1
INTRODUÇÃO GERAL
A busca por uma vida saudável e de corpo e mente em harmonia, vem
se tornando uma preocupação de pessoas do mundo inteiro nos últimos anos.
Neste contexto, os consumidores se deparam com a falta do consumo regular
de produtos na forma in natura. As frutas estão, cada vez mais, sendo grandes
aliados na prevenção de doenças, em razão de suas propriedades
antioxidantes atribuídas à presença de compostos fenólicos, dentre eles os
subgrupos antocianinas e flavonóis.
A escassez de trabalhos sobre as frutas nativas da Região Sul da
América do Sul, a crescente demanda de informações, o apelo mercadológico
dos consumidores ávidos por novos produtos e a possibilidade de utilização
das frutas nas indústrias, são parâmetros que impulsionam a pesquisa e
viabilidade de aumento da produção e do consumo dessas frutas.
Vários estudos associam o consumo de frutas com a redução de
diversas doenças crônicas (Kritchevski, 1999; Nicoli, Anese e Parpinel, 1999).
Mansouri et al. (2005) e Vayalil (2002) enfatizam que as frutas são ricas em
compostos solúveis em água, dentre eles, metabólitos secundários (compostos
fenólicos e carotenóides) que possuem ação antioxidante frente a radicais
livres no organismo humano. Os radicais livres, quando em grandes
quantidades
e
em
condições
específicas,
são
responsáveis
pelo
desenvolvimento de doenças crônicas degenerativas, tais como doenças
cardiovasculares e câncer.
Os
compostos
fenólicos
também
apresentam
possíveis
ações
antiproliferativas frente a linhagens de células cancerígenas, impedindo a
2
multiplicação dessas células no organismo humano, combatendo assim o
surgimento e proliferação de diversos tipos de câncer (Fang, Yang e Wu, 2002;
Adhami et al., 2007 e Nooman, Benelli e Albini, 2007 ).
O objetivo principal desse estudo foi quantificar os teores totais de
compostos fenólicos, de antocianinas, de carotenóides e do ácido L-ascórbico
em frutas nativas da Região Sul do Brasil, além de avaliar a atividade
antioxidante e antiproliferativa destas frutas frente a células tumorais.
3
CAPÍTULO I – QUANTIFICAÇÃO DE COMPOSTOS BIOATIVOS EM
FRUTAS NATIVAS DA REGIÃO SUL DA AMÉRICA DO SUL
INTRODUÇÃO
O Brasil possui a flora mais complexa do planeta, com espécies de
frutas nativas adaptados às diferentes condições climáticas, incluindo em clima
equatorial, tropical, semi-árido e temperado. Vários estudos vêm sendo
realizados com plantas (Silva et al., 2005) e frutas tropicais (Lim et al., 2004,
Kukoski et al., 2005), mas são escassos os dados sobre espécies frutíferas
nativas de clima temperado. Os benefícios à saúde, atribuídos aos alimentos
ricos em compostos fenólicos e outros antioxidantes naturais (como ácido
ascórbico e carotenóides) na sua composição química, têm elevado a procura
por novas espécies botânicas que possuam, além dessa propriedade, uma
atividade biológica complementar relevante (Céspedes et al., 2008). Dentre
essas propriedades, destacam-se aquelas relacionadas à proteção contra
doenças crônicas e processos infecciosos ou imunodepressivos (Prior et al.,
1998; Weisburger, 1999; Ross e Kasum, 2002; Adhami et al., 2007). Acreditase que as pequenas frutas nativas de clima temperado, com destaque para as
mirtáceas (gênero Myrtaceae), como pitanga (Eugenia uniflora), araçá (Psidium
cateleianum)
portadoras
e
de
guabiroba
algumas
(Campomanesia
dessas
xanthocarpa),
propriedades.
Essas
possam
espécies
ser
estão
4
amplamente distribuídas nos estados do Sul do Brasil, mas são também
encontradas em outras regiões do País e da América do Sul.
A Embrapa Clima Temperado vem estruturando acervos de acessos de
pitanga e de araçá, buscando desenvolver seleções que contemplem aspectos
agronômicos como porte e arquitetura, produção e qualidade (tamanho,
aparência e sabor) das frutas. A expressão comercial ainda é limitada, devido,
sobretudo, à insuficiente disponibilidade de material propagativo e também pelo
desconhecimento da população sobre essas frutas, tendo em vista que o
consumo ainda é restrito às microrregiões de produção e à população do meio
rural, a qual, pelo conhecimento local, valoriza esses produtos. Além disso, há
materiais ainda não coletados e espécies pouco estudadas, como é o caso da
guabiroba, cereja-do-mato e uvaia. Porém, os efeitos benéficos ao trato
digestivo e respiratório, proteção a infecções, além de “bem estar geral”, são
amplamente divulgados pelos consumidores desses frutos.
As frutas nativas do Hemisfério Norte têm sido estudadas e avaliadas
quanto a sua composição química e propriedades funcionais. Sabe-se que
frutas como o mirtilo, framboesa e amora são fontes importantes de
substâncias com propriedades bioativas, potencializando o mercado de
produção, pela popularização dos benefícios que proporcionam (Pool-Zobel et
al., 1999; Smith et al., 2000).
Ervas, como o chá verde (Camellia Sinensis L. Kuntz), uma bebida
consumida nos países asiáticos e, nas últimas décadas, popularizada em todo
planeta, contém compostos com forte capacidade antioxidante. Essa planta
possui diversos polifenóis importantes na sua composição química, tais como a
(-) epicatequina e (-) epigalocatequina, que têm atraído a atenção da área da
saúde por ser um agente biologicamente ativo com efeitos anticancerígenos,
antidiabéticos,
antiviral,
cardioprotetor,
hepatoprotetor
e
neuroprotetor
(Anderson e Polanski, 2002; Adhami et al., 2007; Nooman, Benelli e Albini,
2007).
5
Nesse estudo, pretendeu-se verificar se as frutas nativas da Região Sul
do Brasil apresentam uma elevada concentração de compostos bioativos
oriundos do metabolismo secundário das plantas, e sua influencia sobre a
atividade antioxidante das frutas.
Para esta finalidade, o objetivo desse estudo foi avaliar a composição
química de espécies nativas da Região Sul do Brasil, quanto aos seus teores
de compostos fenólicos totais, antocianinas totais, carotenóides totais e
conteúdo em ácido L-ascórbico, e avaliar a atividade antioxidante das frutas.
6
REVISÃO DE LITERATURA
2.1 Frutas Nativas
A fruticultura brasileira ocupa posição de destaque no cenário mundial,
devido a sua elevada produção. Apesar do crescimento da área de plantio e
produção de algumas frutíferas, as espécies nativas ainda não recebem a
devida importância econômica, apesar de seu grande potencial de exploração
(D’eeckenbrugge et al., 1998), tanto para o mercado interno como para o
externo (Bezerra et al., 2003), sendo ainda pouco exploradas (Ferreira, 1999;
Harder et al., 2004).
