Eletroforese
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Eletroforese
É um processo que consiste na separação dos componentes
de um sistema através da aplicação de um campo elétrico.
É usado para separar e analisar biomoléculas.
Princípio:
Substâncias em solução que possuem carga elétrica livre,
deslocam-se quando submetidas a um campo elétrico de sentido
invariável.
Para que uma partícula se mova é necessário que possua
carga elétrica livre, isto é, excesso ou diferença de elétrons.
Portanto:
- para o ânodo (+) dirigem-se os ânions
- para o cátodo (-) dirigem-se os cátions
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∑N E
i
E =
i
N
i
=∑
i
Ni
E i = ∑ Pi E i
N
i
Eletroforese
As moléculas são separadas umas das outras conforme o
tamanho, a carga elétrica e a forma.
Separa-se partículas de mesma carga, porém com
quantidades diferente de carga.
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Moléculas grandes migram lentamente, enquanto
moléculas pequenas movem-se rapidamente.
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∑N E
i
E =
i
N
i
=∑
i
Ni
E i = ∑ Pi E i
N
i
Eletroforese
Suportes:
Meio sólido: - Papel
- Acetato de celulose
Meio semi-sólido: - Gel de amido
- Gel de agarose
- Gel de poliacrilamida
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∑ N i Ei
c2 2
m  2
PV = Ni A mu 2 = N A mN i = N A  c 2  = N A ( average kinetic energy / molecule )
E =
= ∑ 3 E i 3= ∑ Pi 2E i  3
N
N
i
i
Eletroforese
Marcadores de peso
molecular são usados
para estimar o
tamanho das moléculas
das amostras.
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Eletroforese: a concentração do gel
A concentração do gel
definirá o tamanho dos
poros a serem
atravessados pelas
moléculas em migração.
Geis muito
concentrados oferecerão
maior resistência à
migração das moléculas.
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Eletroforese
LipoProteínas – unidade de transporte lipídico
- Ultracentrifugação
- Separação por eletroforese
Identificação de 4 faixas lipoproteicas
- Quilomicrons
- Lipoproteína Beta
- Lipoproteína Pré-beta
- Lipoproteína Alfa
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Eletroforese
Hemoglobina
- Hemoglobina anormais
- Carga elétrica
- Ponto isoelétrico
- Hemoglobina S
- Hemoglobina C
- Talassemia Beta
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Eletroforese
Hemoglobina S
- Hemoglobinopatia estrutural
* substituição do ácido glutâmico pela valina
- Indivíduos homozigotos (SS)
- Anemia hemolítica congênita
( anemia falciforme)
- Indivíduos heterozigotos (AS)
- Traço siclêmico
- Geralmente assintomáticos
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Eletroforese
Proteínas:
- aminoácidos como eletrólitos
Proteínas séricas:
- Albumina
- Globulinas (α1, α2, β, δ)
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Eletroforese: métodos de leitura
Densitometria
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Espectrofotometria
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Aplicações da espectroscopia
energia
frequência de
infravisível
ultraraios-X
raios-γ
radiante
rádio
vermelho
violeta
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Técnica
NMR
Absorção
Absorção
Absroção
Absorção
Técnicas radioAnalítica
Microondas
Fluorescência
Difração
métricas
Fosforescência
Fotometria de
chama
Espectroscopia de
emissão
_______________________________________________________________________________________
Interação
com a
matéria
desintegração
Rotação
do
núcleo
vibração e
rotação das
moléculas
excitação eletrônica dos
átomos de uma moléculs
elétrons
internos são
deslocados
desintegração
do núcleo
_______________________________________________________________________________________
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• A região do espectro do ultravioleta é na faixa de
200 a 400 nm e a da luz visível é entre 400 e 800
nm.
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Interação da radiação com a matéria
O que faz com que alguns raios interajam e outros passem através das
coisas?
Dois requerimentos devem ser observados para que uma determinada
radiação possa ser absorvida por uma molécula:
1A radiação incidente deve ser de frequência equivalente aquela
rotacional ou vibracional, eletrônica ou nuclear da molécula,
2A molécula deve ter um dipolo permanente ou um dipolo induzido,
ou seja, deve haver algum trabalho que a energia absorvida possa fazer.
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Leis de absorção
Io
Io = 100
Io = 100
I1
I1 = 50
I1 = 50
I2 = 25
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Esquema dos principais componentes de um
espectrofotômetro
• A amostra deve estar em um recipiente (cubeta) de quartzo
quando a radiação for na região espectral do ultravioleta.
Quando for na região da luz visível usa-se os de vidro por ter
uma melhor dispersão.
• Os detectores devem ser altamente sensíveis.
• Os dados obtidos pelo detector são enviados para um
dispositivo de processamento de dados.
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