RELATÓRIO TÉCNICO-CIENTÍFICO FINAL
(Observação: as informações prestadas neste relatório poderão, no todo ou em parte, ser
publicadas pela FAPESC.)
1. IDENTIFICAÇÃO DO PROJETO
Chamada Pública Universal 03/2006
1.1. N° do Contrato:
CON13923/2007-8
1.2. Título do Projeto: ISOLAMENTO DE CÉLULAS-TRONCO EMBRIONÁRIAS DE CAMUNDONGO E
PRODUÇÃO DE QUIMERAS ATRAVÉS DA AGREGAÇÃO DE MÓRULAS
1.3. Grande Área do Conhecimento (usar a nomenclatura do CNPq):
5.05.04.00-2 Reprodução Animal/2.02.04.00-0 Genética Animal
1.4. Coordenador(a) do Projeto: Marcel Frajblat
1.5. Localização do projeto (Cidade/Região/SDR): 17ª SDR
1.5.1. Instituição: Universidade do Vale do Itajaí, UNIVALI
1.6.1. Valor total do projeto (incluindo todos os intervenientes): R$ 191.732,5
1.6.2. Participação da FAPESC: R$ 5.987,00
Custeio : R$ 4.287,00
Capital: R$ 1.700,00
1.6.3. Outras instituições participantes (nomear):
UDESC
1.7. Início do Projeto:
20/06 /08
Término: 20 / 12 /08
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1.8 Equipe Executora (Nome, Titulação, Instituição e Função no projeto)
Marcel Frajblat – Med. Vet, Ph.D. – UNIVALI - Coordenação
Vera Lucia Langaro Amaral – Bióloga – UNIVALI - técnica de laboratório
Martina Cordini – Bióloga - UNIVALI - técnica de laboratório
Alceu Mezallira – Med Vet, Dr. – UDESC – Participação técnica
Marcelo Bertolini – Med Vet, Ph.D – UDESC – Participação tecnica
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DESCRIÇÃO DA PESQUISA, RESULTADOS E IMPACTOS
2.1 Resumo da pesquisa (até 500 palavras, espaço simples, fonte times new roman, tamanho 10)
Fibroblastos embrionários são utilizados como camada alimentadora para o cultivo de células-tronco embrionárias
(CTE) de camundongos. Quimeras são produzidas quando embriões sem sua zona pelúcida são colocados em contato
com células-tronco embrionárias para que ocorra a formação de um agregado entre o embrião e as CTEs. Portanto, a
primeira etapa no cultivo de células-tronco embrionárias é a preparação desta camada alimentadora de fibroblastos
fetais. O objetivo deste trabalho foi testar dois protocolos que utilizam diferentes métodos de obtenção de fibroblastos
embrionários murinos (MEF); a quente (Hot Trip) ou a frio (Cold Trip). O tecido foi obtido de fêmeas BALB/c no 13º
dia de prenhez; dez fetos foram utilizados e segmentados em cubos de 3 mm. A partir do homogeneizado de tecido,
metade foi direcionado ao tratamento (Hot Trip) com tripsina 0,05% e EDTA 0,04% e incubado em estufa com 5%
CO2 a 37ºC, por ciclos repetidos de 30 min. A outra metade de tecido foi submetida (Cold trip) a tripsina 0,25% e
EDTA 0,04%, por 5 horas a 4ºC; após este período, foram incubadas por 30 minutos em estufa com 5% CO2 a 37ºC e
semeadas em garrafas de cultivo. As culturas foram mantidas com DMEM, 10% SFB, 1% antibiótico, 0,5% fungizona e
as células aderidas foram contadas após 24 horas de cultura em câmara de Neubauer. Três replicas deste experimento
foram realizadas. A obtenção de fibroblastos no método Cold Trip mostrou-se superior (P<0,05), com a produção média
de 25,5 ± 3,2 x106 céls/ml, comparada com a produção de 12,7 ± 1,9 x106 céls/ml do método Hot Trip. Não houve
diferença na viabilidade das células aderidas produzidas pelos dois métodos. O método Cold Trip mostrou-se mais
adequado para a obtenção de fibroblastos de camundongo e será utilizado como protocolo padrão no cultivo de célulastronco embrionárias no laboratório de biotecnologia da reprodução da UNIVALI.
2.2. Caracterização da Pesquisa:
PESQUISA BÁSICA (PB):
PB visando o avanço do conhecimento sobre o tema em estudo ( )
PB para avançar conhecimento, com potencial de aplicação tecnológica ( X )
PB para o avanço do conhecimento, com potencial para contribuir em políticas públicas ( )
PB visando avançar o conhecimento, com potencial de aplicação pública ou privada ( )
PESQUISA TECNOLÓGICA ( )
PESQUISA EM POLÍTICAS PÚBLICAS ( )
PESQUISA TECNOLÓGICA E POLÍTICAS PÚBLICAS ( )
2.3 Síntese de resultados e impactos da pesquisa - cumprimento dos objetivos; impactos dos
resultados da pesquisa: avanço do conhecimento; inovação tecnológica; benefícios sociais,
econômicos, ambientais, culturais e regionais, efetivos ou esperados; contribuição à formulação
de políticas públicas; outros impactos ou efeitos observados ou potenciais (até 500 palavras,
espaço simples, fonte times new roman, tamanho 10)
O objetivo principal desta pesquisa era a produção de um camundongo quimérico através da agregação de célulastronco embrionárias a mórulas desprovidas de zona-pelúcida. O Laboratório de Biotecnologia da Reprodução já tem
uma rotina de produção e manipulação de embriões de camundongo e portanto, este trabalho se concentrou na primeira
etapa do protocolo de manipulação de CTE, que é o isolamento e cultura de fibroblastos fetais. Os objetivos desta
primeira etapa do projeto foram o isolamento, cultivo e criopreservação dos fibroblastos fetais. Duas técnicas de
extração destas células foram testadas para a escolha da mais eficiente.