Entre as diversas plantas nativas, destacam-se as da familia Myrtaceae.
Essa família possui cerca de 140 gêneros e mais de 3.000 espécies
distribuídas em dois centros de dispersão, na América e na Austrália. Estes
gêneros incluem frutas comestíveis e de sabor agradável, como o araçá,
cereja, uvaia, guabiroba, pitanga e jabuticaba (Silva et al., 2001).
A pitangueira (Eugenia uniflora) é uma planta originária do Brasil.
Encontra-se por todo o país, desde o Nordeste até o Rio Grande do Sul,
ultrapassando fronteiras inclusive de algumas regiões do Uruguai e Argentina.
É uma árvore que nas regiões subtropicais alcança 2 a 4m de altura, mas,
vegetando sob condições ótimas de clima e de solo, pode alcançar até 10m
quando adulta (Pereira, 2006). A pitanga consiste em uma baga globosa, com
sete a dez sulcos longitudinais de 1,5 a 5,0cm de diâmetro, coroado com
sépalas persistentes que possui aroma característico intenso e sabor doce e
ácido. No processo de maturação, o epicarpo passa de verde para amarelo,
7
alaranjado, vermelho, vermelho escuro, podendo chegar até quase negro (Bezerra,
Silva Júnior e Lerdeman, 2000).
O araçá (Psidium cateleianum) é uma das frutíferas nativas do Brasil que está
sendo muito estudada devido às suas características de alta qualidade da fruta e
alta produção da planta. Segundo Donadio (2000), este arbusto tem porte pequeno a
médio, atingindo de 1 a 10m de altura. A fruta é de coloração amarelo a amareloesverdeado, além de possuir frutas de coloração roxo-avermelhada. Possui sabor
adocicado e é muito consumida em feiras livres, cuja safra ocorre nos meses de
fevereiro a abril (Manica, 2000).
A jabuticabeira (Myrciaria cauliflora) é uma espécie nativa da Mata Atlântica
brasileira, que foi domesticada e incorporada pelos indígenas tupis (Mattos, 1983). A
fruta consiste de uma baga, subglobosa, negra lisa com 1,2 a 2,2cm de diâmetro,
contendo 1 a 4 sementes (Donadio, Môro e Servidone, 2002). Suas frutas são
consumidas in natura ou processadas na forma de geléias, licores e vinhos.
A cereja-do-mato (Eugenia involucrata), também conhecida como cereja-daterra ou cereja-do-rio-grande, também é uma espécie nativa do Brasil. A planta é
rústica e ornamental, com boa formação de copa, podendo ser utilizada para a
arborização urbana. Suas frutas podem ser utilizadas na fabricação de doces,
geléias, licores e na produção de mel (Sanchotene, 1989; Lorenzi, 1998).
A uvaia (Eugenia uvalha), conhecida também por uvalha, é uma árvore de 6 a
13m de altura, dotada de copa arredondada, tronco geralmente ereto, com 30 a
50cm de diâmetro. A época de florescência ocorre entre os meses de agosto a
setembro, com início de maturação dos frutos em setembro, prolongando-se até
novembro. As frutas são druplas globosas de cor amarela e carnosa, contendo de
uma a três sementes. A fruta é muito apreciada na forma de sucos (Lorenzi, 1998;
Andrade e Ferreira, 2000).
A guabirobeira (Campomanesia xanthocarpa) também é uma planta nativa da
Região Sul do Brasil, Uruguai, Argentina e Paraguai; apresenta um grande porte,
atingindo mais de 10m de altura, quando adulta. A guabiroba é uma fruta de
coloração amarelo-esverdeada, consumida in natura ou utilizada na elaboração de
sucos, licores e doces (Biavatti et al., 2004).
8
2.2 Radicais Livres e Atividade Antioxidante
Os consumidores estão cada vez mais preocupados com a qualidade de vida
e em possuir bons hábitos alimentares, como consumir alimentos que ajudem a
manter a boa saúde. As frutas são alimentos excelentes, pois além de possuírem
baixas calorias, contêm quantidades significativas de substâncias antioxidantes, as
quais são capazes de prevenir uma grande variedade de patologias, como câncer,
doenças cardiovasculares, derrames e isquemias (Tavarini et al., 2008). Por esta
razão, frutas e hortaliças representam dentro da pirâmide alimentar, a maior fonte de
antioxidantes naturais na dieta (Tavarini et al., 2008). O crescimento no consumo de
frutas, associado às contínuas melhorias que estão sendo introduzidas na qualidade
dos alimentos, indicam que as frutas e outros vegetais devem ganhar, cada vez
mais, espaço no mercado consumidor (Agostini-Costa, 2003).
Os compostos antioxidantes, presentes nas frutas e hortaliças atuam nas
espécies reativas de oxigênio, que incluem radicais livres reativos, tais como
superóxidos, hidroxilas e peroxila, e também com não radicais, como peróxido de
hidrogênio. Estas substâncias atuam na etapa de iniciação e propagação dos
radicais livres ou supressão da formação dos mesmos (Lim, Lim e Tee, 2007).
Os radicais livres são átomos ou moléculas produzidas continuamente
durante os processos metabólicos e atuam como mediadores para a transferência
de elétrons em várias funções relevantes no metabolismo. As principais fontes de
radicais livres são as organelas citoplasmáticas que metabolizam o oxigênio, o
nitrogênio e o cloro, gerando grande quantidade de metabólitos (Shami e Moreira,
2004). Porém, fontes exógenas também contribuem na formação de radicais livres
no organismo humano, como por exemplo, o tabagismo e a poluição (Elsayed, 2001;
Lachance et al., 2001).
Quimicamente, os radicais livres são quaisquer átomos, moléculas ou
fragmentos de molécula contendo um ou mais elétrons desemparelhados nas suas
camadas de valência (Halliwell e Gutteridge, 1990). Essa configuração faz dos
radicais livres moléculas altamente instáveis, com curto tempo de meia-vida e
quimicamente muito reativas (Pompella, 1997). Das espécies reativas de oxigênio, o
radical hidroxil (OH•) e o ânion superóxido (O2•) são os que têm maior importância
9
biológica, porque são formados durante o processo normal ou exarcebado de
redução de O2 no interior das mitocôndrias (Benzi, 1993).
Diversos estudos têm demonstrado que uma série de doenças entre as
quais,
câncer,
aterosclerose,
diabetes,
artrite,
malária,
AIDS
e
doenças
cardiovasculares podem estar ligadas aos danos causados por formas de oxigênio
extremamente reativas (Brenna e Pagliarini, 2001; Yldrim, Mavi e Kara, 2002). Os
radicais livres podem atacar vários substratos no corpo humano e contribuir para o
desenvolvimento de doenças crônicas, como por exemplo, oxidação da fração LDL
causando doenças cardio-vasculares (Touyz, 2004). À oxidação do DNA pode-se
atribuir um importante papel no desenvolvimento de diversos tipos de câncer (Lim et
al., 2004).
