Avaliação de Biocontroladores Fitopatogênicos através de
Métodos in Vitro , Engenharias e Computação.
DILE PONTAROLO STREMEL(1) DIANE RODRIGUES SILVEIRA (2)
(1) Professor Orientador (2) Bolsista de iniciação Científica do Artigo 170
do Sul de Santa Catarina (UNISUL) – Unidade Acadêmica de Ciências tecnológicas(UNITEC)
Grupo de Pesquisa em Engenharia de Processos(ENGEPRO)
Telefone : 55-48-3621- 3191 e-mail: [email protected] Tubarão S.C – Brazil
1,2Universidade
INTRODUÇÃO
Um dos desafios na elaboração de Meios de Cultura para produção de Bacillus é a obtenção de
matérias primas ou nutrientes de baixo custo. Geralmente as formulações requerem uma série de
componentes que poderiam encarecer o processo se fossem obtidos de fontes sintéticas. Desta forma
surge como alternativa a utilização de efluentes industriais que se tornam potenciais importantes como
constituintes fornecendo elementos químicos e precursores para a biossíntese molecular.
Aparecem como alternativas disponíveis na região, o soro de queijo, o melaço e a água de
maceração de arroz. O fato da região apresentar inúmeras agroindústrias, isto favorece o estudo de
alternativas para identificação das formulações de meios nutricionais de baixo custo.
O desenvolvimento de alternativas para combate de doenças em plantas (Fitopatógenos) destaca-se
com excelente alternativa para a região, uma vez que produtos a base de microorganismos produtores
de antibióticos não causam danos ao homem e ao meio ambiente, apresentando-se como potentes
agentes no controle biológico.
Para analisar o efeito antagônico das formulações contendo Bacillus Subtilis PR29 no crescimento
micelial do Colletotrichum lindemuthianum, utilizou-se a técnica de cultivo pareado em placa de Petri
contendo BDA, possibilitando avaliar o halo de inibição ao longo do tempo, validando estatisticamente os
testes através de um planejamento fatorial fracionário 2n-1 de resolução III, resultando em 5
experimentos sendo 1 no ponto central, com cinco repetições(uma repetição para cada experimento).
OBJETIVOS
RESULTADOS
Tabela 2 – Resultados da aplicação das formulações no halo de crescimento
F1* (Melado); F2* (Soro); F3* (Efluente de parboilização do arroz); + (Limite máximo para a variável); (Limite mínimo); 0 (Ponto central)
Tabela 3 - Coeficiente de regressão para a resposta Halo em 14 dias
2.1 Objetivo Geral
Pesquisar a eficiência de diferentes formulações de produtos biocontroladores a base de
microorganismos como bacilos e efluentes agroindustriais, para testes de antagonismo contra fungos
fitopatogênicos visando a redução de custo das matérias-primas.
2.2 Objetivos Específicos
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Preparar um Biocontrolador utilizando meio alternativo de baixo custo;
Efetuar testes de antagonismo nas formulações, através de técnica do cultivo pareado;
Avaliar a eficiência dos biocontroladores;
Avaliar a metodologia da aplicação dos biocontroladores;
Aplicar metodologias estatísticas para avaliar o efeito destes produtos em cultivo pareado (testes
in vitro).
Figura 1 e 2 - Fungo após 7 dias de crescimento
Figura 3 e 4 - Fungo após 14dias de crescimento
METODOLOGIA
Procedimento estatístico:
Para a otimização das concentrações, foi utilizado o método de planejamento experimental do tipo
Fatorial Fracionário a dois níveis, através do Software Statística 5.1, aplicando metades de fatoriais,
fração ½. O delineamento 23-1 resulta em 4 tratamentos, além disso foi incluído um ponto central e uma
repetição, totalizando em 10 experimentos.
O procedimento empregado inicialmente foi uma técnica mais simples com o objetivo de pré
selecionar algumas variáveis para o meio constitucional através de poucos experimentos visto que,
maior número de experimentos implicaria em dificuldades no preparo dos fungos e na observação dos
resultados de inibição no cultivo pareado devido ao tempo de crescimento do fungo.
Preparo das composições:
Foram feitas, no Laboratório de Análises Clínicas da UNISUL, cinco formulações em Erlenmeyer
com diferentes composições de melado comercial (F1), soro de queijo (F2), efluente gerado da
parboilização do arroz (F3). As concentrações de cada composição (fatores) estão na tabela 1.
Tabela 1 – Planejamento das Concentrações das formulações
Procedimento do cultivo pareado:
Pequenas amostras circulares de 5 mm do fungo Colletotrichum lindemuthianum, labfitop 001-03
raça 73, foram extraídos cuidadosamente de placas mantidas com o fungo de forma a não haver
contaminação. Repicou-se para o centro de 12 placas contendo ágar BDA. Selecionou-se duas delas
para testemunha e as demais foram utilizadas para a inoculação do fermentado.
Após três dias, foram inoculados a 3 cm de distância da colônia do fitopatógeno, 0,2 mL das
formulações contendo o fermentado de Bacillus. Posteriormente efetuou-se as medições do diâmetro da
colônia de C. lindemuthianum nos 7º e 14º dia.
Figura 5 – Diagrama de Pareto. FONTE: Software Estatística. O melado foi o fator que maior teve maior
influencia no crescimento fúngico e menor efeito de inibição.
CONCLUSÕES
Restringiu-se a uma análise fatorial fracionária devido o tempo longo de
crescimento do fungo, e quantidade de experimentos realizados, entretando os
resultados foram satisfatórios possibilitando selecionar as variáveis de maior
influência.
Observou-se que a formulação C4 apresentou uma considerável inibição do
fungo através dos experimentos, sendo validada através do delineamento fatorial
fracionário. A análise estatística através do teste de Hipóteses e Análise da
Metodologia de Superfície de Resposta possibilitou verificar a influência de cada
variável na cultura de fermentação confirmando a formulação C4, com menor teor
de melaço como a que proporcional maior efeito de inibição antifúngica.
Propõe-se para trabalhos futuros a aplicação do planejamento experimental
do tipo fatorial completo e inclusão de mais repetições.
BIBLIOGRAFIA
STREMEL, Dile Pontarolo, JESUS, Joselane Cardoso de, ZILLI, Railene Pezente,
VIDAURRE, Teresa Cesare. Avaliação de Bocontroladores Antifúngicos Pelo Método
de Cultivo Pareado. In: XVII Congresso Brasileiro de Engenharia Química e IV
Cbtermo, 2008. Recife-PE: UFPE/ABEQ, 2008
RODRIGUES, Maria Isabel; IEMMA, Antonio Francisco. Planejamento de Experimentos e
Otimização de Processos. Campinas, SP. 2005.