A técnica de extração de fibroblastos a frio se mostrou mais eficiente com uma produção duas vezes maior que a
extração quente. As três réplicas realizadas demonstraram que esta técnica será considerada padrão durante a realização
do restante do projeto e nos projetos seguintes. Os resultados desta primeira etapa serão utilizados na continuação deste
projeto que tem o objetivo final a produção de um camundongo quimérico. Esta segunda etapa está em andamento e
também faz parte de um projeto aprovado pela FAPESC através do edital de Ciência Básica.
Existem cerca de 15 mil linhagens de camundongo. Para cada doença humana existe uma linhagem ideal para a
realização de uma pesquisa. Estas linhagens são produzidas através de adições ou modificações do genoma do
camundongo durante seu estágio embrionário. No processo de modificação do genoma, estas são realizadas em CTEs e
posteriormente estas células são agregadas a um embrião. O objetivo final deste projeto é dominar esta técnica de
agregação de CTE e produção de uma quimera para, posteriormente, em conjunto com outros laboratórios criar o
potencial para a produção de um animal geneticamente modificado em Santa Catarina. A produção destes animais seja
para estudos de doenças humanas seja para produção de fármacos ou alimentos melhorados é considerada uma área
estratégica da ciência e tem recebido um grande volume de recursos.
Poucos laboratórios no Brasil dominam o cultivo de CTE e a produção de um animal com modificações genéticas
direcionadas ainda não foi obtida. O domínio desta técnica em Santa Catarina e o estabelecimento de parcerias com
laboratórios de outros estados devem ser considerados eventos estratégicos para a ciência catarinense.
3. DETALHAMENTO TÉCNICO
3.1. Data: 27/02/2009
Prestação de contas financeira: ( X ) Finalizada
3.2. Avaliação (feita pelo(a) coordenador(a) da pesquisa):
( ) Em
A) O Projeto se desenvolveu segundo a proposta originalmente definida?
( X ) Sim
( ) Não
Se houve mudanças significativas, elas foram especificadas e justificadas?
( X ) Sim
( ) Não
Houve solicitação de alteração de rubrica (custeio/capital)?
( ) Sim
( X ) Não
Descrever as alterações:
B) Equipamentos adquiridos, quando for o caso:
Conjunto de pipetadores monocanal variável
C) Problemas ou dificuldades na execução do projeto, quando houver:
D) Objetivos e metas previstas foram atingidas?
( ) Totalmente
( X ) Parcialmente
Comentar:
A primeira etapa do projeto foi a padronização do cultivo de fibroblastos embrionários. Esta etapa
foi concluída e o projeto encontra-se na fase seguinte, na qual as rotinas de cultivo e
criopreservação de CTEs estão sendo padronizadas. Esta etapa, a agregação e transferências dos
embriões agregados serão realizadas ainda neste semestre.
E) Disseminação do conhecimento e produção gerada pela pesquisa:
- Artigos publicados ou encaminhados – (quantidade):
- Dissertações ou teses originadas ou incorporadas:
- Livros publicados ou encaminhados:
- Divulgação na Internet:
- Participação em Congressos, Simpósios ou Seminários:
- Registro de Propriedade Intelectual:
- Outros:
Descrever a produção e sua repercussão:
F) Principais benefícios efetivos ou potenciais para a sociedade em decorrência da pesquisa, entre
os seguintes aspectos, no que couber:
( ) Incremento da renda familiar
(X) Melhoria da saúde
( ) Aumento da ocupação/emprego
( ) Melhoria do saneamento
( ) Redução da jornada de trabalho
( ) Melhoria da moradia
( ) Melhoria do sist. de transporte
( ) Melhoria da alimentação
( ) Melhoria do sist. de comunicação
( ) Alternativa econômica/renda
( ) Melhoria do fornec. de energia
( ) Melhoria da organização social
( ) Aquisição de bens duráveis
( ) Melhoria na educação
( ) Satisfação do beneficiado
(X) Avanço do conhecimento científico
( ) Melhoria do Meio Ambiente
( ) Inovação tecnológica
( ) Diretrizes para Políticas Públicas
( ) Melhoria em Sistema de Gestão
( ) Avaliação de Políticas Públicas
( ) Regulação setorial
( ) Avaliação da Tecnologia no setor
( ) Avaliação de condições Socioeconômicas
( ) Contribuição ao Desenvolvimento Regional
( ) Contribuição à inserção social
( ) Possibilidade de obter patente
( ) Redução da desigualdade social
( ) Agregação de valor a produtos
( ) Redução de consumo de energias
( ) Redução de resíduos
Descrever os benefícios assinalados:
Nos últimos 30 anos, cerca de 20 prêmios Nobel foram entregues a trabalhos que utilizaram
camundongos geneticamente modificados. Isto demonstra que estes animais têm uma
participação fundamental no desenvolvimento da ciência. Portanto, o domínio da sua produção
torna-se uma importante ferramenta científica.
Florianópolis, SC, __27__de_Fevereiro__de_2009___.
___________________________________________________
Assinatura do(a) Beneficiário(a)
4. VERIFICAÇÃO TÉCNICA DO PROJETO (campo da FAPESC)
4.1 Mediante as informações apresentadas pelo(a) coordenador(a) do projeto no presente
relatório, verifica-se que os objetivos, metas e resultados previstos foram:
( ) Plenamente atingidos
( ) Parcialmente atingidos
( ) Não foram atingidos
4.2 Recomendações e encaminhamentos:
Florianópolis, SC, ________de___________________de__________.
___________________________________________________
Assinatura da FAPESC