As lesões causadas pelos radicais livres nas células podem ser prevenidas ou
reduzidas por meio da atividade de antioxidantes, sendo estes encontrados em
muitos alimentos. Os antioxidantes são capazes de interceptar os radicais livres
gerados pelo metabolismo celular ou por fontes exógenas, impedindo o ataque
sobre os lipídeos, nos aminoácidos das proteínas, nas duplas ligações dos ácidos
graxos polinssaturados e as bases de DNA, evitando a formação de lesões e a
perda de integridade celular (Bianchi e Antunes, 1999).
Vários estudos têm quantificado a atividade antioxidante em diversos
alimentos, especialmente em produtos de origem vegetal, tais como grãos, vegetais
e frutas (Connor et al., 2002; Karl e John, 2002; Imeh e Khokhar, 2002; Ou et al.,
2002; Sun et al., 2002). O interesse crescente em consumir frutas deve-se ao seu
conteúdo de compostos antioxidantes, além de ser de fácil consumo, já que podem
ser ingeridas frescas, na forma de sucos ou em outros tipos de alimentos
processados.
Especial atenção é dada às frutas, fontes ricas de compostos
fenólicos (Kalt et al., 1999; Robards et al., 1999; Wang e Lin, 2000).
2.3 Compostos Bioativos
De modo geral, as frutas e hortaliças contêm significantes teores de
compostos bioativos com funções fisiológicas e bioquímicas, conferindo benefícios à
10
saúde humana. Nos últimos tempos, os alimentos que contêm grandes teores de
compostos fenólicos, dentre eles as antocianinas, carotenóides e vitaminas, como a
E e a C na sua composição, assumiram o status de “alimentos funcionais”, pois além
de satisfazerem as necessidades nutricionais, oferecem benefícios fisiológicos, tais
como a prevenção de importantes doenças crônicas (Tavarini et al., 2008).
Os compostos fenólicos (Figura 1) compreendem uma grande variedade de
substâncias divididas em várias classes, assim como os ácidos fenólicos (derivados
do ácido hidrobenzóico e ácido cinâmico) e flavonóides (flavonas, flavonoóis,
flavanonas e isoflavonas).
Figura 1. Estrutura química geral de compostos fenólicos.
Esses compostos estão presentes na maioria dos vegetais, frutas, sementes,
chás, vinhos e sucos (Manach et al., 2004; Lu e Foo, 2001; Murthy, Singh e
Jayaprakasha, 2002). Recentemente, os compostos fenólicos têm recebido atenção
desde que estudos epidemiológicos sugeriram que o consumo de alimentos e
bebidas ricos em polifenóis está associado com a redução no risco de doenças
cardiovasculares, derrame cerebral e alguns tipos de câncer. Esses efeitos
protetores têm sido atribuídos às propriedades antioxidantes especialmente dos
flavonóides (Figura 2) (Kaur e Kapoor, 2001). Pesquisa recente conduzida por Lau,
Shukitt-Hale e Joseph (2005) demonstraram que antioxidantes naturais, presentes
em mirtilo (Vaccinium spp.) podem reverter declínios fisiológicos decorrentes da
11
idade avançada, como a perda da função motora. Kraft et al. (2005) relatam que
espécies de mirtilo contêm cadeias de compostos como os fitosteróis, ácidos
fenólicos, flavanas-3-óis, antocianinas e proantocianidinas oligoméricas que
protegem
contra
os
estádios
de
iniciação,
promoção
e
progressão
de
carcinogenesis.
Figura 2. Estrutura química dos principais flavonóides.
As antocianinas (Figura 3), uma subclasse pertencente aos flavonóides, são
amplamente encontrada em frutas, flores e vegetais, em geral, sendo responsáveis
pelas cores laranja, vermelho e azul. Além disso, além da função do pigmento
colorido nos alimentos as antocianinas estão relacionadas com a atividade
antioxidante (Kim, Jeong e Lee, 2003; Philpott, et al., 2004), promovendo efeitos
benéficos à saúde, reduzindo a incidência de doenças crônicas, além de ser um
importante agente antiinflamatório (Wang, Cao e Prior, 1996; Wang e Jiao, 2000).
Estudos em células humanas e em ratos demonstraram que em dietas ricas
destes compostos, as antocianinas podem exercer ação benéfica contra o início e
12
desenvolvimento de doenças cardiovasculares. As antocianinas e os outros
subgrupos de compostos fenólicos, devido à presença de vários radicais fenólicos,
evitam a oxidação da fração LDL e a deposição de gorduras nas artérias (NegreSalvagyre, Salvagyre, 1992). Elas também podem agir na redução de doenças
neurológicas (Andriambelosom et al. 1998; Tsuda, Horio e Osawa, 1998).
Figura 3. Estrutura química das principais moléculas de antocianinas.
Os carotenóides (Figura 4) exercem ações relacionadas à redução do risco de
doenças degenerativas, prevenção da formação de catarata, redução da
degeneração macular relacionada ao envelhecimento e redução do risco de doenças
coronárias (Krinski, 2001). Além disso, os carotenóides desempenham um papel
fundamental como pigmento acessório na fotossíntese, agindo como coletor de
energia e protetor contra foto-oxidação (Krinski, 2001; Silva e Mercadante, 2002).
Fraser e Bramley (2004) associam a alta ingestão de alimentos ricos em β-caroteno
com a redução da incidência de câncer de mama. A luteína está inversamente
relacionada à incidência de câncer de cólon tanto em homens como em mulheres
(Slaterry et al., 2000). Segundo Olson (1999), os carotenóides seqüestram o
oxigênio singlete, removem os radicais peróxidos, modulam o metabolismo
carcinogênico, inibem a proliferação celular, estimulam a comunicação entre células
(junções gap), e elevam a resposta imune.
13
Figura 4. Estrutura química das principais moléculas de carotenóides.
Vários estudos têm investigado o efeito de vitamina C (Figura 5) de frutas e
vegetais e o desenvolvimento de câncer. Estudos epidemiológicos sugerem que
vitaminas antioxidantes, incluindo a vitamina C, em concentrações suficientes inibem
doenças no coração e câncer (Flagg, Coates e Greenberg, 1995). Alguns estudos
recentes têm mostrado uma redução significante no risco de câncer de pulmão pelo
aumento de vitamina C na dieta (Ocké et al., 1997).
Figura 5. Estrutura química do ácido L-ascórbico.
14
Devido às espécies nativas de clima temperado terem co-evoluido em
ecossistema com significativas variações de temperatura, oscilações hídricas, assim
como de luminosidade, acredita-se que essas espécies tenham desenvolvido um
complexo metabolismo secundário, resultando, no mínimo, em frutas ricas nesses
compostos, que além de serem mecanismos de defesa, exercem algum efeito
fisiológico de propriedade terapêutica. Por este motivo, é importante conhecer a
composição química dessas frutas e verificar suas potencialidades como agentes
antioxidantes.
