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X Salão de
Iniciação Científica
PUCRS
Efeito de eliciador biológico em calos de Solanum tuberosum L.
cultivados in vitro
Juliana Gerhardt1, Tamiris Daros Salla1, Leandro Vieira Astarita1
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Laboratório de Biotecnologia Vegetal, Faculdade de Biociências, PUCRS
Aproximadamente 24 % da produção de batata mundial são perdidas devido às
doenças causadas por bactérias, sendo os maiores prejuízos ocorrendo em países
subdesenvolvidos. Pesquisas envolvendo o aumento das respostas de defesa intrínsecas dos
vegetais contra patógenos representam uma abordagem inovadora, possibilitando o
desenvolvimento de produtos e tecnologias que estimulem o uso de moléculas indutoras da
resistência vegetal, reduzindo a aplicação de agrotóxicos. As plantas desenvolveram uma série
de mecanismos de defesa, os quais podem ser induzidos por diferentes moléculas, como
lipopolissacarídeos extracelulares de bactérias, glicoproteínas da parede celular de fungos
patogênicos e outros. A adaptação e a resistência vegetal traduzem-se por profundas
alterações no metabolismo da célula, entre elas a síntese de proteínas e moléculas de defesa,
induzidas através de mecanismos complexos de reconhecimento da presença do patógeno.
Populações de células vegetais homogêneas e com rápida multiplicação são bastante úteis
para estudos de processos fisiológicos em plantas, representando sistemas sensíveis, cujas
características mudam em conseqüência de influências de compostos presentes no meio
extracelular. As culturas de células, sem o sistema de integração da planta como um todo
mostra a resposta em nível celular. O objetivo deste trabalho foi avaliar as alterações
metabólicas em calos in vitro de S. tuberosum cv. Ágata em resposta ao extrato da bactéria
Xanthomonas axononopodis pv. citri. Os calos de batata foram obtidos a partir de segmentos
foliares e de pecíolos, induzidos em meio MS semi-sólido suplementado com 1mg/L de 2,4-D
e 0,5mg/L de cinetina. As bactérias X. axononopodis foram cultivadas em meio LB líquido.
Os extratos bacterianos foram preparados utilizando DO600= 0,5 Abs e autoclavados por
15min a 120 oC. As suspensões bacterianas foram adicionadas ao meio de cultura semi-sólido
nas concentrações de 12,5 e 25% (v/v). Posteriormente, os calos foram inoculados neste meio
e mantidos em sala de cultura por 70h, em temperatura de 25±2ºC e fotoperíodo de 16h. Após
esse período, foram analisadas as atividades das enzimas polifenoloxidases (PPOs), cuja
reação de catálise aumenta a concentração de produtos tóxicos de defesa na planta. Também
foram avaliadas as concentrações de proteínas totais de acordo com o método de Bradford.
Compostos fenólicos totais foram avaliados utilizando-se o reagente de Folin-Ciocaulteau e o
grupo dos flavonóides, avaliados por espectrofotometria utilizando-se a técnica do nitrato de
alumínio. Os resultados foram analisados utilizando o teste de Duncan ao nível de 5% de
significância. As atividades das polifenoloxidases foram promovidas nos calos quando
utilizou-se 25% de suspensão bacteriana (0,44 ∆Abs/min/mg proteína) no meio de cultura.
Contudo, a concentração de 12,5% de suspensão bacteriana, não apresentou diferenças
significativas quando comparada ao controle. Os níveis de proteínas dos calos foram
aumentados nos tratamentos com 12,5% e no controle (17 e 16,2 mg/g MF), enquanto que na
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concentração de 25%, ocorreu a diminuição destes níveis (10,3 mg/g MF). As análises dos
níveis de compostos fenólicos e de flavonóides não indicaram diferenças significativas entre
os tratamentos testados. O extrato bacteriano na concentração de 25% foi eficiente na indução
do aumento das PPOs, indicando uma resposta de defesa das células em cultura. Contudo, não
se observou alteração nos níveis de compostos fenólicos envolvidos nesta via de defesa.
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