Método Analítico para controle de qualidade microbiológico
de produtos estéreis – TESTE DE ESTERILIDADE
- Conceitos
- Método de inoculação direto
- Método de inoculação Indireto
TESTE DE ESTERILIDADE
Requisito Esterilidade é imprescindível para :
- Produtos injetáveis,
- Preparações oftálmicas
- Produtos para a saúde (Implantes cirúrgicos, suturas, seringas,
agulhas descartáveis, etc)
É uma metodologia analítica microbiológica usualmente
empregada nestes produtos e está descrita em diversas
farmacopéias, tais como a brasileira, americana, européia,
britânica, entre outras.
TESTE DE ESTERILIDADE
Finalidade:
- Avaliar a ausência de microrganismos viáveis em produtos que
foram submetidos a algum processo de esterilização, durante
sua fabricação.
- Verifica a qualidade do processo de esterilização empregado
durante a fabricação de produtos farmacêuticos estéreis.
TESTE DE ESTERILIDADE
Condições de trabalho:
a) Área para realização do teste / Qualidade do ambiente:
- Deve ser realizado em sala pequena, com controle de ar (Sala
limpa) para evitar contaminação do teste – resultado falso
positivo.
- Na sala limpa, realizar o teste em capela com fluxo laminar
horizontal.
b) Analistas
- Devem ser treinados para o trabalho de técnicas assépticas
- Correta paramentação
TESTE DE ESTERILIDADE
Amostragem de acordo com a FB IV – 1988
a) Sólido
Número de amostras : no mínimo 20 unidades ou 10% do número
de unidades que constituem o lote.
b) Matéria- prima
√ N (raiz quadrada de N), onde N= número de recipientes do lote.
c) Amostragem de líquido ( ver tabela)
Algodão purificado, bandagem, gaze e materiais relacionados
- 2 porções,da parte mais interna da amostra ( 100 – 500 mg)
Embalagens individuais: 2 porções de 250 - 500mg ou 2
unidades totais.
TESTE DE ESTERILIDADE
Preparo da amostra:
Para evitar resultados falsos, deve-se tomar alguns cuidados,
como:
- Desinfecção da superfície externa ( frasco, ampola, etc) , através
da nebulização ou imersão em soluções anti-sépticas.
- Aguardar a remoção do agente químico.
- As embalagens devem ser abertas somente no momento da
inoculação.
- Identificação das amostras , para evitar misturas.
TESTE DE ESTERILIDADE
1 ) Método direto / Inoculação direta
2) Método indireto / Inoculação indireta
TESTE DE ESTERILIDADE
Metodologias empregadas:
1) Método direto:
A amostra é diretamente inoculada no meio de cultura.
Meio de cultura
a) Líquido
b) Sólido (a amostra é semeada sob a superfície sólida do meio)
Amostras de produtos líquidos: transferência com auxilio de
pipeta, seringa ou diretamente vertido no recipiente
Amostras de produtos sólidos: transferência direta ( uso de
espátula) ou diluição com solução estéril.
TESTE DE ESTERILIDADE
Produtos correlatos: Nem sempre é possível a introdução da
amostra no frasco ( devido ao tamanho do material). Neste caso,
o líquido de lavagem da superfície interna ou de ambas será
transferido para o meio de cultura.
Limitações do método direto
Amostragem restrita / pequena
Aprovação de lote contaminado
Risco de inibição do cresc. de m.o
( residual de agente antimicrobiano)
TESTE DE ESTERILIDADE
Cuidados que devem ser tomados no método direto:
Deve-se tomar cuidado com amostras de materiais que
possuem conservantes / substâncias antimicrobianos:
resultado falso- negativos.
- Produtos que
antimicrobianos:
contenham
conservantes
/
agentes
a) Diluição da amostra – Concentração do agente inibidor
seja menor que a concentração mínima inibitória.
b) Adição de agentes inativadores específicos – inativam o
conservante / agente inibidor da amostra.
TESTE DE ESTERILIDADE
2) Método indireto ou por filtração:
Baseia-se na filtração da amostra em membrana estéril.
O filtro é transferido assepticamente para o meios de cultura
específicos.
- Foi primeiramente utilizado para produtos que continham
conservantes / agentes antimicrobianos , os quais não podiam
ser inativados para inoculação por método direto.
Membranas filtrantes : escolhida de acordo com o material a ser
testado e sem afinidade pelo agente antimicrobiano.
Mais utilizada: Membrana composta por ésteres de celulose
Método indireto ou por filtração:
TESTE DE ESTERILIDADE
Vantagem do Método indireto :
Como o produto não entra em contato com o meio de cultura, a
preocupação com resultado falso negativo, devido a presença
de agentes inibidores, torna-se menor.
Desvantagem:
Porém, neste método, há maior manipulação da amostra,
podendo ocasionar resultados falso-positivos.
TESTE DE ESTERILIDADE
3) Método indireto por sistema fechado
Steritest® : sistema fechado para teste de esterilidade em
produtos farmacêuticos
- Não há manipulação da membrana filtrante
- Diminui-se os riscos de contaminação durante o teste
TESTE DE ESTERILIDADE
Método indireto por sistema fechado
Vantagens:
- Facilidade operacional.
- Menor risco de resultados falso-positivos.
- Maior representatividade estatística.
- Abrangência a produtos com grande s volumes – 1ml até
5L.
TESTE DE ESTERILIDADE
Meios de cultura:
- Geralmente são empregados meios líquidos (caldos) para
crescimento de bactérias mesófilas, psicrófilas, fungos e
leveduras.
- Utilizam-se no mínimo 2 meios de cultura, porém, algumas
farmacopéias recomendam de 3 a 4 tipos de meios diferentes.
-Ex.:Caldo Tioglicolato, Caldo caseína soja, Caldo Sabouraud
Tempo de incubação: 14 dias , de acordo com a FB IV edição
(1988)
TESTE DE ESTERILIDADE
Interpretação ( FB IV – 1988)
- Turvação do meio de cultura : presença
viáveis
de microrganismos
- Não turvação do meio : ausência de microrganismos viáveis
Presença de microrganismos no teste (contaminante)
a) Identificação do contaminante
b) Realização do primeiro reteste
Presença de contaminante no primeiro reteste
a) Ausência de contaminante – APROVADO
b) Presença: Identificar o contaminante ( se for igual ao do teste
original : Reprovado ; Se for diferente, realizar segundo reteste).
Presença de contaminante no segundo reteste (dobro da
quantidade da amostragem original): Reprovado; Ausência –
Aprovado.