1- Efeito da Pressão Osmótica no Crescimento Bacteriano
Introdução
Já ouvimos falar inúmeras vezes da pressão osmótica, a força com a qual um
solvente se movimenta, de uma solução menos concentrada para uma solução
mais concentrada, através de uma membrana semi-permeável. Ouvimos falar
também de meios isotónicos, hipo e hipertónicos.
As bactérias são muitas vezes capazes de viver em meios hipotónicos, ou seja
meios em que a concentração de solutos é menor que a sua própria
concentração de solutos. Quando as bactérias são transferidas para meios de
concentração de soluto mais elevada que a do seu soluto interno, elas sofrem o
fenómeno de plasmólise (perda de água). Algumas bactérias conseguem tolerar
concentrações de sal da ordem dos 10% e são chamadas halófilas facultativas,
outras crescem em meios com concentrações de sal de 15 a 20% e chamam-se
halófilas extremas.
Material e Métodos
-caixas de petri com Agar Nutriente com 5% NaCl e 10% de NaCl.
-tubos de ensaio com Caldo Nutriente
-ansas de inoculação
-Bunsen ou lamparinas
-caixas de petri com colónias de Escherichia coli e Staphylococcus sp.
-tubo de ensaio com solução de levedura.
1.- Cada estudante pega numa caixa de petri com agar nutriente+sal (1 com 5%
de sal e outra com 10%) e com uma caneta divide a caixa em 3 partes. Numa
parte fará a sementeira por esgotamento da E. coli, noutra parte dessa caixa fará
a sementeira de Staphylococcus sp. e na 3ª parte da caixa fará a sementeira da
levedura. Não se esqueça de anotar em cada porção da caixa o que foi semeado.
Como já foi explicado em aulas anteriores as ansas de inoculação são
desinfectadas á chama antes e depois das sementeiras.
2- Inverter as placas e incubar a 37oC por 48h. Após esse período os alunos
observarão as diferenças de crescimento obtidas.
2- Alimentos Fermentados
Choucrote, "Sauerkraut":
Muitas bactérias metabolizam carbohidratos, aminoácidos e outros substractos
através de fermentação. Como já focado anteriormente a fermentação ocorre em
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condições de anaerobiose, tendo como aceitador de electrões um metabólito
intermédio. Fungos (e protozoários) utilizam também processos fermentativos
para obtenção da sua energia.
A fermentação é um dos processos de preservação de alimentos. A choucrote
(SauerKraut), couve fermentada, resulta da actividade de bactérias
fermentativas ácido lácticas. Neste processo há produção de ácido e inibição do
crescimento de outras bactérias que iriam provocar a putrefacção da couve.
Assim para preparar a choucrote a couve é cortada em camadas finas, e
colocada num recipiente com sal. O sal provoca a extracção do sumo da couve.
O sumo da couve contem açúcares dissolvidos. Esse ambiente de sumo e sal é
propício à propagação de bactérias fermentativas, as quais fermentam o açúcar
em ácidos orgânicos (ácido láctico). No caso das plantas, as bactérias ácido
láctico presentes pertencem aos géneros, Leuconostoc (esféricas) e Lactobacillus
(bastonetes).
Material e Métodos
-couve coração
-tinas ou frascos de vidro
-sal de cozinha
1- Cortar uma couve coração bem fina e colocar numa tina de vidro em
camadas alternadas com sal.
2- Comprimir bem as camadas até se notar o aparecimento do sumo da couve.
3- Cobrir a tina com um pano limpo e incubar a 30oC.
4- Examine a couve passados 4 dias, uma semana e 2 semanas após a
incubação.
5- Prove e cheire a couve de cada vez e anote as suas sensações. Faça uma
preparação com sumo da couve, corado com azul de metileno, e examine ao
microscópio, desenhando a flora que observa.
3- Bebidas Fermentadas
Introdução
O tipo de fermentação que um alimento sofre, depende do seu conteúdo de
carbohidratos e do pH. A fermentação é não só realizada por bactérias mas
também por um tipo de fungos chamados, leveduras.
Até agora não foram mencionados os fungos, sendo dada aqui neste protocolo
uma pequena introdução teórica sobre um dos filos Ascomycota. Este filo
engloba fungos com uma estrutura reprodutiva sexuada, ascus. Além de
processo de reprodução sexuada também se reproduzem assexuadamente por
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gemação, fissão, formação de conidia etc. No filo Ascomycota há 4 classes
principais. Uma delas, Hemiascomyceta inclui as leveduras de padeiro e
leveduras do vinho e cerveja. As leveduras são fungos unicelulares. O esquema
em anexo exemplifica o ciclo de vida da levedura Saccharomyces cerevisiae.
Para mais informações sobre fungos consultar par além dos compêndios de
Microbiologia já indicados:
Carlile, M.J., Watkinson, S. (1994). The Fungi. Academic Press.
Kendrick, B. (2003). The fifth kingdom. www.mycolog.com
Um meio líquido ácido contendo carbohidratos fermentáveis é propicio para a
fermentação alcoólica pelas leveduras. A maioria dos sumos de frutos mantidos
a temperaturas de 20-30oC são favoráveis ao crescimento de leveduras, do
género Saccharomyces. Da fermentação dos açúcares dos sumos de frutos pela
levedura, resulta etanol e dióxido de carbono.
Material e Métodos
-sumo de uva
-tubo com levedura Saccharomyces em soro fisiológico
-tubos de ensaio limpos.
1- Inocule um tubo de sumo de uva com 0.1 ml de cultura de levedura.
2- Incube a 25oC até à próxima aula prática.
3- Após uma semana note o aroma e sabor do produto.
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