Érika Carvalho Silva
Disciplina: Termogênese dos seres vivos
Professora: Ana Maria Landeira
Tecido adiposo marrom e UCP 1
Modulação de T3 e T4 por D2 e D3
Objetivo
Investigar se a termogênese insuficiente no BAT
de camundongos D2KO é proveniente de um
desenvolvimento alterado ou da falha em ativar o
tecido maduro.
BAT interescapular se torna evidente em E16.5
Expressão e atividade de D2 e D3
Atividade das deiodades modifica o destino de T4
Mudanças coordenadas nas
deiodinases aumentam a sinalização
dos hormônios tireoidais durante o
desenvolvimento do BAT.
D2KO e D2 het tem níveis normais de T3 no plasma
Assim, as diferenças entre o BAT WT e do D2KO devem ser causadas por
diminuição local da sinalização.
Expressão de genes comuns a adipogênese branca e marrom
Pref1: antiadipogenic preadipocyte factor-1
Dio3: deiodinase 3
C/EBPα: regulador da transcrição na adipogênese – CCAAT/enhancer-binding protein-α
PPARγ2: regulador da transcrição na adipogênese – peroxisome proliferator-activated receptor-γ
αP2: marcador de diferenciação terminal – alvo de PPARγ
Expressão de genes do específicos do BAT
Cidea: moduladora da atividade de UCP1
Expressão de genes importantes para a termogênese do BAT
Dio2: D2KO expressam mRNA não funcional e sem atividade
ACSL5: long-chain acyl-CoA synthetase – papel na β-oxidação
Seriam essas vias alvo de T3?
Diferenciação in vitro de
preadipócitos marrons por
10 dias com 3nM de
insulina.
Dados indicam papel de T3 gerado por D2 no desenvolvimento do BAT.
Modificação da expressão gênica afeta a diferenciação?
BODIPY 493/503: corante para lipídeos
D2KO tem menos mitocôndrias e capacidade oxidativa induzida por cAMP
Forskolin – aumenta níveis de cAMP
Existe um defeito na diferenciação que resulta em um bloqueio substancial na função do
adipócito maduro, como acúmulo de lipídeos e capacidade oxidativa.
BAT do D2KO tem menor defesa antioxidantes
GPx3:
glutathione
antioxidante.
peroxidase
3
–
Msrb2: methionine sulfoxide reductase
B2 – repara proteínas oxidadas
protege contra o estresse oxidativo.
PKD1:
protein kinase D1 –
sinalização em resposta a ROS.
e
regula
Mb: myoglobin – transporte de oxigênio e
ROS scavanger
Diminuição da defesa antioxidante coincide com dano oxidativo
Aumento na peroxidação de lipídeos
Marcação com CM-H2DCFDA
MDA: malondialdehyde – resultado da
degradação de lipídeos polinsaturados por ROS
Ausência de D2 diminui defesas antioxidantes e aumenta dano oxidativo.
Como está a sinalização da insulina?
•
Estresse oxidativo pode levar a resistência a
insulina através de fosforilação inibitória de
IRS1 por IKK (IκB quinase).
Preadipócitos D2KO ativam menos Akt
Inativação de D2 por rT3 leva ao mesmo fenótipo de D2KO
Fosforilação de IRS1 e IκBα indicam ativação de NFκB
Tratamento com ácido ascórbico resgata sinalização da insulina
Defeitos na diferenciação são causados por diferenciação da insulina
Diferenciação com insulina
Diferenciação com IBMX,
dexamethasone e indomethacin
Modelo proposto