inclui:
1-
Solução 1 (Metanol) e Solução 2 (Ácido Acético). Estes tubos serão enviados a
temperatura ambiente, mas deverão ser estocados corretamente logo que
chegarem para que continuem estáveis.
PS: Soluções tóxicas. Tenha cuidado ao manuseá-las.
2-
Solução 3 (Solução de lise citoplasmática). Este tubo será enviado a
temperatura ambiente, mas deverá ser estocado a 4°C imediatamente após a
chegada.
3-
Solução 4 (Solução hipotônica). Este tubo será enviado a temperatura
ambiente, mas deverá ser estocado a 4°C imediatamente após a chegada.
4-
Lâmina para biópsia. Serão enviadas duas lâminas para fixação dos
blastômeros. Tomar cuidado para não manusear as lâminas sem luvas, deixálas estocadas dentro do recipiente em que serão enviadas e em lugar seco.
5-
Termo de consentimento. O termo original deverá ser assinado para que o
diagnóstico possa ser realizado. O diagnóstico NÃO SERÁ REALIZADO caso o
termo não esteja assinado, SEM EXCEÇÕES.
6-
Folha de Dados da Biópsia e Fixação. É necessário relatar todas as
intercorrências durante o processo da biópsia embrionária e também as
características do ciclo (nº de embriões biopsiados, nº de blastômeros
encontrados) na folha de dados da biópsia, assim como quaiquer
intercorrências ocorridas durante a fixação dos núcleos.
7-
Checklist do embriologista, descrito abaixo.
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Checklist do Embriologista
Antes da biópsia:
1. Anote todos os dados dos pacientes envolvidos e do ciclo em questão na Folha de
Dados e tire uma cópia para que esta fique em sua clínica.
2. Faça a solução de fixação descrita no protocolo de procedimento recomendado
para biópsia.
3. Guarde o recipiente em que as lâminas foram enviadas e reutilize-o para o
reenvio da lâmina para a Genesis Genetics Brasil (GGB). Encontre uma pequena
caixa de isopor onde a mesma possa ser inserida, tomando cuidado para esta
fique estável e não se mova durante o transporte.
4. Leia os protocolos e o termo de aceitação e rejeição das lâminas. Ligue se tiver
dúvidas.
Alguns cuidados deverão ser tomados durante a fixação:
1) Verificar se no blastômero biópsiado há núcleo.
2) Verificar se a numeração enviada na lâmina corresponde a numeração do
embrião em sua clínica.
3) Verificar se não há citoplasma no núcleo. Caso haja a presença de citoplasma
sobre o núcleo, faça uma nova biópsia.
4) Marcar todas as intercorrências no relatório de biópsia.
Se o embrião não estiver no estágio correto de desenvolvimento ao terceiro dia,
rediscuta a conduta da biópsia com o médico responsável. Estes embriões
raramente produzem bons resultados moleculares, provavelmente porque
nucleases e lisosimas estão sendo liberadas pelo embrião e o DNA esta sendo
degradado. Nossa preocupação é que esta condição leve a resultados falsos de
FISH.
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Após a biópsia e antes do envio:
1. O que deve ser enviado a GGB juntamente com a amostra:
a. Termo de Consentimento ORIGINAL em um envelope dentro da caixa. O
diagnóstico NÃO SERÁ REALIZADO caso o termo não esteja assinado, SEM
EXCEÇÕES. Uma CÓPIA do Termo de Consentimento para PGD deve ser
deixada em sua clínica.
b. Folha de dados da biópsia e deixe uma cópia na sua clínica.
c. Ficha de solicitação do exame
2. Tudo deverá ser correta e completamente preenchido
3. Siga as direções de armazenamento e envio da amostra. Certifique-se de que
todos os documentos necessários estão no envelope.
4. Informe-nos por telefone quando a amostra for enviada.
Como enviar a amostra - transporte:
Para o transporte da amostra, procedemos da seguinte maneira:
1) Assim que confirmada a data da biópsia (até, no máximo, um dia antes), o
embriologista responsável deverá ligar para GGB e informar a data da mesma e o
painel de sondas que será utilizado.
2) A lâmina deve ser colocada em um bórel (mesmo recipiente em que foi
encaminhada a lâmina para biópsia) e, presa no interior de uma caixa de isopor com
fita adesiva, nos espaços vazios completar com papel absorvente (esses utilizados
para enxugar as mãos). Feito isso, lacrar a caixa com fita adesiva.
3) Na data e horário combinados com o embriologista, a GGB solicitará uma
transportadora de nossa confiança que faça a coleta do material.
