UPC II – Microbiologia
Aula prática 4
2013/20134
Maria José Correia
7/10/2013
Sumário P4:

Observação de bactérias do biofilme oral
 Preparação de esfregaço
 Técnicas de coloração:

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Colorações diferenciais (Coloração de Gram)
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Técnicas de coloração
o Permitem revelar a forma, a dimensão e os
componentes das células bacterianas, bem como, os
aspetos bioquímicos da sua estrutura.
o Permitem observar células bacterianas em
microscopia de campo claro.
o Como o índice de refração do protoplasma
bacteriano difere muito pouco do meio circundante, é
difícil o exame direto de preparações não coradas, a
não ser que se utilizem técnicas especiais de iluminação.
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Técnicas de coloração
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
Preparação do esfregaço

Fixação do esfregaço

Coloração

Observação ao microscópio
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Preparação e fixação do esfregaço
o Preparado sobre uma gota de água
abrangendo uma superfície de 1 cm2
o As lâminas usadas devem ser lavadas com uma
mistura de álcool-éter (1:1)
o Fixação pelo calor em movimentos circulares.
o Evitar aquecer demasiado a preparação para
não destruir as células
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Em caso de incêndio….
Manter a calma!!… os movimentos rápidos alimentam
a combustão
Tapar o frasco
e a lamparina
NÃO APAGAR O FOGO
COM ÁGUA
Cobertor
Extintor
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Coloração de Gram
• Coloração diferencial
• Distingue bactérias Gram + de bactérias Gram• Indispensável na identificação bacteriana
Gram +
Gram -
http://www.apsnet.org/education/IntroPlantPath/PathogenGroups/bacteria/text/fig12.htm
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Bactérias Gram+ e Gram
Composição diferente da parede celular

Gram+: Parede homogénea e espessa, formada
essencialmente por peptidoglucano, baixa percentagem
de lipoproteínas.

Gram-: Parede fina, camada de peptidoglucano fina,
camada externa complexa, formada por lipoproteínas e
polissacarídeos
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Coloração de Gram
dH2O
dH2O
Violeta de
cristal
Lugol
(iodo)
Álcool
Safranina
1 minuto
1 minuto
30-60 segundos
30-60 segundos
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Objetivo desta coloração


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Usar as colónias isoladas na aula
anterior para fazer a coloração de
Gram e distinguir se são
Streptococcus.
Só depois fazer a repicagem das
colónias.
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Trabalho a realizar:
oObservação das placas feitas na aula anterior.
o Registo das características das colónias.
oIsolamento de colónias (biofilme oral):
• Repicagem (riscado em placa).
• Usar uma placa nova e repicar uma colónia da placa
anterior.
• Coloração de Gram das cplónias para escolher
streptococcus.
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