XIII JORNADA DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO – JEPEX 2013 – UFRPE: Recife, 09 a 13 de dezembro. Detecção de Aeromonas hydrophila em água, comedouro e diferentes órgãos de Oreochromis niloticus Linnaeus, 1758, tilápia do Nilo, da região semiárida da Bahia. Carlos Micael Gomes Oliveira1, Mery Kércia Cardoso dos Santos2, Cherlly Kelly Lima de Almeida3, Danilo Mamede da Silva Santos4. Introdução A criação intensiva de peixes e o aumento consecutivo de sua produção têm gerado nas pisciculturas enfermidades provocados com maior freqüência por bactérias patogênicas do gênero Aeromonas (Costa 2003). O aparecimento das enfermidades ocorre por vários motivos, principalmente pelo manejo inadequado, má qualidade da água e a redução do oxigênio dissolvido no meio aquático (HIRSCH, et al. 2005). Aeromonas hydrophila é uma bactéria gram-negativas possuindo ampla distribuição em peixes oceânicos e continentais, sendo que os sinais clínicos mais evidentes são lesões corporais superficiais ou profundas e zona de congestão entre outros (Bastardo, et al. 2012). Aeromonas spp e Aeromonas hudrophila provocam grande mortalidades de peixes, sendo patogênicas em humanos e animais, portanto, ao consumir esse pescado com a presença dessas bactérias pode desencadear problemas de saúde pública (Silva 2007). A presente pesquisa tem como objetivo detectar bactérias Aeromonas spp. e Aeromonos hydrophilica na água, comedouro e diferentes órgãos de Oreochromis niloticus Linnaeus, 1758, tilápia do Nilo, da região semiárida da Bahia. Material e métodos O estudo foi realizado em uma piscicultura com sistema intensivo de Oreochromis niloticus, tilápia do Nilo no município de Paulo Afonso, Bahia. Os peixes cultivados são destinados a engorda. As amostras de água foram coletadas com o auxilio de um frasco de boro silicato imerso a 20 cm de profundidade da lamina d’água dentro do tanque-rede. Para amostra de comedouro foi utilizada um quadrante de 20x20 cm com o auxilio de uma caixa de açoinoxidável estéril e uma escova de cerdas rígidas. As amostras de água e comedouro, foram acondicionadas em caixas térmicas sob refrigeração e conduzidas ao laboratório para posterior análise. Os exemplares dos peixes coletados foram caracterizados como aptos ao consumo e não aptos ao consumo de acordo com as características macroscópicas, sendo três exemplares de controle e três com aspectos patológicos. Realizaram-se in situ exames macroscópicos dos órgãos (pele, olhos, nadadeiras e brânquias), sendo os principais sinais clínicos de Aeromonas spp, em seguida cada individuo foi colocado em sacos plásticos etiquetados, preservados em caixas térmicas sob refrigeração e conduzidos ao laboratório para posterior a análise. No laboratório os peixes foram acondicionados em sacos plásticos estéreis e adicionados água pepitona de 1:1 peso e volume. A amostra foi homogeneizada e após esse processo foi retirada a água e depositada em frasco e realizadas diluições seriadas até 10-2. As amostras foram inoculadas em placas de Petri estéreis contendo o meio de cultura Meio de Isolamento Aeromonas Base (MIAB). Utilizou-se 100µl de cada diluição, plaqueando duas placas com 100µl cada, com auxilio da alça de Drigalski. Para amostra de água foi inoculado 100µl em placas de Petri utilizando o meio MIAB. Para as amostra de comedouro foram realizadas diluições seriadas até 10-5, e as amostras inoculadas no meio de MIAB com o auxilio da alça de Drigalski. As placas foram incubadas em estufa bacteriológicas a 37°C por 24 horas. Foram selecionadas três colônias, em cada placa, com as características do táxon investigado. As colônias selecionadas foram em tubos de ensaio contendo NaCl e em seguida inoculadas no meio KAPER`S Medium para detecção do crescimento de 1 Primeiro Autor Graduando em Engenharia de Pesca, Departamento de Educação Campus VIII, Universidade do Estado da Bahia. Rua do Gangorra 503, CEP: 48608-240, E-mail: [email protected] 2 Segundo Autor Graduando em Engenharia de Pesca, Departamento de Educação Campus VIII, Universidade do Estado da Bahia Rua do Gangorra 503, CEP: 48608-240, E-mail: [email protected] 3 Terceiro Autor Graduando em Engenharia de Pesca, Departamento de Educação Campus VIII, Universidade do Estado da Bahia Rua do Gangorra 503, CEP: 48608-240, E-mail: [email protected] 4 Quarto Autor é Professor Assistente do Departamento de Educação Campus VIII,, Universidade Estadual da Bahia, Rua do Gangorra 503, CEP: 48608-240 E-mail: [email protected] XIII JORNADA DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO – JEPEX 2013 – UFRPE: Recife, 09 a 13 de dezembro. Aeromonas hydrophila incubadas em estufas bacteriológicas a 24°C durante 24 a 48 horas. Foram avaliados parâmetros físico-químos: oxigênio dissolvido, pH, temperatura e condutividade. Resultados e Discussão Os peixes foram examinados in situ, observando os seguintes sintomas externos como abdômen comprimido (barriga seca), presenças de manchas ou pontuações, lonas de congestão ou hemorragias, lonas de descamação, lesões corporais (furúnculos), muco excessivo, congestão (brânquias), presenças de pontuações (brânquias), erosão (nadadeiras desfiadas e necrosadas), congestão (nadadeiras), deformidades, coloração anormal (escurecimento), lesões corporais (necroses), lonas de necrose (brânquias), fungos, coloração anormal (palidez), distensão abdominal (ascite), dilatação do ânus e exoftalmia tanto nos peixes comercializáveis e não comercializáveis (Tabela 1). Dentre os sintomas observados 12% dos animais observados apresentaram sintomatologia de muco excessivo, presenças de manchas ou pontuações, presenças de pontuações (brânquias). Dentre os peixes aptos para comercialização observou-se que 10% estavam com os seguintes aspectos: erosão nas nadadeiras, muco excessivo, deformidades branquiais, presenças de manchas ou pontuações, presenças de pontuações e congestão nas brânquias, corroborando com o trabalho de (Zmyslowska et al. 2009). Aeromonas sp. foi evidente em 10% das amostra de pele e 100% para amostra de fígado para os peixes não comercializados. Os peixes ditos comercializáveis evidenciaram a presença de Aeromonas sp., obtendo uma porcentagem de 10% para as amostras de pele e 33% para as amostras de fígado. Corroborando com o trabalho de (Kubitza 2005). A amostra da água, evidenciou a presença de Aeromonas spp., enquanto que a amostra de comedouro não foi evidenciado a presença de Aeromonas spp. possivelmente devido a ação antagônica do biofilme frente ao táxon investigado. Outros autores ao estudar presença de bactérias patogênicas em ecossistemas aquáticos, confirmam a presença de Aeromonas spp na água (Akinbowale, et al., 2007; Silva 2010). Os parâmetros físico-químicos realizados estão conforme os limites estabelecidos pelo (CONAMA 2005) com os valores do oxigênio dissolvido 9 mg L-1 O2, condutividade 1,48, temperatura 24,9°C, turbidez 0,04 NTU, pH 6,5. Segundo o CONAMA cada parâmetro tem seu valor máximo, ultrapassado esse valor pode haver consequências para o ambiente aquático, como a eutrofização que é o aumento de nutrientes na água deixando o meio impróprio para a utilização. Houve a presença de Aeromonas hydrophila na água e nos órgãos analisados. Na pele dos peixes caracterizados não comercializáveis e no fígado dos peixes caracterizados comercializáveis, ambos obtiveram uma porcentagem de 33% de Aeromonas hydrophila. O manejo inadequado como super lotação dos viveiros pode ocasionar a intensificação de lesões e a proliferação dos micro-organismos investigados acarretando um problema de interesse publico. Referências Akinbowale, O. L.; Peng, H.; Grant, P.; Barton, M. D. Antibiotic resistance in motile aeromonads and pseudomonads from rainbow trout (oncorhynchus mykiss) farms in Australia. International journal of antimicrobial agents, amsterdam, n. 30, p. 177-182, 2007. http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0924857907001872 Bastardo, A; Ravelo, C.; Castro, N; Calheiros J.; Romalde, J. L. Effectiveness of bivalent vaccines against Aeromonas hydrophila and Lactococcus garvieae infections in rainbow trout Oncorhynchus mykis (walbaum). Revista Fish & Shellfish Immunology, v. 32, p. 756-751, jan/fev., 2012. http://www.elsevier.com/locate/fsi Hirsch, D.; Júnior, D. J. P.; Logato, P. V. R.; Piccoli, R. H.; Figueiredo, H. C. P. Identificação e Resistência a antimicrobianos de espécies de Aeromonas móveis isoladas de peixes em ambientes aquáticos. Revista Ciências Agrárias, Lavras, v. 30, n. 6, p. 1211-1217, nov./dez., 2006. http://www.scielo.br/pdf/cagro/v30n6/a26v30n6.pdf Kubitza, F. Antecipando-se às doenças na tilapicultura. Revista Panorama da Aquicultura, v.15, n 89, p. 8, maio/junho., 2005. http://www.acquaimagem.com.br/docs/Pan89_Kubitza.pdf XIII JORNADA DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO – JEPEX 2013 – UFRPE: Recife, 09 a 13 de dezembro. Costa, A.B. Caracterização de bactérias do complexo de Aeromonas isoladas de peixes de água doce e sua atividade patogênica. São Paulo: Universidade de São Paulo, 2003. 68p. Tese Doutorado. Silva, M. L.da. Pesquisa de Aeromonas spp., Vibrio spp. e da qualidade sanitária de peixes comercializados na cidade de São Paulo. São Paulo: Universidade de São Paulo, 2007. 146p. Tese Mestrado. Silva, R. M. L. Bactérias do gênero Aeromonas e indicadores de qualidade da água em pisciculturas da região da baixada ocidental maranhense. Jabuticabal – São Paulo: Universidade Estadual Paulista, 2010. 91p. Tese Doutorado. Zmyslowska, Korzekwa, K.; Szarek J. Aeromonas hydrophila in fish aquaculture. Disquete. Tabela 1. Quantidade Proceedings, ESVP/ECVP, de peixes referente a cada sintoma externo. Sintomas externos Abdômen comprimido (barriga seca) Presenças de manchas ou pontuações Lonas de congestão ou hemorragias Lonas de descamação Lesões corporais (furúnculos) Muco excessivo Congestão (brânquias) Presenças de pontuações (brânquias) Erosão (nadadeiras desfiadas) Congestão (nadadeiras) Deformidades Coloração anormal Lesões corporais (necroses) Lonas de necrose (brânquias) Fungos Coloração anormal (palidez) Distensão abdominal (ascite) Dilatação do ânus Exoftalmia Não comercializados 1 Comercializados Total 0 1 3 3 6 1 0 1 1 2 3 2 3 2 2 3 3 3 3 4 6 5 6 2 1 2 1 1 1 1 0 0 0 0 3 1 3 0 0 2 3 1 1 1 1 5 2 5 1 1 3 4 1 1 1 1