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4) Os seguintes documentos deverão ser enviados junto com a amostra preenchidos
completa e corretamente, e assinados (quando necessário):
a. Ficha de solicitação de exame;
b. Folha de dados da biópsia e fixação;
c. Termo de consetimento do paciente.
5) O resultado do exame será enviado para e-mail indicado na ficha de solicitação na
manhã do dia 5 do desenvolvimento embrionário.
RESULTADOS:
1. Para Clínicas de São Paulo (capital):
a. A biópsia é realizada na manhã do dia 3 de desenvolvimento embrionário.
É importante lembrar que o resultado para o PGD FISH de 5 cromossomos
sairá na manhã do dia seguinte a biópsia caso a lâmina com a fixação seja
entregue até às 15 horas do dia da biópsia. Para os PGDs FISH de 7, 9 e 11
cromossomos é necessário que a lâmina seja entregue até às 9 horas do
dia da bióspia para que o resultado saia na manhã do dia seguinte.
Invariavelmente, caso a lâmina chegue após os horários estabelecidos, os
resultados sairão com 24 horas de atraso, ou seja, no dia 5 do
desenvolvimentodo embrião.
2. Para clínicas fora de São Paulo:
a. O Resultado sairá no dia 5 do desenvolvimento embrionário, devido ao
transporte.
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Procedimento recomendado para biópsia
1. Para evitar que haja citoplasma sobre o núcleo proceda da seguinte maneira:
a. No máximo 1 hora antes da realização da biópsia, faça uma solução 3:1
(solução 1: solução 2) com 0,5% da solução 3( por exemplo: 1,5ml de
metanol, 0, 5 ml de ácido acético e 10µl da solução 3). Esta solução deve ser
feita tomando cuidado para que os recipientes estejam sempre bem
fechados, por causa da evaporação. É necessário agitar bem o frasco em que
ela for colocada e deixá-lo no freezer até o momento do uso. Mesmo
durante a fixação dos blastômeros é necessário que a solução continue
gelada (deixe-a em recipiente gelado, com bolsas de gelo).
2. Os blastômeros deverão ser fixados na lâmina da seguinte maneira:
1
O procedimento de fixaçao consiste em:
1- Marcar, utilizando lápis de diamante ou tungstênio, com um pequeno círculo o local
onde este blastômero foi colocado, indicando qual o número de referência dele ( ex:
1, 2, 3...).
PS: Sempre faça o círculo com caneta de diamante ou tungstênio o número
correspondente ao blastômero DEPOIS de iniciar a fixação, para que o núcleo não se
“perca” na lâmina.
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2- Transferir o blastômero biopsiado para uma gota com a Solução 4 (Hipotônica), onde
deve permanecer de 1 a 2 minutos.
3- Retirar o blastômero selecionado da solução hipotônica e colocá-lo, com o mínimo de
meio possível, sobre a lâmina.
4- Pingar uma gota da solução fixadora sobre o núcleo e, com o auxílio da lupa, verficar
o momento em o núcleo começa a aparecer novamente, após a solução secar.
Imediatamente antes de secar, faça um círculo ao redor do blastômero pingue mais
uma gota da solução fixadora.
5- Em microscópio de fase, verificar se o núcleo foi fixado. Se não possuir microscópio
de fase, sugerimos a aquisição de um, pois será muito importante nessa fase.
6- Caso tenha sido fixado, passe para o próximo blastômero e repita o procedimento.
7- Caso o núcleo não seja visualizado, considere rebiopsiar o embrião.
8- Ao término da fixação de todos os blastômeros coloque a lâmina dentro de um portalâminas, para que a mesma não corra o perigo de ser danificada.
9- Lembre-se de identificar a lâmina com o nome e sobrenome da paciente e data da
biópsia. É NECESSÁRIO QUE O NOME DA PACIENTE NA LÂMINA SEJA O MESMO
NOME DE IDENTIFICAÇÃO NOS DOCUMENTOS ENTREGUES.
10- Lembre-se de anotar todas as intercorrências do processo de fixação na Folha de
Dados da Fixação.
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Folha de Dados de Biópsia e Fixação
Nome da paciente: _________________________________________
Nome do marido: __________________________________________
Data da biópsia: _______________
N° do
blastômero
Ex: 1
número de células no momento da biópsia
qualidade do
embrião *
8 células
*Referência da qualidade embrionária seguida: ________________________________________
N° do blastômero
Ex:1
núcleo visto no momento da
retirada do blastômero? S/N
N
Núcleo foi visto na
fixação? S/N
S
EX:2
S
S
observações
biopsiada
segunda
célula
biópsia fácil
Outras observações:
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