15
MATERIAL E MÉTODOS
3.1 Material Vegetal
Foram utilizadas frutas das espécies Psidium cateleianum (araçá), Eugenia
involucra (cereja-do-mato), Campomanesia xanthocarpa (guabiroba), Myrciaria
cauliflora (jabuticaba), Eugenia uniflora (pitanga), Eugenia uvalha (uvaia), todos da
familia Myrtaceae, colhidos nos anos 2005 e 2008 (Tabela 1). Dos 48 acessos
estudados de frutas de araçá, cereja-do-mato, guabiroba, jabuticaba, pitanga e
uvaia, 44 genótipos foram provenientes do Banco de Germoplasma da Embrapa Clima Temperado, Pelotas/RS. As demais frutas foram coletadas em propriedades
rurais da Região Sul do RS. A colheita das frutas foi realizada no estádio de
maturação característica de cada espécie, pela coloração externa da casca. Após a
colheita, as frutas foram imediatamente congeladas a -80ºC até o momento das
avaliações. Todas as avaliações foram feitas com extratos das frutas com casca,
pois essa é a forma como são comumente consumidos.
Para efeito comparativo, utilizaram-se duas espécies frutíferas, Rubus sp.
(amora-preta) e Vaccinium myrtillus (mirtilo) não nativas da Região Sul, mas que se
adaptaram ao solo e ao clima da região (Tabela 2). Ambas as espécies são
amplamente conhecidas como fontes de compostos biologicamente ativos e de alta
atividade antioxidante. Essas frutas foram colhidas também no Banco de
Germoplasma da Embrapa Clima Temperado, Município de Pelotas/RS.
16
TABELA 1. Frutas nativas da Região Sul da América do Sul utilizadas.
Fruta
Nome Científico
Coloração
Codificação
AR012, AR031, AR052,
AR271, AR462, AR472,
Amarela
AR482, AR492, AR572,
AR582, AR592, AR602,
AR642, AR722, AR732,
Araçá
AR742, AR752
Psidium cateleianum
AR082, AR092, AR101,
AR112, AR182, AR192,
Roxa
AR282, AR292, AR422,
AR442, AR942, AR1002,
AR1012
Cereja-doMato
Guabiroba
Jabuticaba
Pitanga
Eugenia involucra
Campomanesia
xanthocarpa
Myrciaria cauliflora
Roxa
CER3
Laranja
Gua011, Gua023, Gua033
Roxa
JAB3
Laranja
Pit151, Pit711
Roxa
PitH1, Pit401
PitU1, Pit411, Pit492, Pit502,
Eugenia uniflora
Vermelha
Pit532, Pit552, Pit612,
Pit622
Uvaia
1
Eugenia uvalha
2
Laranja
UVI3
3
Colhidos Safra 2005-2006; Colhidos Safra 2006-2007; Colhidos Safra-2007-2008.
TABELA 2. Frutas não-nativas da Região Sul da América do Sul estudados.
1
Fruta
Nome Científico
Coloração
Codificação
Amora-Preta
Rubus sp.
Roxa
AMR1
Mirtilo
Vaccinium myrtillus
Roxa
MIR1
Colhidos Safra 2007-2008.
17
3.2 Avaliações
3.2.1 Determinação de Sólidos Solúveis Totais (SST), pH, Acidez Total
Titulável (ATT) e Relação SST/ATT
Foram realizadas as avaliações de sólidos solúveis totais (SST), pH e acidez
total titulável (ATT) segundo método de Manzino, Silvestrini e Rearte (1987). A
determinação de SST foi feita por meio de um refratômetro manual, com
compensação de temperatura, sendo os resultados expressos em graus Brix. O pH
foi determinado, por via direta, e, potenciômetro digital. A ATT foi realizada por
titulometria de neutralização com hidróxido de sódio 0,1N, sendo os resultados
expressos em mol (m/v) de equivalentes de ácido cítrico.
3.2.2 Determinação de Antocianinas Totais
O teor de antocianinas totais foi determinado por espectrofotometria de
acordo com Lees e Francis (1972). Dois gramas de fruta foram macerados e, em
seguida, 50mL de etanol pH 1,0 foi adicionado para a extração das antocianinas. A
solução foi homogeneizada a cada cinco minutos, em um intervalo de uma hora.
Após esse período, filtrou-se a solução para um balão volumétrico de 100mL e
completou-se o volume. A leitura foi realizada a 520nm, utilizando etanol pH 1,0
como referência. O cálculo da concentração das antocianinas totais foi baseado na
Lei de Beer e os resultados obtidos foram expressos em miligramas de cianidina-3,5glicosídeo por 100 gramas de peso fresco.
3.2.3. Determinação de Compostos Fenólicos Totais
O teor de compostos fenólicos totais foi determinado pelo método modificado
de Folin-Ciocalteu (Singleton e Rossi, 1965). Um grama de polpa do fruto foi
macerado e, em seguida, adicionou-se 60mL de água Milli-Q e 5mL do Reagente
de Folin-Ciocalteu. Seguiu-se a neutralização com 20mL de solução saturada de
18
carbonato de sódio. A absorbância da solução resultante foi medida a 720nm após
um período de duas horas de reação. Como ensaio controle, realizou-se todas as
etapas citadas anteriormente, excetuando-se a adição de um grama de polpa, que
foi substituído por 1mL de água Milli-Q. Ácido gálico foi usado para construir uma
curva padrão (0,00-120,00 mg.100g-1; y = 0,0112 x; R2 = 0,9978). Os resultados
foram expressos em equivalente de ácido gálico (miligramas por 100 gramas de
peso fresco).
3.2.4 Determinação de Carotenóides Totais
O teor de carotenóides totais foi determinado pelo método proposto por
Rodriguez-Amaya (1999). Cinco gramas de amostras foram macerados e adicionouse 2g de celite. Acrescentou-se 20mL de acetona na amostra e homogenizou-se por
10 minutos, e filtrou-se a vácuo. O resíduo foi lavado com acetona até que o mesmo
ficasse incolor. Então, tranferiu-se essa solução para um funil de separação e
acrescentou-se 200mL de éter de petróleo. A amostra foi lavada com água destilada
até remoção completa da acetona. Após a remoção completa do solvente transferiuse a amostra para um balão volumétrico de 250mL e completou-se o volume com
éter de petróleo. A leitura foi realizada a 450nm, utilizando éter de petróleo como
controle, e os resultados foram expressos em microgramas de β-caroteno por grama
de peso-fresco, seguindo a fórmula abaixo:
Carotenóides Totais = Absorbância X Volume Extrato (mL) X 106
2500 X 100 X peso amostra (g)
3.2.5 Determinação do Ácido L-Ascórbico
O método de extração foi realizado segundo Vinci, Rot e Mele (1995). Dez
gramas de amostra e solução de ácido metafosfórico a 4,5% foram deixados em
repouso por uma hora, em frasco protegido da luz. Transferiu-se a amostra para um
balão de 50mL e completou-se o volume com água Milli-Q, filtrando a amostra
19
posteriormente. Centrifugou-se o filtrado a 7000rpm por 10minutos. O sobrenadante
dessa centrifugação injetou-se diretamente no cromatógrafo.
