MESTRADO
CIÊNCIAS DA SAÚDE
DELEÇÃO DA PROTEÍNA HRP2 EM ISOLADOS DE PLASMODIUM FALCIPARUM DA AMAZÔNIA LEGAL
THAMIRES OLIVEIRA GASQUEZ MARTIN
Introdução: O método mais confiável de diagnóstico de malária é a microscopia de esfregaços
sanguíneos corados pelo Giemsa. No entanto, o método implica a existência de microscopistas
qualificados, o que não acontece na maioria das regiões onde o risco de transmissão é maior. O
desenvolvimento de testes de diagnóstico rápido (TDR) nas últimas décadas representa alternativa
promissora para o diagnóstico da doença em áreas remotas, principalmente onde inexistem as
condições adequadas para a microscopia. Atualmente existem testes que se baseiam em três antígenos
proteicos do Plasmodium: a proteína 2 rica em histidina (HRP2), a aldolase e a desidrogenase lática
(LDH). Os testes baseados em LDH são menos sensíveis do que os baseados na HRP2 e os testes
baseados em aldolase conseguem detectar a infecção provocada por diferentes parasitas.A HRP2 é o
antígeno de eleição para a detecção de malária em testes de diagnóstico rápido, pois essa proteína
encontra-se na circulação sanguínea em concentrações que permitem a sua detecção mesmo com um
nível de parasitemia baixo (250 parasitas/µL). A elevada especificidade da PfHRP2 com o seu anticorpo
monoclonal permite a sua aplicação em testes de diagnóstico rápido com sensibilidade e especificidade
semelhantes às da microscopia e não exigem mão-de-obra especializada ou infraestruturas complexas.
No entanto, a proteína tem se mostrado bastante polimórfica, resultando em alta frequência de
resultados falso-negativos dos TDRs baseados em HRP2. Embora já estabelecida, essa diversidade
genética do gene que codifica a PfHRP2 ainda não foi devidamente investigada em muitas áreas
endêmicas.
Objetivo: Determinar a prevalência de isolados de P. falciparum com a deleção desses genes em
pacientes com malária falciparum da Amazônia Legal, e discutir as implicações disso no diagnóstico da
malária por meio dos testes rápidos.
Método: Foram incluídos no estudo todos os pacientes portadores de malária causada pelo P.
falciparum que demandaram Laboratório de Malária do Hospital Universitário Júlio Müller no período
de dezembro de 2011 a abril de 2014. O diagnóstico da malária foi feito pela microscopia, pelo teste
rápido baseado em HRP2 e pela Nested-PCR (Snounou et al., 1993). Posteriormente, as amostras foram
testadas em PCR semi-Nested para investigação da deleção da HRP2, utilizando os primers Pfhrp2-F1 e
Pfhrp2-R1 na 1ªreação, na 2ªreação foi utilizado os primers Pfhrp2-F2, Pfhrp2-R1 mais o produto da
primeira reação. O estudo foi aprovado pelo CEP/HUJM pelo Parecer 242.721.
Resultados: De 135 amostras confirmadas de monoinfecção pelo P. falciparum em gota-espessa, seis
(4,4%) apresentaram TDR negativa. Dessas, o gene que codifica a PfHRP2 foi constatado em três. Apenas
três (2,2%) apresentaram evidências de deleção do gene. Estes resultados mostram a presença, embora
em baixa frequência, da deleção do gene HRP2 em isolados de P. falciparum na Amazônia brasileira,
apontando para a necessidade de cautela na interpretação de resultados negativos, quando esses testes
rápidos forem utilizados isoladamente para o diagnóstico da malária em nosso meio.
PRÓ-REITORIA DE ENSINO DE PÓS-GRADUAÇÃO
VI MOSTRA DA PÓS-GRADUAÇÃO/2014