Projeto 6
Coordenador-geral: Sidney J.L. Ribeiro
IES do coordenador-geral: Instituto de Quimica-UNESP
Título do Projeto: "Produção de materiais nanoparticulados para processos baseados em
imunocitoquímica"
Equipe: UNESP, Faculdade de Medicina de Botucatu- UNESP, IPEN
Resumo: Este projeto tem como meta principal o desenvolvimento de materiais nanoparticulados
para utilização em processos baseados em imunocitoquímica. Nanopartículas luminescentes
contendo compostos de ions lantanídeos de silica e polimeros e magnéticas de cobalto e ouro tem
sido preparadas e caracterizadas para posterior funcionalização com anticorpos monoclonais. A
produção de anticorpos monoclonais dirigidos contra antígenos eritrocitários e leucocitários
humanos tem nos primeiros 8 meses de trabalho um conjunto de 25 clones produzidos a partir de
4 protocolos denominados: LEU, LIN-B, GORDS e MSC. Entre os objetivos intermediários
encontram-se:
1. Produzir hibridomas secretores de anticorpos dirigidos contra antígenos eritrocitários e
leucocitários humanos caracterizando-os por diferentes metodologias;
2. Expandir clones secretores de anticorpos dirigidos contra antígenos eritrocitários e leucocitários
humanos subsidiando etapas subseqüentes de purificação e marcação com fluorocromos;
3. Avaliar potencial terapêutico de cada clone obtido;
4. Purificar os anticorpos monoclonais por cromatrografia e comprovação da monoclonalidade;
5. Identificação da especificidade por Western Blotting;
6. Produção de extrato de membrana de leucócito e eritrócito;
7. Validação dos AcMm em amostras de indivíduos normais e de pacientes portadores de
neoplasias hematológicas;
8. Comparação de eficiência frente a reagentes comerciais.
Até o momento, foram produzidos 7932 híbridos, amplificados e clonados 63 cujo desempenho
nas técnicas imunodiagnósticas foram melhores sendo que 25 já foram submetidos a
caracterização que permitiu fechar a especificidade de 6 deles. Destes, 4 podem ter potencial não
somente diagnóstico, também terapêutico. Estes anticorpos estão na fase de aguardar
acoplamento com nanopartícula para posterior análise de desempenho in vitro. Para não usar
anticorpos de valor agregado mais alto, optou-se por expandir, caracterizar e purificar anticorpo
monoclonal dirigido contra antígeno de E.coli para os testes de validação e acoplamento em
nanopartículas. Uma vez o AcMm seja acoplado à nanopartícula, e a melhor técnica de
acoplamento seja validada, demais anticorpos já caracterizados como: anti-HLA-DR, anti-CD45,
abti-CD19, anti-CD107b e anti-CD171.