A análise cromatográfica foi realizada em cromatógrafo Shimadzu, equipado
com módulo de mistura de solventes LC-10ATVP, desgaseificador FCV-10AVP,
bomba reodine DGU-14A, sistema de controle SCL-10AVP, forno de coluna CTO10ASVP e amostrador automático SIL-10AF. Foi utilizada uma coluna de separação
analítica de fase reversa, Nova-Pak C18 (3,9cm x 150mm x 4µm). Como fase móvel
utilizou-se dois solventes: (A) solução de ácido acético 0,1% e (B) metanol 100%
(Tabela 3). Injetou-se 10µL de amostra, com fluxo de 0,8mL.min-1, e temperatura de
coluna mantida a 25°C. O tempo de eluição da amostra foi de 12 minutos. A
identificação do composto foi realizada através de informações obtidas dos
espectros de absorção no UV-visível, modelo SPD-10AVVP em um comprimento de
onda de 254nm. Os dados obtidos foram adquiridos e processados com o uso do
software Class-VP, por meio de uma curva de calibração externa quadrática,
preparada com ácido L-ascórbico (reagente padrão com 99,97% de pureza), em
concentrações que variaram entre 10-100mg.100mL-1, utilizando fase móvel e
gradiente de eluição igual ao utilizado. Na determinação de ácido L-ascórbico, com
tempo de eluição de 10 minutos e fluxo de 0,8mL.min-1. Os resultados foram
expressos em miligramas de ácido ascórbico por 100 gramas de peso fresco.
20
Tabela 3. Gradiente de eluição dos solventes A e B na determinação de ácido Lascórbico.
Tempo (minutos)
Solvente A (%)1
Solvente B (%)2
0
100
0
5
98
2
7
98
2
10
100
0
1
2
Solvente A: solução de água Milli-Q:ácido acético p.a. (99,9:0,1% v/v); Solvente B: metanol p.a.
100%.
3.2.6 Determinação da Atividade Antioxidante
Em extratos de fruto, foi quantificado a atividade antioxidante segundo método
adaptado de Brand-Willians, Cuvelier e Berset (1995), que se baseia na redução do
radical estável 2,2-difenil-1-picrylhidrazil (DPPH). Para o preparo dos extratos
utilizaram-se 5 g de polpa de fruta trituradas em Ultraturrax®, aos quais foi
adicionado 20 mL de metanol. Essa mistura foi mantida durante 24 h a 4ºC, após o
qual se centrifugou a 12000g a 4ºC durante 20 minutos. Usou-se 0,1mL de extrato
em 3,9mL de DPPH a 0,1mM, e realizou-se a leitura após 30 minutos de incubação
a 25ºC. Porém, em ensaios preliminares, verificou-se que nessas concentrações
havia a redução total do radical DPPH antes dos 30 minutos preconizados para
algumas frutas. Por isso, para araçás, cereja-do-mato, pitangas e uvaia padronizouse o uso de 0,01 mL de extrato metanólico, e para a guabiroba e a jabuticaba
utilizou-se 0,001 mL. A leitura para estes extratos foi realizada após 1 minuto ao
invés de 30 minutos.
Todas as operações foram realizadas na ausência de incidência direta de luz.
No ensaio controle, ao invés da adição do extrato metanólico, acrescentou-se
apenas metanol. A concentração do radical DPPH remanescente foi lida a 517nm.
Os
resultados
foram
expressos
em
mM
de
Trolox
(6-hidroxi-2,5,7,8-
tetrametilcroman-2-ácido carboxílico), que consiste de um antioxidante sintético de
21
referência. Para a quantificação, foi realizada uma curva-padrão de Trolox, que
variou entre 0,20 a 1,40mM (y = 0,032 x; R2 = 0,9643).
3.3 Delineamento Experimental
O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, com três
repetições para cada unidade de experimental. A unidade experimental consistiu em
500g de cada uma das seleções colhidas. Os dados foram expressos em médias
aritméticas. O teste de Duncan a 5% de probabilidade foi aplicado para determinar
as diferenças das médias. As análises estatísticas foram realizadas com o auxílio do
programa de computação STATISTICA 6.0.
22
RESULTADOS E DISCUSSÃO
4.1 Teor de Sólidos Solúveis Totais, pH, Acidez Total Titulável e
Relação SST/ATT
As frutas de guabiroba foram os que apresentaram os maiores teores de
sólidos solúveis totais (SST), que em média foi de 14,3°Brix. A seleção de pitangavermelha Pit53 foi a que apresentou menor teor de SST de todas as frutas avaliados
neste trabalho, com valor médio de 3,27. Dentro da mesma espécie também houve
diferenças significativas. No caso dos acessos de araçá-amarelo houve variação
entre 5,4 e 10,8°Brix, no araçá-roxo entre 6,4 e 13,6°Brix, na pitanga-laranja entre
7,0 e 9,8°Brix, na pitanga-roxa entre 8,2 e 11,4°Brix e na pitanga-vermelha entre 4,0
e 8,8°Brix. Os teores de SST para as frutas de cereja-do-mato, jabuticaba e uvaia
foram, respectivamente, 6,6°Brix, 12,4ºBrix e 6,0°Brix (Tabela 4).
A diferença significativa entre os acessos de mesma espécie pode ser devido
ao estádio de maturação, pois todas as frutas foram colhidas quando estavam
maduras do ponto de vista de consumo. Observaram-se diferenças entre a
quantidade de frutas por planta e época de floração entre os acessos, o que pode
ser uma das causas dessas diferenças. Os teores de SST podem variar, de acordo,
com o genótipo e fatores climáticos, tais como, a pluviosidade. O excesso de chuvas
ou até mesmo irrigação excessiva diminui o teor de SST nas frutas, em virtude da
diluição do suco celular (Gerhardt et al., 1997; Nogueira et al., 2002).
23
Tabela 4. Teor de sólidos solúveis totais (SST), pH, acidez total titulável (ATT),
relação SST/ATT presentes em frutas nativas da Região Sul da
América do Sul.
