ANÁLISE DO CRESCIMENTO INICIAL DA LINHAGEM Aspergillus tubingensis AN1257
EM RESPOSTA A FONTE DE CARBONO POR CITOMETRIA DE FLUXO
Os fungos filamentosos são organismos multicelulares que possuem um crescimento típico,
conhecido como crescimento apical, o qual favorece a colonização e a exploração de novos
substratos e confere a estes organismos potencial biotecnológico. O emprego biotecnológico de
linhagens fúngicas requer um bom conhecimento das características do modo de crescimento apical
e da resposta à percepção das condições externas, uma vez que estas informações são importantes
para o ajuste dos bioprocessos. Neste sentido, o presente estudo verificou se a citometria de fluxo
poderia ser útil na análise das transformações morfológicas nas fases iniciais de crescimento da
linhagem A. tubingensis AN1257. Os esporos da linhagem A. tubingensis AN1257 foram inoculados
em tubos de ensaio contendo 20 mL de solução salina ou de solução suplementada com glicose em
uma concentração de 1 x 106 conídios/mL. As culturas foram incubadas a 30ºC com agitação de
150 rpm por 5 horas. Nos tempos 0 h e 5 h, alíquotas de 1,5 mL de cada cultura foram coletadas e
centrifugadas a 15000 g por 10 minutos. Após lavagem em solução salina estéril, uma alíquota de
cada cultura foi suspensa em salina estéril enquanto outra alíquota foi fixada por 2 minutos com
solução de paraformaldeído (10mM triton X-100, 3% de paraformaldeído). As amostras foram
analisadas por citometria de fluxo e por microscopia óptica. A citometria de fluxo permitiu a análise
das transformações iniciais do crescimento do fungo A. tubingensis AN1257 e, embora tenha sido
observada uma diferença quantitativa na análise realizada com amostras fixadas e não fixadas, essa
diferença não comprometeu a avaliação do crescimento celular, sendo possível a utilização de uma
ou outra metodologia. A exemplo de outros fungos filamentosos houve crescimento da linhagem A.
tubingensis AN1257, quando as amostras foram suplementadas com glicose, mas não quando foram
tratadas apenas com salina. Os resultados da análise por microscopia óptica foram concordantes
com os resultados da análise por citometria de fluxo. Portanto a citometria de fluxo é uma
ferramenta útil na análise das transformações morfológicas nas fases iniciais do crescimento
fúngico A. tubingensis AN1257, bem como na avaliação da sua resposta à glicose como fonte de
carbono.
Palavras chave: Aspergillus, citometria de fluxo, fungos filamentosos, fonte de carbono.
Camila Cristina Rodrigues