QBQ0105-Bioquímica e Biologia Molecular Docentes: Sayuri Miyamoto (B9, sala 951) e Mari Cleide Sogayar (B9, sala 962) Monitores: Priscilla BMC Derogis (B9, sala 951) e Thiago CG Mattos (B9, sala 951) LISTA 1: Ligações químicas e Sistema Tampão 1. Defina um sistema ácido-base segundo Bronsted e Lowry. 2. Qual é a base conjugada em cada um dos pares abaixo: a) RCOOH, RCOOb) H2PO4-, H3PO4 c) RNH2, RNH3+ d) H2CO3, HCO33. Calcule o pH das seguintes soluções: a) HCl 0,2M b) NaOH 0,2M c) HCl 0,05M 4. O que é um sistema tampão? 5. Qual é o pH de uma mistura de 0,042M de NaH2PO4 a 0,058M de Na2HPO4? (pKa=6,86) 6. PARA ENTREGAR Uma prática comum entre competidores de corrida de curta distância é a respiração rápida e profunda (hiperventilação) por cerca de meio minuto para remover o excesso de CO2 de seus pulmões um pouco antes da corrida começar. Nesta situação ocorre um fenômeno denominado alcalose que se caracteriza por uma elevação do pH plasmático. Explique porque o pH sanguíneo aumenta. 7. O controle biológico do pH das células e dos fluidos corpóreos é de importância central em todos os aspectos do metabolismo e atividades celulares, e mudanças no pH sanguíneo têm consequências marcantes. Em indivíduos com diabetes não tratada, a falta de insulina, ou a insensibilidade à insulina, interrompe a captação de glicose do sangue para dentro dos tecidos e força os tecidos a armazenar ácidos graxos como combustível principal. A dependência dos ácidos graxos resulta em um acúmulo de dois produtos (ácidos carboxílicos), cuja dissociação resulta na diminuição do pH sanguíneo, fenômeno conhecido como acidose. A acidose é tratada com insulina. A acidose severa pode ser revertida pela administração intravenosa de solução de bicarbonato. Por que a administração intravenosa de uma solução de bicarbonato aumenta o pH do plasma sanguíneo? 8. Em situações de alcalose recomenda-se que o individuo respire em um ambiente fechado, usualmente um saco de papel. Com base nos seus conhecimentos de bioquímica, explique a lógica desta recomendação. LISTA 2: Aminoácidos 1. Definir aminoácido. 2. Uma dieta parenteral é administrada freqüentemente para crianças que não toleram outro tipo de alimentação; crianças com peso inferior a 1500 gramas que possuem hipomotilidade do trato intestinal e/ou baixa capacidade gástrica; crianças com enterocolite necrotizante; com problemas de absorção; com diarréia intratável; ou com malformações gastrointestinais. Escreva as estruturas dos aminoácidos presentes na dieta parenteral na mistura Trophamine e na mistura HepatAmine. Classifique os aminoácidos quanto à sua polaridade. 2.1. Quais desses aminoácidos possuem carga líquida positiva ou negativa a pH 7,0 ? 2.2. Quais são os aminoácidos aromáticos? Quais são ramificados? Composição de uma Dieta Parenteral Por Ray Duncan, MD, Staff Neonatologist, Cedars-Sinai Medical Center, Los Angeles, California. Uma dieta parenteral é administrada freqüentemente para crianças que não toleram outro tipo de alimentação; crianças com peso inferior a 1500 gramas que possuem hipomotilidade do trato intestinal e/ou baixa capacidade gástrica; crianças com enterocolite necrotizante; com problemas de absorção; com diarréia intratável; ou com malformações gastrointestinais. Nota: Por conveniência todas as referências a “calorias” referem-se a "Kilocalorias" ou "Kcal". A denominação “cc” refere-se a cm3. Componentes de uma Dieta Parenteral (DP) (A) (B) (C) (D) (E) (F) (G) fluidos; carboidratos; eletrólitos; aminoácidos; lipídios; vitaminas; traços de minerais. Quando uma criança está em DP, o objetivo é proporcionar pelo menos 100-110 cal/kg/dia. Isto pode ser obtido se puderem ser administrados 150 cc/kg/dia de 12,5% dextrose; 2,5 g/kg/dia de aminoácidos e 3,0 g/kg/dia de lipídios intravenosos. (A) Fluidos – Em geral 80-100 cc/kg/dia (recém nascido) (B) Carboidratos - Dextrose, um dos isômeros da glicose que fornece 3,4 cal/g. (C) Eletrólitos – Sódio: 3 meq/kg/dia. Aproximadamente 80% do sódio corporal está disponível para o metabolismo. O restante está fixado nos ossos. Sódio existe predominantemente como íon extracelular. Potássio: 2 meq/kg/dia. A maior parte do Potássio é intracelular, onde é o cátion predominante. 