Interações Antígeno-Anticorpo
Ana Cláudia Carvalho Gouveia
Interações Ag - Ac


Ligações não covalentes
Reversíveis
Características das interações Ag-Ac
Afinidade
Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac
(em um único epítopo).
Características das interações Ag-Ac
Avidez
- Força de interações total entre Ac e Ag.
- Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos
Especificidade
- Capacidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ags.
Características das interações Ag-Ac
Reação cruzada
- Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente
semelhantes
- Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não
relacionado, mas com propriedades químicas similares.
Métodos
Reagentes não marcados
(A ligação do Ac altera o estado físico do Ag)


Reação de aglutinação
Reação de precipitação
Reagentes marcados

RIA

ELISA

IF, citometria de fluxo

Western Blotting
Reação de aglutinação
(Ag insolúvel)
Direta eritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungos
Passiva látex
Qualitativos
Ex.: classificação sanguinea
Semi-quantitativos
Ex.: detectar infecções
Inibição da Aglutinação
Reação de precipitação
- Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma
quantidade fixa de soro contendo o Ac.
- A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade
de precipitado também aumenta até um máximo, para
depois diminuir.
Precipitado visível
Precipitação em solução
Precipitação em gel
Imunodifusão Radial
Precipitação em gel
Imunodifusão Dupla
Reagentes marcados
- Enzimas, fluorocromos, isótopos
- Tipos:

RIA

ELISA

IF, citometria de fluxo

Western Blotting
Radioimunoensaios
Utilizam Ac conjugados com radioisótopos para
quantificar os ensaios.
• Vantagens:
– Alta sensibilidade
– Permite medidas rápidas e precisas
• Desvantagens:
– Custo
– Vida média dos reagentes
– Risco operacional (radiação)
ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
- Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática
associada com complexos imunes.
Imunofluorescência
- Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoras
chamadas fluorocromos.
- Visualização em microscópio de fluorescência
Isotiocianato de fluoresceína (FITC)
Ficoeritrina (FE)
VERDE
VERMELHA
Imunofluorescência Direta
Aplicações:
- Detecção direta de microrganismos
(secreções, urina, cortes de tecidos);
- Identificação de subpopulações de
linfócitos;
- Fenotipagem de células tumorais
Ex.: Detecção de Chlamydia trachomatis
em secreção uretral
Imunofluorescência Indireta
Aplicações:
- Detecção de anticorpos específicos contra
diversos microrganismos;
- Diagnóstico de doenças auto-imunes;
Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi
Detecção de Ac anti-nuclear
Citometria de fluxo
- Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno
particular, marcadas com um fluorocromo;
- Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente;
- As células são então analizadas no citômetro de fluxo.
Citometria de fluxo
- As células saem de uma
célula de fluxo e são
iluminadas por um raio laser;
- A quantidade de raios laser
que é dispersa para fora das
células durante a passagem
das mesmas pelo laser pode
ser
medida,
o
que
proporciona informação a
respeito do tamanho das
células.
- O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e a
luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais
detectores.
CD4
Aplicações:
-Caracterização de populações celulares;
CD8
- Contagem de microrganismos;
- Separação de populações celulares de
acordo com a densidade dos antígenos,
tamanho e granulosidade das células;
- Análise de proliferação celular.
CD19
Western Blot
Ensaios imunocromatográficos
Teste rápido de HIV
Diagnóstico de gravidez
(Ac anti-HIV)
( detecção de beta HCG)
Técnicas de Biologia Molecular
Reação da Polimerase em Cadeia
Amostra +
Reagentes
RT-PCR
(Reverse Transcriptase – Polymerase Chain Reaction)
Termociclador
Detecção da Amplificação
Eletroforese em
gel de
poliacrilamida
Produto
(PCR ou RT-PCR)
Relatório
1.
2.
Qual a principal diferença
imunofluorescência?
entre
os
métodos
de
ELISA
e
Em uma tipagem sanguínea houve aglutinação ao se misturar o
sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo
sanguíneo e faça um esquema explicando a reação ocorrida.
3. Quais as características do anticorpo que podem influenciar a sua
ligação ao antígeno?
4. Ao realizar os exames pré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou
teste ELISA positivo para HIV. Como você interpreta este resultado?
Descreva suscintamente a reação ocorrida.
5.
Qual imunoensaio você escolheria para o acompanhar o prognóstico
de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.