Surto envolvendo 311 pacientes submetidos a diferentes procedimentos
isoladas de infecções em procedimentos invasivos no Pará
Micobactérias de crescimento rápido,
e em outros estados do Brasil
Amplamente distribuídas na natureza,
invasivos em 16 hospitais e clínicas em Belém, PA (2004 e 2005)
Patógenos oportunistas.
58
Injeção intra muscular
1
Mesoterapia
8
M. abscessus (Kusunoki, S., and T. Ezaki. 1992; Lévy-Frébault et al., 1986)
M. chelonae (Kusunoki, S., and T. Ezaki. 1992; Lévy-Frébault et al., 1986)
M. immunogenum (Wilson et al.,2001; Sampaio et al., 2006)
No. de isolados
M. bolletii (Adékambi et al., 2006)
25
20
15
10
5
0
n
03
pr
03
Ju
l0
O 3
ct
03
Ja
n
0
A 4
pr
04
Ju
l0
O 4
ct
04
Ja
n
0
A 5
pr
05
Ju
l0
O 5
ct
05
Ja
n
0
A 6
pr
06
Ju
l0
O 6
ct
06
Ja
n
0
A 7
pr
07
Ju
l0
7
M. massiliense (Adékambi et al., 2006; Simmon et al., 2007)
III Encontro Nacional de Tuberculose
no. de
isolados
(2 mamoplastias e 1 liposucção)
Ja
Cristina Viana-Niero
Procedimentos
Cirurgias laparoscópicas
A
Identificação e tipagem molecular de cepas de MCR
Grupo M. chelonae-abscessus
1
Seqüenciamento do gene hsp65
Amostras isoladas no Instituto Evandro Chagas, Belém, PA
11 isolados obtidos após cirurgias laparoscópicas e 1 após injeção
Análise por seqüenciamento do gene hsp65
PRA-hsp65
m B H
Características fenotípicas:
tempo de crescimento
(< 7 dias e ausência de pigmentação)
Diferenças de nucleotídeos na
seqüência do gene hsp65
posição
187
229
340
M. massiliense CIP 108297
C
G
T
250
200
Identificação molecular inicial:
PRA-hsp65 (PCR-Restriction Enzyme Analysis)
Isolados
75
50
BstEII [bp] (235, 210)
M. abscessus 2 ATCC 14472
T
C
C
M. bolletii CIP 108541
T
C
C
Número de
acesso GenBank
Cepas
No. de
nucleotídeos
idênticos/total
Índice de
similaridade (%)
AY596465
M. massiliense CIP108297
401/401
100
AY859675
M. bolletii CIP108541
398/401
99,25
DQ869273
M. abscessus 2 ATCC14472
398/401
99,25
AY458075
M. abscessus 1 CIP104536
396/401
98,75
AY458082
M. chelonae ATCC19237
372/401
92,5
DQ288262
M. immunogenum 2 F1112
370/401
92,26
AY458081
M. immunogenum 1 CIP106684
367/401
91,52
HaeIII [bp] (200, 70, 60, 50)
M. abscessus 2, M. massiliense e M. bolletii
(Devallois et al., 1997; Adékambi et al., 2004 e 2006)
< 97% de similaridade
espécies diferentes
McNabb et al., 2004
2
Seqüenciamento do gene rpoB
Seqüenciamento do gene rpoB
11 isolados obtidos após cirurgias laparoscópicas
Número de acesso
GenBank
AY593981
Cepas
M. massiliense CIP 108297
8 isolados obtidos após mesoterapia
No. de
nucleotídeos
idênticos/total
Índice de
similaridade (%)
706/711
99,29
Número de acesso
GenBank
Cepas
AY859692
M. bolletii CIP108541
No. de nucleotídeos
idênticos/total
Índice de
similaridade (%)
M. bolletii CIP 108541
700/711
98,45
DQ288264
M. immunogenum 2 F1112
633/651
97,23
711/711
100 (2 cepas)
AY262739
M. immunogenum 1 CIP106684
691/711
97,18
710/711
99,85 (3 cepas)
709/711
99,56 (3 cepas)
AY859692
AY147164
M. abscessus 1 CIP 104536
686/711
96,48
AY262740
M. chelonae ATCC 19237
679/711
95,49
ND
M. abscessus 2
ND não disponível
Espécie diferente
procedimento diferente
surto distinto
Injetável:
4 nucleotídeos de diferença em relação as amostras de cirurgia (99,37%)
< 1,7% de divergência
mesma espécie
> 3% de divergência
espécies diferentes
< 1,7% de divergência
mesma espécie
> 3% de divergência
espécies diferentes
Adékambi et al., 2003
3
PFGE
Pulsed Field Gel Electrophoresis
EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR
Isolados clínicos previamente identificados
isolados de uma mesma espécie são
Suspensão bacteriana
Mix: bactéria e agarose = plug
Lise bacteriana (liberação de DNA)
Critérios de interpretação
Resultado de PFGE
No. de bandas
diferentes
Correlação epidemiológica
relacionada
0
Isolado é parte do surto
Fortemente relacionada
2-3
Isolado é provavelmente
parte do surto
Possivelmente relacionada
4-6
Isolado é possivelmente
parte do surto
Não relacionada
>7
Isolado não pertence ao
surto
Digestão enzimática
Eletroforese em
campos alternados
“iguais” ou “diferentes”?
Tipagem molecular por PFGE
(Pulsed Field Gel Electrophoresis)
Captura de imagem e análise de
dados
Critério de interpretação (Tenover et al., 1997)
4
PFGE Pulsed Field Gel Electrophoresis
59 isolados - PA
18 isolados - GO
22 isolados - ES
30 isolados - RJ
5 isolados - PR
9 isolados - RS
mesoterapia
M. massiliense
Belém, PA
M. massiliense
Rio de Janeiro, RJ
M. massiliense
Goiania, GO
M. massiliense
Vitória, ES
M. massiliense
Curitiba, PR
M. massiliense
Rio de Janeiro, RJ
M. massiliense
Belém, PA
M. massiliense
Santo Angelo, RS
M. massiliense
Curitiba, PR
M. massiliense
Vitória, ES *
M. massiliense
Vitória, ES *
M. massiliense
Vitória, ES *
M. massiliense
Belém, PA *
M. massiliense
CCUG 48898
M. bolletii
CCUG 50184
M. bolletii
ATCC 14472
M. abscessus
ATCC 19977
M. chelonae
ATCC 35752
5
Conclusões
Os casos de infecção após mesoterapia, ocorridos em Belém, foram causados por
M. bolletii e divididos em três grupos por rpoB e PFGE.
Cristina Viana-Niero
Michelle Christiane da Silva Rabello
Sylvia Cardoso Leão
Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia, UNIFESP
Universidade Federal de São Paulo, SP
Rafael da Silva Duarte
Universidade Federal do Rio de Janeiro, RJ
O isolado obtido após uso de injetável foi identificado como M. massiliense mas
apresentou seqüência do gene rpoB e perfil de PFGE diferente dos isolados
provenientes de cirurgias.
Os casos de infecção após cirurgias em diferentes estados brasileiros foram
causados por uma única cepa de M. massiliense, sugerindo uma única fonte de
infecção.
Moisés Palaci
Universidade Federal do Espírito Santo, ES
Maria Cristina Lourenço
Fundação Osvaldo Cruz, Rio de Janeiro, RJ
André Kipnis
Universidade Federal de Goiás, GO
Marta Osório Ribeiro
A identificação de espécies estreitamente relacionadas exige a realização de
IPB Lacen Rio Grande do Sul, RS
vários testes fenotípicos e moleculares.
6