51º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 51º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2005
Hotel Monte Real • Águas de Lindóia • São Paulo • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-05-4
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Palavras-chaves: Azospirillum, Fixação Biológica do Nitrogênio,
Superóxido dismutase (SOD)
Magalhães, C; Schrank, IS
Departamento de Biologia Molecular e Biotecnologia, Centro de Biotecnologia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul.
Isolamento do gene
que codifica superóxido
dismutase (SOD) em Azospirillum
A fixação biológica do nitrogênio consiste na redução do nitrogênio atmosférico (N2) em amônia sendo
realizada por diferentes microorganismos associados a raízes de plantas ou de vida livre no solo. As
reações de transferência de elétrons que ocasionam a redução do N2 são possíveis devido ao complexo da
enzima nitrogenase. Porém, estas reações necessitam um grande aporte de energia, estando o processo
de fixação do nitrogênio associado à respiração celular. O complexo da nitrogenase é irreversivelmente
inativado por significativos níveis de oxigênio originado da respiração celular. Além disso, a presença
de oxigênio ocasiona reações de oxiredução e formação de espécies reativas de oxigênio (EROs) que
também inativam o complexo da nitrogenase. Uma das primeiras EROs formadas é o radical superóxido,
que por ação de superóxidos dismutases (SODs) é detoxificada a oxigênio e peróxido de hidrogênio.
As SODs atuam no início do processo de formação das EROs, podendo assim prevenir seus efeitos
deletérios sobre o complexo da nitrogenase e demais processos metabólicos celulares. Com o objetivo
de isolamento de genes de SODs foi realizado uma PCR a partir de DNA genômico de A. brasilense
e A. amazonense utilizando primers degenerados. Em ambas reações foram amplificados fragmentos
com aproximadamente 0,4 kb. Estes fragmentos foram clonados ao vetor pUC18 e seqüenciados. O
seqüenciamento de A. amazonense revelou um fragmento de 335 pb e o seqüenciamento de A. brasilense
revelou um fragmento de 449 pb. A análise dos fragmentos contra seqüências presentes em banco
de dados apresentou homologia com SODs de outros microorganismos. Foi realizado southern blot a
partir de DNA genômico das duas espécies de Azospirillum clivado com as enzimas de restrição EcoRI
e SalI sendo utilizado como sonda o fragmento de A. amazonense anteriormente seqüenciado. Foi
observada uma região de hibridização na região de 4,5 kb. Para o isolamento do gene completo está
sendo construída uma biblioteca gênomica parcial de A. amazonense utilizando a região dos fragmentos
de aproximadamente 4,5 kb. Os clones com hibridização positiva isolados da biblioteca genômica
serão seqüenciados e as regiões regulatórias analisadas.
Financiamento: FAPERGS, BIC/UFRGS.
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