Microbiologia
Aula prática 10
2012/2013
MJCorreia
3-12-2012
Sumário P10:

Identificação S. mutans

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Análise de resultados
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O que obtivemos na aula anterior?
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Visualização dos produtos de PCR



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Gel de agarose 1 %, por
electroforese a 80V durante1h20min
Carregar 1/10 de volume do produto
e o marcador de peso molecular
adequado.
Após a corrida corar o gel em EtBr
lavar em água destilada durante 5
minutos com agitação e proceder à
aquisição da imagem.
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Análise de Resultados
Qual o tamanho do fragmento
esperado na reacção de PCR que
fizemos na aula anterior?
 Usar para determinar esse tamanho
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/pri
mer-blast/
 Seguir as instruções no site e
determinar o tamanho do
fragmento.

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Identificação S. mutans
TA
TB TC
????
MW (bp)
10000
3000
1000
800
600
400
200
Figura 1: Legenda a figura: TA-A5,G1,G3; TB-B1 e 2B; TC- G2 C5; ???
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Sabendo que os resultados são os
do slide anterior responda




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Foi possível identificar
Streptococcus mutans em alguma
das amostras? Quais?
Como explica os resultados?
A que se devem as manchas que
estão nos poços?
Para que serve a informação
obtida?
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Usando o site do NCBI determine:

Que fragmentos conseguiria
amplificar com os seguintes
primers?
27F
5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’
1492R
5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’
Que condições de amplificação teria de usar?
Para que serviria esta informação?
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Imagine que obteve o seguinte gel


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Figure 1. Detection of bacterial DNA in oral biofilm samples by PCR amplification. Lane
1 – DNA marker, Ladder I (NZYTech Lda. Portugal); Lanes 2 and 3 are the positive and
negative controls respectively; Lanes 4 and 5 show the PCR product of oral biofilm
samples from the children and the control subject respectively.
Como interpreta os resultados?
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Imagine que obteve o seguinte gel


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Figure 2. Detection of S. mutans in oral biofilm samples by PCR amplification. Lane 1 –
DNA marker, Ladder I (NZYTech Lda. Portugal); Lane 2 was used to be an interval
between the ladder and the samples; Lane 3 is the PCR reaction product of the oral
biofilm sample from the control subject; Lane 4 and 5 are the negative and positive
controls respectively.
Como interpreta os resultados?
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