UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA
INSTITUTO DE QUÍMICA
Departamento de Química Orgânica
Grupo de Estudo de Substâncias Naturais Orgânicas - GESNAT
Citotoxicidade da 4-n-propilcumarina mammea B/BA
isolada de Kielmeyera argentea contra células U251 de
glioblastoma humano
Autor: Heiter Boness [email protected]
Orientador: Prof. Dr. Frederico Guaré Cruz
Introdução
Glioblastoma multiforme é um tumor maligno primário do SNC
classificado pela OMS como astrocitoma grau IV
Glioblastoma observado através de Ressonância Magnética por Imagem
v
v
Introdução
Glioblastoma multiforme
Tratamento: cirurgia, radioterapia e quimioterapia
Sobrevida: 12 meses
NH2
O
N
N
N
N
N
O
Custo total > R$20.000,00
temozolomida (Temodal®)
v
Introdução
Gênero Kielmeyera (Calophyllaceae):
endêmico da América do Sul;
agrega cerca de 40 espécies.
No Brasil, ocorrência destaca-se nos biomas Cerrado e Mata Atlântica
K. coriacea
(pau-santo)
K. variabilis
(malva-do-campo)
v
Introdução
Química do gênero Kielmeyera
O
O
OH
OH
HO
O
O
O
O
O
4-Alquil e 4-fenilcumarinas
Xantonas
OMe
O
OH
O
OMe
O
OH
O
Bifenilas
Derivados poliprenilados do floroglucinol
Cortez et al., Phytochemistry, (47), 1367-1374, 1998
Gottlieb et al. Phytochemistry, (8) 665-666, 1969
Nogueira et al. Biochem. Syst. and Eco., (36) 921–924, 2009
Almeida et al. Tetrahedron Letters, (52) 7108-7112, 2011
v
Introdução
Kielmeyera argentea
Cruz et al. Phytochemistry, (48) 4, 703-706, 1998
O
O
HO
O
HO
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
OH
O
O
O
O
OH
O
O
O
O
O
Constituintes químicos isolados a partir do caule de K. argentea
O
v
Introdução
As 4-alquil e 4-fenilcumarinas
OH
1´´
OH
1'
6
O
2
8a
HO
1'''
O
1'
1´´
4a
O
O
4a
6
2
HO
8a
1'''
O
O
v
Atividade citotóxica
Linhagem de células humanas KB
GUILET et al., Journal of Nature Products, 64, 563-568, 2001
Calophyllum dispar
OH
O
O
OH
R
HO
O
O
O
R
O
O
O
OH
ED50 = 9 μg/mL
ED50 = 6 μg/mL
ED50 = 15 μg/mL
ED50 = 5 μg/mL
R
v
Atividade citotóxica
Linhagens de células do câncer de colón
YANG et al., Journal Planta Médica, 71, 852-860, 2005
O
Mammea americana
O
O
O
OH
HO
OH
O
O
O
HO
O
O
IC50
IC50
SW-480
14,2 μM
14,7 μM
HT-29
12,3 μM
12,5 μM
HCT-116
11,5 μM
12,0 μM
O
v
Atividade citotóxica
Testes in vitro contra linhagen de células tumorais U251
REYES-CHILPA et. Life Sciences, 75, 1635-1647, 2004
Calophyllum brasiliense
OH
O
OH
HO
HO
O
O
O
O
O
IC50 = 0,59 μM
IC50 > 25 μM
O
v
Atividade citotóxica
Testes in vitro contra linhagen de células tumorais U251
REYES-CHILPA et. Life Sciences, 75, 1635-1647, 2004
Calophyllum brasiliense
OH
OH
HO
O
HO
HO
HO
O
O
O
O
O
O
O
R
R=
R=
mammea B/BA ciclo F
R=
mammea C/OB
mammea B/BB
mammea B/BB ciclo F
IC50 = 1,47 μM
IC50 = 9,4 μM
mammea C/OA
mammea B/BA
R=
R=
R
R
R=
O
O
IC50 = 1,85 μM
Objetivos
v
 Estudar a química das raízes de Kielmeyera argentea;
 avaliar a citotoxicidade in vitro das 4-alquil e 4-fenilcumarinas
isoladas de K. argentea frente a células de glioblastoma humano
da linhagem U251.