Fruta
Araçá
Cereja-do-Mato
Guabiroba
Jabuticaba
Pitanga
Uvaia
Codificação1
AR01
AR03
AR05
AR27
AR46
AR47
AR48
AR49
AR57
AR58
AR59
AR60
AR64
AR72
AR73
AR74
AR75
AR08
AR09
AR10
AR11
AR18
AR19
AR28
AR29
AR42
AR44
AR94
AR100
AR101
CER
GUA/01
GUA/02
GUA/03
JAB
Pit15
Pit71
Pit H
Pit40
Pit U
Pit41
Pit49
Pit50
Pit53
Pit55
Pit61
Pit62
UVI
Cor
Amarelo
Roxo
Roxo
Laranja
Roxo
Laranja
Roxo
Vermelho
Amarelo
SST2
(°Brix)
pH
ATT3
(% ácido cítrico)
SST/ATT4
6,8±0,00rst5
9,6±0,12jl
6,0±0,00u
6,0±0,00u
10,8±0,12fg
9,2±0,12lm
6,0±0,12u
8,6±0,40nop
5,4±0,12v
9,2±0,20lm
11,4±0,31de
10,2±0,12hi
10,2±0,00hi
6,0±0,00ou
9,6±0,00jl
7,2±0,00r
11,2±0,00ef
11,2±0,00ef
10,4±0,12gh
9,0±0,00mn
11,6±0,12de
6,4±0,12tu
11,8±0,00d
10,8±0,00fg
10,0±0,00hij
9,6±0,50jl
8,0±0,12q
13,6±0,00b
10,4±0,20gh
11,8±0,00d
6,6±0,00st
14,0±0,12b
14,8±0,12a
14,0±0,12b
12,4±0,12c
9,8±0,20jk
7,0±0,12rs
11,4±1,30de
8,2±0,12pq
8,5±0,12op
7,2±0,12r
8,4±0,12opq
8,8±0,00mno
4,0±0,00x
6,0±0,00u
8,2±0,12pq
6,8±0,20rst
6,0±1,00u
3,34±0,01pqr
3,57±0,01lm
3,48±0,01n
3,65±0,00ijkl
3,71±0,01ghi
3,99±0,01ab
3,76±0,06efg
3,83±0,00de
3,92±0,00bc
3,80±0,02ef
3,70±0,03ghij
3,75±0,01efg
3,70±0,08ghi
3,66±0,02hijk
3,98±0,03ab
3,60±0,01kl
3,65±0,13ijk
3,26±0,01rst
3,21±0,03tu
3,43±0,00no
3,18±0,01tuv
3,36±0,00op
3,31±0,06pqrs
3,24±0,03st
3,11±0,01vw
3,24±0,02st
3,24±0,01st
3,61±0,01jkl
3,63±0,01ijk
3,48±0,01n
3,70±0,00ghi
4,01±0,03a
3,90±0,05cd
4,03±0,03a
3,32±0,01pqrs
3,00±0,00x
3,35±0,22pq
3,74±0,01fgh
3,08±0,00w
2,92±0,01y
3,51±0,11mn
3,12±0,01vw
3,21±0,05tu
3,27±0,00qrst
3,14±0,01uvw
3,25±0,02st
3,24±0,00st
2,75±0,03z
12,61±0,42fg
9,15±0,64mn
9,73±0,64lm
7,42±0,45qr
9,47±0,13m
7,62±0,20opqr
4,93±0,23vw
7,68±0,06opqr
4,22±0,52wx
7,74±0,35opqr
9,41±0,68m
8,45±0,10no
8,38±0,07nop
7,30±0,13mrs
9,47±0,96m
9,47±0,77m
8,26±0,74opq
14,91±0,19bc
15,23±0,13b
11,84±0,64ghi
16,96±0,29a
9,41±0,29m
12,22±0,45gh
16,90±0,10a
16,19±0,80a
14,34±0,48cd
10,50±0,16kl
11,01±0,16jk
11,14±0,77ijkl
13,63±0,45de
5,12±0,13uv
1,73±0,29z
3,07±0,42y
3,39±0,45y
5,79±0,03u
13,25±1,00ef
6,59±0,07st
7,55±0,39pqr
11,71±0,13hij
13,82±0,35de
3,52±0,19xy
9,79±0,26lm
12,61±0,26fg
9,20±0,13mn
9,09±0,04mn
8,00±0,06opqr
9,92±0,51lm
13,89±1,12de
0,54±0,02fg
1,05±0,06defg
0,62±0,04efg
0,81±0,05defg
1,14±0,03defg
1,21±0,02defg
1,22±0,04def
1,12±0,04defg
1,28±0,13def
1,19±0,03defg
1,21±0,12def
1,21±0,03def
1,22±0,01def
0,82±0,02defg
1,01±0,11defg
0,76±0,07defg
1,36±0,13de
0,75±0,01defg
0,68±0,01efg
0,76±0,04defg
0,68±0,02efg
0,68±0,03efg
0,97±0,05defg
0,64±0,00efg
0,62±0,03efg
0,67±0,02efg
0,76±0,01defg
1,24±0,02def
0,93±0,05defg
0,87±0,03defg
1,29±0,03def
8,09±1,49ª
4,82±2,05b
4,13±0,52b
2,14±0,03c
0,74±0,05defg
1,06±0,03defg
1,51±0,25cd
0,70±0,02efg
0,62±0,03efg
2,05±0,14c
0,86±0,01defg
0,70±0,02efg
0,43±0,02g
0,66±0,01efg
1,03±0,01defg
0,69±0,02efg
0,43±0,04g
1
Araçá(AR), Cereja-do-Mato(CER), Guabiroba(GUA), Jabuticaba(JAB), Pitanga(Pit), Uvaia(UVI); 2Teor de Sólidos
Solúveis Totais; 3Teor de Acidez Total Titulável; 4Relação Sólidos Solúveis Totas/Acidez Total Titulável; 5Médias
seguidas da mesma letra minúscula na linha não diferem entre si, pelo Teste de Duncan (p<0,05).
Dhillon et al. (1990) afirmam que temperaturas médias elevadas e alta
luminosidade também influenciam no teor de SST em razão da maior atividade
fotossintética e maior acúmulo de carboidratos nas frutas. A quantificação
24
dessa variável é importante, pois frutas com teores maiores de SST são mais
indicados para a elaboração de produtos, tais como geléias, doces em massa,
sucos
e
polpas,
obtendo-se
produtos
característicos
sensoriais
mais
agradáveis e com maior rendimento industrial (Pinto et al., 2003).
Dentre os 48 acessos de frutas avaliados, houve diferença significativa
quanto aos valores de pH, que se situaram entre 3,34 e 3,99 para os acessos
de araçá-amarelo, 3,11 e 3,99 para araçá-roxo, 3,70 para cereja-do-mato, 3,90
e 4,03 para guabiroba, 3,32 para jabuticaba, 3,00 e 3,35 para pitanga-laranja,
3,98 e 3,74 para pitanga-roxa. 2,92 e 3,74 para pitanga-vermelha e 2,75 para
uvaia.
