55º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 55º Congresso Brasileiro de Genética • 30 de agosto a 02 de setembro de 2009
Centro de Convenções do Hotel Monte Real Resort • Águas de Lindóia • SP • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 978-85-89109-06-2
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Proteases extracelulares em aeromonas e atividade
sobre diferentes substratos
Zacaria, J; Costa, SOP; Delamare, APL; Echeverrigaray, S
Instituto de Biotecnologia, Universidade de Caxias do Sul.
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Palavras-chave: Aeromonas, Proteases, zimograma, variabilidade, especificidade por substrato.
O gênero Aeromonas é constituído por bactérias Gram-negativas pertencentes à família Aeromonadaceae. Estas
bactérias são encontradas em ambientes aquáticos de todo o mundo, incluindo águas cloradas e poluídas. São
patógenos oportunistas tanto de animais de sangue quente quanto animais de sangue frio. Bactérias deste gênero
produzem uma série de fatores de virulência destacando-se toxinas extracelulares e enzimas, entre elas as proteases.
Proteases extracelulares desempenham um importante papel na invasão e no estabelecimento desta bactéria
em infecções, atuando sobre as defesas primarias do hospedeiro. Com o objetivo de estudar a diversidade de
proteases extracelulares em Aeromonas, este trabalho avaliou o perfil proteolítico de extratos brutos de 17 espécies
de Aeromonas, mediante eletroforese em géis de poliacrilamida, utilizando gelatina e caseína como substratos.
Além disto, bactérias representando as espécies A. hydrophila, A. caviae, A. trota, A. media, A. sobria e A. veronii
var. sobria, selecionadas com base em resultados obtidos, foram avaliadas quanto a capacidade de degradação
de distintos substratos: gelatina, caseína, ovoalbumina fração V, soroalbulmina bovina fração V, gamaglobulina,
fibrinogênio, elastina e colágeno. Todas as bactérias empregadas neste estudo foram classificadas através de
métodos bioquímicos e confirmadas mediante RFLP-PCR do gene 16sRNA. Os resultados obtidos mostraram
grande variedade de proteases extracelulares em Aeromonas. Empregando gelatina como substrato, 17 diferentes
bandas com pesos moleculares variando entre 94KDa a 22KDa foram identificadas. Quando empregada caseína
como substrato, 8 diferentes bandas com pesos moleculares variando entre 63KDa a 22KDa foram identificadas. A
avaliação de inibidores enzimáticos permitiu a caracterização de uma serino protease de 63KDa e de pelo menos
quatro metaloproteases com pesos moleculares de 94KDa, 83KDa, 65KDa e 49KDa. No que se refere à avaliação
da atividade proteolítica sobre diferentes substratos, todas as espécies selecionadas apresentaram algum grau de
atividade sobre gelatina, caseína, fibrinogênio, elastina e colágeno. A. hydrophila e A. sobria apresentaram relevante
atividade sobre ovoalbumina fração V, soroalbulmina bovina fração V, gamaglobulina e fibrinogênio, com bandas
correspondentes a 63KDa e 22KDa. A. veronii var. sobria apresentou pequena atividade sobre ovoalbumina fração
V com uma banda de 49KDa. Os dados confirmam a presença de diversas proteases extracelulares em Aeromonas,
conforme evidenciado pela análise dos genomas de A. hydrophila e A. salmonicida, assim como ampla variação
nos perfis de proteases entre espécies e linhagens deste gênero. Além disto, os resultados confirmam o potencial
de algumas proteases extracelulares destas bactérias como fatores de patogenicidade dada a sua capacidade de
hidrolise de distintas proteínas como elastina, globulina, fibrinogênio e colágeno.
Apoio financeiro: CNPq e CAPES.