Perfil Fitoquímico, extração e isolamento de
metabólitos de plantas medicinais.
Allan Vinícius Félix Lourenço
Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica/PIBIC
Prof Dra Tomoe Nakashima/Ana Cláudia da Silveira/Sabrina Freitas de Oliveira
Introdução/Objetivos
A espécie Eucalyptus grandis pertence à família Myrtaceae. O gênero Eucalyptus possui
cerca de 400 espécies no Brasil, sendo muito usada na medicina popular como no
combate de nefrites, febres, bronquites, asma, males na bexiga, reumatismo, diabetes e
inflamação na garganta. Há relatos na literatura da presença de polifenóis, como taninos
e flavonoides, que podem variar suas concentrações em diferentes espécies de
Eucalyptus. Tendo em vista a necessidade de aumentar o conhecimento sobre esses
metabólitos para possíveis testes biológicos, essa pesquisa tem por objetivo isolamento
e purificação dos flavonoides das folhas do Eucalyptus grandis.
Método
Resultados/Discussão
Cromatografia em papel Whatman 3: resultou em duas frações que foram das bandas de Rf 0,30 e
Rf 0,62, quantidades obtidas dessas foram de 18,5 mg e 5,5 mg respectivamente.
CCD em placa de celulose da banda de Rf 0,30: apresentou duas bandas principais com Rf de
0,77 e 0,92.
Análise espectrofotométrica do Rf 0,77:
Amostra
Preparo do extrato acetônico: Na obtenção do extrato acetônico das folhas do
Eucalyptus grandis, realizou-se um prévio desengorduramento (hexano) e
despigmentação (clorofórmio). Realizou-se a extração por maceração utilizando acetona,
sendo os extratos submetidos aos testes fitoquimicos para detecção de flavonoides e
foram reunidos e concentrados utilizando o rotavaporizador.
Amostra + 3
gotas de
NaOH a
2,5%
Picos: 340,266.
Picos: 271-272;
400-403.
Amostra + 6
gotas de AlCl3
5%
Picos:266; 360;
404
Amostra + 6
gotas de AlCl3
+ 3 gotas de
HCl em água
50/100
Picos: 267-268;
349-352; 391
Amostra
saturada com
Acetato de
sódio anidro
Picos:253; 347348
Amostra
saturada com
Acetato de
sódio anidro e
Ácido bórico
Picos: 260;
367-368
Cromatografia em papel Whatman 3: Do extrato acetônico transferiu-se uma
alíquota para o metanol, para a realização de cromatografias em papel Whatman 3 com
a fase móvel ácido acético a 10%. As bandas correspondentes a dos flavonoides foram
recortadas e colocadas em enlermeyer com metanol.
Cromatografia em camada delgada em placas de celulose: Uma alíquota
das bandas obtidas, foi cromatografada em cromatoplacas de celulose utilizando como
fase móvel clorofórmio/metanol/água/ácido acético na proporção de 36:12:1:1. As
bandas obtidas foram raspadas e colocada em béqueres contendo metanol, foram
agitados e filtrados com papel de filtro após a reextração.
A absorvância obtida é caracteristicas dos flavonoides, em que os picos apresentam as bandas I e II dessa
classe. Sendo que o composto do Rf provavelmente se trata de um flavonol, em que se tem como
caracteristicos absorção da banda I na faixa de 300 a 380 nm, e absorção da banda II em 240 a 280 nm.
Comparando os resultados obtidos com a literatura, o flavonoide sugere ser a galangina ou a fisetina.
Análise espectrofotométrica do Rf 0,92:
Amostra
Análise espectrofotométrica: Com as substâncias obtidas foram feitas soluções
de 0,4 mg/mL e realizou-se análises espectrofotométricas por varredura nos
comprimentos de ondas de 250 a 500 nm. As leituras foram efetuadas com:
•Amostra (0,4 mg/mL)
•Amostra + 3 gotas de NaOH a 2,5%
•Amostra + 6 gotas de AlCl3 5%
•Amostra + 6 gotas de AlCl3 + 3 gotas de HCl em água 50/100
•Amostra saturada com Acetato de sódio anidro
•Amostra saturada com Acetato de sódio anidro e Ácido bórico
Referências
MABRY, T. J., MARKHAM, K. R., THOMAS, M. B. The Systematic Identification of
Flavonoids. Springer Berlin Heidelberg; 1970.
NAKASHIMA, T. Étude phytochemique, évaluation des activités antifongiques et
antivirales de trois Verbenaceae: Lippia alba N.E. Brown, Lippia multiflora Mold,
Citharexylum myrianthum Cham.Thèse, Institut National Polytechnique de Toulouse,
Pico: 267.
Amostra + 3
gotas de
NaOH a
2,5%
Picos: 272;
383.
Amostra + 6
gotas de AlCl3
5%
Picos: 263; 342
Amostra + 6
gotas de AlCl3
+ 3 gotas de
HCl em água
50/100
Picos: 273;
340.
Amostra
saturada com
Acetato de
sódio anidro
Pico: 270
Amostra
saturada com
Acetato de
sódio anidro e
Ácido bórico
Pico: 267
Os resultados são característicos de flavonoides do tipo isoflavona, em que a banda I (300-380 nm)
apresenta pouca absorção no U.V. A partir da comparação com a literatura, a substância obtida do Rf 0,92
pode ser os isoflavonoides irigenina ou iridina.
Conclusões
Diante dos dados obtidos, pode-se concluir que esta pesquisa mostra-se promissora, sugerindo a
continuidade visando à realização de análises por espectroscopia de ressonância magnética nuclear e por
espectroscopia de infravermelho das substâncias obtidas, para que se possam elucidar as estruturas
químicas desses compostos.