O fato de as frutas apresentarem valores de pH entre 2,75 e 4,03, os
caracterizam como ácidos, constituindo-se numa característica importante no
que tange a potenciais aspectos de processamento, pois é sabido que produtos
com pH inferior a 4,5 exigem tratamentos térmicos menos drásticos para a
conservação e ou são mais facilmente conserváveis pela combinação de
métodos, além de não ser necessário a adição de ácido cítrico nas formulações
(Semensato e Pereira, 2000). Isso é importante pensando-se na utilização
dessas frutas, seja na forma de produtos liofilizados, desidratados, sucos,
polpas, congelados, apertizados e outros.
Os teores de acidez total titulável (ATT) também apresentaram
diferenças significativas entre as frutas de mesma espécie e entre espécies
diferentes. Em média, os acessos de araçá-roxo foram os que apresentaram os
maiores de ATT, expressos em % de ácido cítrico equivalente, entre os 48
genótipos avaliados. A seleção AR11 (araçá-roxo) o fruto que apresentou teor
de ATT superior, 16,90% seguido pelo araçá-roxo AR28, com 16,19%. A uvaia
também apresentou alto teor de ATT com 13,89% de ácido cítrico. As frutas de
araçá-amarelo apresentaram valores de ATT que variaram entre 4,22 e 12,61%
de ácido cítrico. As frutas de guabiroba destacaram por não serem frutas com
um alto teor de ATT. Observou-se mesmo comportamento nas frutas de
jabuticaba.
25
Embora tenha havido marcantes variações nos teores de ATT entre as
frutas avaliadas, as variações de pH foram menores. Esse comportamento
sugere que os principais ácidos orgânicos das frutas não sejam de caráter
forte. As células buscam manter uma condição tamponante associando ou
dissociando os ácidos presentes de modo a manter o pH citosólico próximo a
6,8. Por isso que o pH vascular varia fortemente com a finalidade de manter o
pH do citosol.
Do ponto de vista tecnológico, a relação SST/ATT consiste em um
parâmetro de palatibilidade nos alimentos, que indica um equilíbrio entre os
sabores doce e ácido presentes no alimento. Quanto maior a razão entre SST
e ATT, mais “doce” o fruto é mais apreciado pelos consumidores e mais
indicado para ser destinado à indústria (Teixeira et al., 2001). As frutas de
guabiroba foram os que apresentaram maior relação SST/ATT (5,68), sendo
esses mais indicados como matéria-prima na indústria.
4.2 Teor de Compostos Fenólicos Totais
Dentre os 48 genótipos de frutas avaliados, houve diferença significativa
entre as distintas espécies e acessos estudados (Tabela 5). As frutas de
guabiroba do acesso GUA/01 foram os que apresentaram maior teor de
compostos fenólicos (1062,03 mg ácido gálico equivalente por 100g de peso
fresco). Os demais acessos de guabiroba apresentaram 269,88mg.100g-1
(GUA/02) e 277,46mg.100g-1 (GUA/02). Houve diferença significativa elevada
entre os teores de compostos fenólicos totais entre os acessos de mesma
espécie, devido provavelmente ao local de produção e/ou diferenças
genotípicas. O acesso que apresentou maior teor de compostos fenólicos totais
(GUA/01) foi em uma safra que a Região Sul do Estado do Rio Grande do Sul,
Brasil sofreu uma grande seca, havendo um período de escassez de chuvas na
época de floração e colheita (dados não apresentados). Provavelmente, as
condições
climáticas
proporcionaram
um
estresse
à
planta
que,
conseqüentemente, produziu e acumulou uma concentração maior de
26
metabólitos secundários, como mecanismo de defesa, e dentre esses, os
compostos fenólicos.
TABELA 5. Teor de compostos fenólicos totais presentes em frutas nativas da
Região Sul da América do Sul.
Fruta
Araçá
Cereja-do-Mato
Guabiroba
Jabuticaba
Pitanga
Uvaia
Codificação1
AR01
AR03
AR05
AR27
AR46
AR47
AR48
AR49
AR57
AR58
AR59
AR60
AR64
AR72
AR73
AR74
AR75
AR08
AR09
AR10
AR11
AR18
AR19
AR28
AR29
AR42
AR44
AR94
AR100
AR101
CER
GUA/01
GUA/02
GUA/03
JAB
Pit15
Pit71
PitH
Pit40
PitU
Pit41
Pit49
Pit50
Pit53
Pit55
Pit61
Pit62
UVI
Cor
Amarelo
Roxo
Roxo
Laranja
Roxo
Laranja
Roxo
Vermelho
Amarelo
Teor de Compostos Fenólicos Totais
( mg.100g-1 de ácido gálico)
143,91±1,29opq2
70,36±12,62x
159,32±0,15n
130,18±24,11rst
155,24±6,17no
98,17±10,40v
123,21±8,55stu
133,46±1,98qrs
138,89±2,80pqr
210,01±5,62j
147,60±12,62nop
117,12±9,28tu
110,91±2,64u
156,74±3,08no
118,58t±3,08u
112,26±3,34u
182,60±7,27lm
208,58±5,61j
240,27±21,48efg
192,55±10,48l
249,35±10,59e
217,27±4,68ij
295,38±9,20c
181,64±5,15lm
234,40±22,03fg
247,05±3,91ef
177,32±8,91m
308,02±1,10b
215,06±6,51j
228,04±27,32i
156,89±7,45no
1062,03±14,81a
269,88±0,38d
277,46±2,87d
232,19±9,33g
90,02±10,46v
117,15±10,42tu
242,50±1,53efg
95,80±15,42v
140,19±18,44pqr
67,35±12,82x
91,75±1,74v
120,70±1,04stu
139,16±7,07pqr
123,67±0,45stu
118,16±4,82tu
183,76±2,72lm
93,61±17,40v
1
Araçá(AR), Cereja-do-Mato(CER), Guabiroba(GUA), Jabuticaba(JAB), Pitanga(Pit), Uvaia(UVI); 2Médias seguidas da
mesma letra minúscula na linha não diferem entre si, pelo Teste de Duncan (p<0,05).
27
Além do acesso de GUA/01, o araçá-roxo AR94 (308,02 mg.100g-1)
também mostrou-se rico em compostos fenólicos totais. Pode-se observar que
a maioria dos acessos de araçá-roxo avaliados possui teores de compostos
fenólicos totais superiores que os acessos de pitanga-vermelha, pitangalaranja, cereja-do-mato e uvaia. Isso sugere que as frutas da espécie Psidium
cateleianum (araçá) de coloração roxa possuem essa característica genética
de produzir uma concentração maior de metabólitos secundários que os outras
frutas avaliados nesse estudo, apesar de todos as frutas avaliados fazerem
parte da mesma família botânica, a Myrtaceae. Estudos posteriores, de
expressão de genes ou da via de biossíntese de compostos fenólicos e as
enzimas envolvidas são necessários para testar essa hipótese.