75% do potássio corporal está no músculo. Cloreto: 2-6 meq/kg/dia. Este elemento está presente no corpo como íon extracelular. Cálcio: Cálcio é administrado como uma solução 10% de gluconato de cálcio e a dose usual é 2 cc/kg/dia. Quase todo o cálcio corporal está localizado nos ossos. Fósforo - 1 meq/kg/dia administrado como fosfato de potássio. Fosfato desempenha um papel importante no metabolismo. É um substrato vital para os ossos. Magnésio: 0,5 meq/kg/dia, administrado como sulfato. Aproximadamente 60% do magnésio do corpo está fixado nos ossos. O restante é principalmente intracelular. (D) Aminoácidos Aminoácidos são administrados sob forma de “Trophamine”, uma solução 6% de aminoácidos sintéticos, representados por fenilalanina, glicina, metionina, tirosina, histidina, ácido glutâmico e ácido aspártico. Cisteína pode ser adicionada à Trophamine. Na DP começar com Trophamine na dose de 0,5 g/kg/dia. A mistura HepatAmine pode ser usada no lugar da Trophamine. HepatAmine contém altas concentrações dos aminoácidos isoleucina, leucina e valina, e baixas concentrações de metionina, fenilalanina e triptofano. (E) Lipídios Lipídios são administrados por via intravenosa e a emulsão não é adicionada diretamente à dieta parenteral, mas administrada separadamente. Os lipídios apresentam o maior conteúdo calórico da dieta. Pode ser usada uma solução 20% (Intralipid - Cutter Labs), administrando-se 2,0 cal/cc. A solução Intralipid é composta por óleo de soja, fosfolípides da gema do ovo e glicerol. O ácido graxo mais abundante na emulsão é o ácido linoleico (54%), seguido por oleico (26%), palmítico (9%), e linolênico (8%). As necessidades de ácidos graxos essenciais são obtidas com 0,5 gm/kg de Intralipid. (F) Vitaminas As vitaminas são adicionadas à dieta a partir de uma solução Pediatric MVI. A dose desta solução é 1,7 ml/kg/dia. Uma ampola de 5 ml da Pediatric MVI contém: Biotina 20 mcg Dexapantenol 5 mg Ácido Fólico 140 mcg Niacina 17 mg Riboflavina 1.4 mg Tiamina 1.2 mg Vitamina A 2300 IU Vitamina B6 1.0 mg Vitamina Bl2 1 mcg Vitamina C 80 mg Vitamina D 400 IU Vitamina E 7 IU Vitamina K 200 mcg (G) Minerais Traço Elementos Traço Dose diária recomendada Zinco 150 mcg/kg, <14 d 400 mcg/kg, >14 d Cobre 20 mcg/kg Manganês 2-10 mcg/kg Cromiuo 0.14 - 0.2 mcg/kg Selênio 2.5-3 mcg/kg 3. A histidina possui 3 grupos funcionais ionizáveis. Escreva as equações de equilíbrio para as suas 3 ionizações e assinale o pKa adequado para cada ionização. Qual é a carga líquida na molécula de histidina em cada estado de ionização. 4. Desenhe a curva de titulação dos aminoácidos glicina e glutamato indique os valores de pKa de cada grupo ionizável. Indique também o pI destes aminoácidos. Em quais faixas de pH estes aminoácidos funcionariam como bons tampões? 5. PARA ENTREGAR Um peptídeo possui a sequência: Glu-His-Trp-Ser-Gly-LeuArg-Pro-Gly a) Qual a carga líquida da molécula em pH 3, 8 e 11. b) Estime o pI deste peptídeo 6. As histonas são proteínas encontradas no núcleo de células eucarióticas, fortemente ligadas ao DNA, que possui muitos grupos fosfato (cargas negativas). O pI das histonas é muito alto, em torno de 10,8. Quais resíduos de aminoácidos precisam estar presentes em quantidades relativamente elevadas nas histonas? De que forma estes resíduos contribuem para a forte ligação das histonas ao DNA? LISTA 3: Proteínas Para estudo: 1. Definir proteína. 2. Esquematizar a ligação peptídica. 3. Desenhe o seguinte peptídeo: Glu-His-Trp-Ser-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly 4. Definir proteínas globulares e fibrosas. Citar exemplos. 5. Definir estrutura primária. 6. Descrever as estruturas regulares – alfa hélice e conformação beta – que compõem a estrutura secundária das proteínas globulares. Desenhe as mesmas. 7. Definir estrutura terciária de proteínas globulares. Esquematizar os tipos de ligações que a mantêm, indicando os aminoácidos que participam destas ligações. 8. Definir estrutura quaternária de proteínas globulares. Citar exemplos de proteínas com estrutura quaternária. 9. Verificar a posição dos grupos polares e apolares dos aminoácidos de uma proteína em solução aquosa. 10. A clara do ovo (albumina) muda de aspecto quando fervida. O leite precipita quando tratado com limão ou vinagre. Por que? Suas propriedades nutricionais são afetadas por estes tratamentos? 11. No peptídeo Arg-Pro-Ala-Tyr-Glu-Ser determine quais aminoácidos são apolares, quais são os polares neutros, os polares carregados positivamente e os polares carregados negativamente. Em pH fisiológico, qual a carga desse peptídeo? Para discutir em aula 12. PARA ENTREGAR Considere as seguintes sequencias de aminoácidos: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Ile-Ala-His-Thr-Tyr-Gly-Pro-Phe-Glu-Ala-Ala-Met-Cys-Lys-Trp16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 Glu-Ala-Gln-Pro-Asp-Gly-Met-Glu-Cys-Ala-Phe-His-Arg a) b) c) d) Onde devem ocorrer dobras ou voltasβ? Onde devem se formar ligações intramoleculares dissulfeto? Assumindo que esta sequencia é parte de uma proteína globular maior, indique a localização provável (superfície externa ou interna) dos seguintes aminoácidos: Asp, Ile, Thr, Ala, Gln, Lys. Explique. Dentre os aminoácidos da sequencia acima cite dois que interajam por pontes de hidrogênio, interações eletrostáticas e hidrofóbicas. 13. Qual é o comprimento de uma cadeia polipeptídica de 80 resíduos de aminoácidos em uma única hélice α?