50º Congresso Brasileiro de Genética
Resumos do 50º Congresso Brasileiro de Genética • 7 a 10 de setembro de 2004
Costão do Santinho • Florianópolis • Santa Catarina • Brasil
www.sbg.org.br - ISBN 85-89109-04-6
942
[email protected]
Ferreira, DM; Miyaji, EN; Darrieux, MSB; Arêas, AP; Leite, LCC
Centro de Biotecnologia, Instituto Butantan, São Paulo, Brasil
Construção de vetores vacinais
contra Streptococcus pneumoniae
expressando o antígeno Ply
(pneumolisina) mutado e avaliação
de suas atividades hemolíticas
As infecções causadas por Streptococcus pneumoniae representam grande importância para a saúde pública. As duas
vacinas disponíveis atualmente no mercado apresentam obstáculos para sua utilização pelo sistema público
de saúde brasileiro. A vacina composta de 23 sorotipos de polissacarídeos capsulares (PS) purificados de S.
pneumoniae, tem baixa efetividade em crianças e idosos, além de não ser capaz de induzir memória imunológica.
A outra vacina que contém mais sorotipos de PS conjugados a proteínas não correlacionadas a pneumococo,
representa um grande avanço, mas seu custo de produção é bastante elevado. Uma alternativa para uma vacina
abrangente e de baixo custo é identificar um antígeno conservado nos isolados de pneumococo e produzi-lo em
larga escala por tecnologia recombinante, ou conjugá-lo a um PS de cepa prevalente. Outra possibilidade é a
utilização do gene para desenvolvimento de vacina de DNA. Ply (pneumolisina) é uma toxina de pneumococo,
capaz de se ligar ao colesterol da membrana celular de eucariotos, formando poros e causando lise celular. Ply
é ainda capaz de ativar o complemento através de um domínio distinto daquele responsável pela atividade
citolítica. A atividade citotóxica causa a inibição da resposta imune, além de estimular a secreção de citocinas
inflamatórias. Nesse trabalho foram construídos, por mutação sítio dirigida por PCR, dois vetores vacinais
contendo pneumolisinas mutadas: pdB4 (Asp → Asn) e (Trp → Phe) e pdAB4 (Asp → Asn), (Cys → Gly) e
(Trp → Leu). As proteínas expressas por esses vetores foram expressas em Escherichia coli, e purificadas. Suas
atividades hemolíticas foram testadas e verificamos que pdB4 apresenta diminuição da ordem de 103 vezes
essa atividade em relação a pneumolisina nativa, enquanto que pdAB4 apresenta atividade abaixo do limite
de detecção da técnica utilizada. Os experimentos de imunização de camundongos com os vetores vacinais de
DNA e as proteínas purificadas estão em andamento.
Apoio financeiro:CNPq, CAPES, FAPESP e Fundação Butantan.