Parte experimental : coleta
Um espécime de K. argentea foi coletado na restinga do Parque
Metropolitano do Abaeté, Salvador - BA e identificado pela botânica
Msc. Maria Lenise S. Guedes (IBIO-UFBA)
Espécime de K. argentea e Parque Metropolitano do Abaeté, Salvador - BA
v
Parte experimental : isolamento e purificação
Procedimento experimental para o isolamento e purificação das substâncias
presentes no extrato hexânico das raízes de K. argentea
v
Parte experimental : análise espectrocópica
Técnicas de RMN de 1H e 13C uni- e bidimensionais
RMN Varian Inova 500
v
Determinação estrutural: substância 1
0.95
15
0.97
14
13
12
11
10
9
8
7
Chemical Shift (ppm)
v
1.09
6
1.27
2.78 2.83 2.69 1.63 3.79 3.96 9.74 15.54
5
4
3
2
Espectro de RMN de 1H [500 MHz, CDCl3, δ (ppm)] da substância 1
1
0
Determinação estrutural: substância 1
v
e
5-OH
7-OH
H-3
e
0.95
15
0.97
14
13
12
11
10
9
8
7
Chemical Shift (ppm)
1.09
6
1.27
2.78 2.83 2.69 1.63 3.79 3.96 9.74 15.54
5
4
3
2
Espectro de RMN 1H [500 MHz, CDCl3, δ (ppm)] da substância 1
1
0
Determinação estrutural: substância 1
v
OH
HO
O
1.0564
1.0429
2 CH3
O
O
-CH2
3.1872
3.1737
mammea B/BA
5.4
5.3
5.2
5.1
5.0
4.9
4.8
4.7
4.6
4.5
4.4
4.3
4.2
4.1
4.0
Chemical Shift (ppm)
3.9
3.8
3.7
3.6
3.5
3.4
3.3
3.2
3.1
3.0
2.9
2.8
2.7
2.6
2.5
2.4
2.3
2.2
2.1
2.0
1.9
1.8
1.7
1.6
Chemical Shift (ppm)
0.9983
2.3317
2.3182
2.3047
2.2912
2.2782
2.2648
2.2513
1.7003
1.6852
1.6707
1.6551
1.6406
1.6261
-CH
1.0154
-CH2
2.9268
2.9252
2.9574
2.9558
2.9423
2.9408
3.5198
3.5053
5.2636
5.2490
5.2345
5.5
-CH3
1.8974
1.8959
1.8471
1.8445
-CH2
-CH2
-CH
1.0305
2 CH3
1.5
1.4
1.3
1.2
1.1
Ampliação do espectro de RMN 1H (região entre δ 0 - 2,8) da substância 1
1.0
0.9
0.8
0.7
0.6
Substâncias isoladas das raízes de K. argentea
v
OH
OH
O
HO
O
O
O
HO
O
O
O
1
2
OH
OH
HO
O
O
O
HO
O
O
3
4
O
Avaliação da atividade citotóxica
v
Laboratório de Neuroquímica e Biologia Celular (LabNq) - ICS - UFBA
 Ensaio in vitro utilizando células de glioblastoma
humano da linhagem U251
 Condições de cultivos: 37 °C, 5% CO2, 72 h
 A substância testada foi solubilizada em DMSO
 Avaliação da viabilidade celular:
nível de redução do MTT
H3C
H3C
N
N
H3C
S
H3C
N
N
N
N
+
NAD
EC H
MTT
NADH
S
N
N
N H
N
EC
Formazan
Leitura a 540 nm
Avaliação da atividade citotóxica
v
OH
mammea B/BA
HO
O
O
O
EC50 = 6,6 µM
Gráfico 1. Citotoxicidade da substância mammea B/BA
para células U251 de glioblastoma humano
Avaliação da atividade citotóxica
v
OH
mammea B/BA
HO
O
O
O
EC50 = 6,6 µM
Gráfico 1. Citotoxicidade da substância mammea B/BA
para células U251 de glioblastoma humano
Gráfico 2. Viabilidade celular após tratamento com a
temozolomida: sensibilidade somente a partir de 30 µM
Considerações finais
A
4-n-propilcumarina
v
mammea
B/BA
apresentou
potencial atividade citotóxica in vitro
contra
células de
glioblastoma humano da linhagem U251. Em continuidade a este
trabalho, pretende-se avaliar também a citotoxicidade das demais
4-alquil e 4-fenilcumarinas isoladas das raízes de K. argentea.
Agradecimentos
v
LabNq