Microbiologia
Aula prática 7
2012/2013
MJC
12-11-2012
Sumário P5:

Isolamento, cultivo e identificação
Streptococcus spp e Staphylococcus

Identificação das espécie de Streptococcus e
Staphylococcus presentes utilizando:


Teste da catalase
O teste miniaturizado de identificação STREPTO SYSTEM
9R e Staf System 18R. Inoculação da placa (galeria de
testes bioquímicos)

12/11/2012
Caracterização da susceptibilidade a
antibióticos da estirpe identificada por
antibiograma.
Microbiologia 2012/2013
2
Caracterização Fisiológica e Bioquímica de
Microrganismos
o
A informação sobre a forma e dimensão da célula
bacteriana (e das suas colónias) é insuficiente para a
sua caracterização/identificação.
o
É comum que estirpes semelhantes quanto à
morfologia e tipo de crescimento sejam muito
diferentes quanto à sua actividade metabólica.
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
2010/2011
3
Testes bioquímicos:
o Actividade de enzimas e hidrólise enzimática de compostos
o Utilização de fontes de carbono
o Utilização fermentativa de hidratos de carbono
o Sistema de transporte de electrões
o Produção de metabolitos celulares
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
2010/2011
4
Testes bioquímicos miniaturizados
o Consistem numa bateria de reacções bioquímicas e
enzimáticas que produzem alterações de cor
o STREPTO SYSTEM 9R
• um sistema de identificação estandardizado para bactérias
de Streptococcus.
• conjunto de 9 microtubos (poços) com substratos
desidratados
• baseia-se na utilização de meios específicos que permitem
monitorizar reacções bioquímicas e enzimáticas pela
alteração da cor.
• após incubação, os resultados são traduzidos por um código
numérico obtido pelo perfil de cor apresentado nos
diferentes testes.
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
2010/2011
5
Testes bioquímicos miniaturizados
o Os testes bioquímicos miniaturizados são normalmente
desenvolvidos para um grupo restrito de espécies ou estirpes.
o Assim é muitas vezes necessário saber que estamos a usar
um organismo pertencente a um determinado género.
o Neste caso vamos confirmar se estamos a usar Streptococci
ou Staphylococci.
o Como fazemos?
o Usamos a coloração de Gram para ver morfologia,
arranjo e reacção de Gram.
o Usamos o teste da catalase como auxiliar
o A maioria dos Staphylococci são Catalase +
enquanto que a maioria dos Streptococci são
Catalase 12/11/2012
Microbiologia 2010/2011
6
Antibiograma
o Uma das formas de caracterização bioquímica de uma
estirpe é a identificação da sua susceptibilidade a
determinados antibióticos.
o Este item de caracterização assume um papel fundamental
na caracterização de isolados clínicos uma vez que este
resultado pode ser utilizado na definição da terapêutica a
aplicar.
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
2010/2011
7
Antibiograma


12/11/2012
Num antibiograma o
antibiótico impregando
nos discos de papel
difunde-se no agar
criando (ou não zonas de
inibição do crescimento
bacteriano.
É a dimensão das zonas
de inibição que define a
sensibilidade ou
resistência do
microrganismo.
Microbiologia 2012/2013
2010/2011
8
Antibiograma & Concentração
mínima inibitória (MIC)

A versão
anterior é a mais
tradicional mas
épossível
determinar
sensibilidade a
antibióticos por
variantes do
antibiograma: estrip, MICs.
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
9
Trabalho a realizar (Selecção das
colónias a usar):
o Coloração de Gram (Protocolo da aula anterior)
o Teste da catalase (permite a distinção entre Staphylococci e
Streptococci).
• Preparar uma lâmina de vidro com uma gota de peróxido de
hidrogénio a 3%(v/v) e misturar uma amostra da cultura a
identificar (com ansa).
• catalase-positivo (aparecem bolhas; estafilococos)
• catalase-negativo (não há aparecimento de bolhas;
estreptococos).
As bolhas são formadas pelo oxigénio molecular libertado na
reacção da catalase.
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
10
Inoculação das galerias STREP
oPreparar uma suspensão de células (SC)
•Usar as culturas líquidas com streptococci preparadas na
6ªf.
oInocular do sistema STREPTO SYSTEM 9R com:
•0,2ml SC nos poços 1-9
•0,1ml SC no poço 3-IPP
•Colocar um disco no poço 1-PYR
oIncubar 18-24h a 37ºC
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
11
Inoculação das galerias STAF
oPreparar uma suspensão de células (SC)
•Seleccionar uma colónia da placa de agar inoculada na
6ªf e suspender em 5ml de soro fisiológico estéril.
oInocular do sistema STAF 18R com:
•0,2ml SC em todos os poços
•Cobrir os poços 1-ADC e 2-UR com 2 gotas de óleo mineral
•Pôr um disco de xilose no poço 10-XYL e um disco de ribose
no poço 15-RIB.
oIncubar 18-24h a 37ºC
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
12
Trabalho a realizar (Antibiograma):
oRecolher uma colónia do microrganismo usado para a
identificação nas galerias com uma zaragatoa e colocá-la
em 0,5 ml de solução salina estéril.
oAgitar brevemente no vortex.
oUsar a zaragatoa para espalhar o inóculo numa placa com
meio Mueller-Hinton, da maneira mais uniforme possível. (rodar
a placa duas vezes)
oCom uma pinça estéril colocar os discos impregnados com
os vários antibióticos (Amoxiciclina, Metronidazole e
Tetraciclina) na placa. Identificar e inocular 18-24 h na estufa
a 37ºC.
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
13
Recursos
http://www.tgw1916.net/video_pages/Antibiogram_video.html
12/11/2012
Microbiologia 2012/2013
14