UNIFESO – Engenharia Ambiental
Prof.: Edson R. Fernandes dos Santos
Aminoácidos
α-Aminoácidos
Estrutura básica
Amina
Variações possíveis
Ácido Carboxílico
Glicina
Alanina
Metionina
Prolina
Fenil-Alanina
Titulação com NaOH 0,1M
Ponto ou pH isoelétrico
Pepitídeos
Ligação peptídica covalente
Serina-Glicina-Tirosina-Alanina-Leucina
Ser-Gly-Tyr-Ala-Leu
SGYA
Proteínas – Basicamente formadas pelos 20 aminoácidos excenciais
Proteínas simples – possuem somente Amino-ácidos
Proteínas conjugadas - proteínas com grupos químicos diferentes de Amino-ácidos
Grupos prostéticos – parte não aminoacídica.
Purificação de Proteínas
Geralmente ligadas ao tecido ou células microbianas
O tecido é macerado
para romper as células e dispersar
seu conteúdo em um tampão
aquoso contendo sacarose
Tecido
homogenizado
Tecido homogeneizado
Centrifugação a baixa velocidade (1.000 g/10 min.)
Sobrenadante centrifugado a velocidade média(20.000 g/20 min.)
Sobren. centrifugado a velocidade alta (80.000 g/ 1 hora.)
Sobren. Centrif. a veloc. muito alta 150.000 g/ 1 hora.)
Proteínas solúveis
Sedimentos contendo
ribossomos e
macromoléculas
Salting out
Geralmente utiliza-se sulfato de amônio para diminuir a solubilidade das
proteínas (forçando precipitação) para facilitar a separação
Separação por Cromatografia em Coluna
Reservatório
Amostra Protéica (em fase móvel)
Matriz sólida (fase estacionária)
Suporte poroso
Efluente