Observaram-se diferenças nos teores de compostos fenólicos totais em
frutas de guabiroba. As frutas de GUA/01 apresentaram um alto teor de
compostos fenólicos totais quando comparado ao teor dos outros dois acessos
(GUA/02 e GUA/03) avaliados e o restante das frutas. Esse comportamento foi
observado em frutas colhidas em safras diferentes, o que sugere que as
condições edafoclimáticas, época de floração e de colheita podem diferir na
composição química dos mesmos. Robards et al. (1999) afirmam que a
composição dos compostos fenólicos é em decorrência de fatores genéticos e
ambientais.
Dentre as pitangas, a pitanga-roxa (PitH) apresentou o maior teor de
compostos fenólicos totais (242,50 mg.100g-1 de ácido gálico). Outro fruto
nativa que apresentou teor de compostos fenólicos superior aos araçás de
coloração amarela e pitangas de coloração vermelha e laranja, foi a jabuticaba
com 232,19 mg.100g-1. As frutas que apresentaram os teores mais baixos
foram os genótipos de araçá-amarelo, pitanga-laranja e uvaia.
Quando se compara o teor de compostos fenólicos das frutas nativas da
Região Sul da América do Sul com as frutas não nativas estudadas nesse
trabalho como tratamento controle, se observa que vários acessos avaliados
possuem teor de compostos fenólicos totais superior ao da amora-preta (AMR)
e do mirtilo (MIR), conhecidos por possuírem, na sua composição química,
28
elevados teores desses compostos. Dos genótipos que apresentaram os
maiores teores, dentre as diversas seleções e suas diferentes colorações, o
teor total de compostos fenólicos das frutas não nativas foi superior apenas aos
teores apresentados pela pitanga-laranja e a uvaia. Os demais acessos
avaliados apresentaram concentrações superiores as da amora-preta e do
mirtilo (Figura 6). Nesse caso, era esperado que os acessos de amora-preta e
mirtilo colhidos na Região Sul do Estado do Rio Grande do Sul do Brasil
apresentassem teores de compostos fenólicos totais superiores, pois são frutas
conhecidos cientificamente por serem ricos em compostos fenólicos (Ehlenfeld
e Prior, 2001). Esse fato põe em evidência o fato que as espécies nativas
possuem um grande potencial, inclusive superando espécies tidas como
padrões de qualidade quando avaliadas sob esse aspecto.
Pelo método utilizado para a determinação de compostos fenólicos
totais, extraem-se todos os compostos fenólicos presente na amostra, desde as
antocianinas, flavonols, flavonas a compostos mais complexos, como por
exemplo, taninos não condensáveis. Esses compostos são produzidos em
função da característica genotípica de cada espécie e também como respostas
a estresses bioticos e abioticos. É possível que pelas características
edafoclimaticas (variações de temperatura, luminosidade, luz ultravioleta (UV),
ventos, aporte hídrico e nutricional) e fitopatias (ataque de patógenos e pragas)
nos quais esses acessos são cultivados sejam fatores estimuladores da síntese
desses metabólitos típicos do metabolismo secundário (Simões et al., 2007).
Essa pode ser a razão dos elevados teores desses compostos em algumas
frutas nativas estudados, que um acesso apresentou um alto teor de
compostos fenólicos totais e os outros não.
1200,00
1000,00
800,00
600,00
400,00
MIR
AMR
UVI
Pit62
PitH
Pit15
JAB
GUA/01
AR94
0,00
CER
200,00
AR75
Compostos Fenólicos Totais
(mg/100g ác. gálico)
29
Fruto
Figura 6. Teor de compostos fenólicos totais dos principais genótipos de frutas nativas da
Região Sul da América do Sul e frutas não nativa s. Araçá-amarelo (AR75), araçároxo (AR94), cereja-do-mato (CER), guabiroba (GUA/01), jabuticaba (JAB), pitangalaranja (Pit15), pitanga-roxa (PitH) e pitanga-vermelha (Pit62) e não nativa s amorapreta (AMR) e mirtilo (MIR) da América do Sul avaliados. As barras indicam as
diferenças entre as médias.
Kuskoski et al. (2005) detectaram teores de fenóis totais em polpa de
uva (Vitis vinifera), açaí (Euterpe oleraceae Mart.) e morango (Fragaria vesca)
semelhante aos teores encontrados nas seleções de pitanga-roxa (Pit),
pitanga-vermelha (Pit) e araçá-roxo (AR), respectivamente, 118,9, 117,1, 136,8
e 132,1mg ácido gálico.100g-1 de polpa. Outras frutas tropicais típicas
brasileiras, da Região Nordeste, como a graviola (Anona muricato), cupuaçu
(Theobroma grandiflorum) e maracujá (Passiflora sp.), apresentaram teor de
fenóis menores que as frutas nativas da Região Sul da América do Sul,
respectivamente, 84,3; 20,5; e 20,0mg.100g-1 ácido gálico (Kukoski et al.,
2005).
Frutas de clima temperado do Hemisfério Norte também são ricos em
compostos fenólicos. Wang e Ballington (2007) verificaram que frutas da
espécie Vaccinium stamineum apresentam elevado conteúdo de compostos
fenólicos, 727,33 mg.100g-1 ácido gálico. Em nectarinas, pêssegos e ameixas,
30
produzidos no Estado da Califórnia, EUA, o conteúdo de compostos fenólicos
totais (mg.100g-1 ácido gálico) oscilaram entre 14-102, 21-111 e 42-109,
respectivamente (Gil et al. 2002), semelhante ao que foi detectado nas frutas
de araçá-amarelo, pitanga-laranja e pitanga-vermelha. Luximon-Ramma et al.
(2003) observaram teor semelhante em carambola (142mg.100g-1), aos
encontrados na maioria dos araçá-amarelo, pitanga-vermelha, pitanga-laranja e
uvaia avaliados neste estudo.
Ehlenfeldt e Prior (2001) analisaram 87 cultivares de mirtilo e detectaram
teor de compostos fenólicos totais de ate (95,0 mg.100g-1), portanto inferiores
aos observados na maioria das frutas nativas da Região Sul da América do Sul
(araçá-amarelo, araçá-roxo, cereja-do-mato, guabiroba, jabuticaba, pitangaroxa e pitanga-vermelha). O teor encontrado nas frutas de mirtilo foi
semelhante aos teores encontrados nos acesso de pitanga-laranja (Pit15 e
Pit71) e uvaia.
Sun et al. (2002) também quantificaram o teor de compostos fenólicos
totais em frutas de grande consumo, como no caso de morango, banana,
abacaxi, pêssego, pêra, maçã e laranja. Esses autores verificaram em maçãs
um alto teor de compostos fenólicos totais e semelhante aos encontrados nos
acessos de guabiroba (GUA/02 e GUA/03) e em alguns genótipos de araçároxo (AR09, AR94, AR100 e AR01), em torno de 272,1mg.100g-1 de ácido
gálico. O teor de compostos fenólicos totais em morangos (147,8mg.100g-1)
foram semelhantes aos encontrados nas frutas de pitanga-laranja (Pit15 e
Pit71). Em frutos, tais como, abacaxi (40,4mg.100g-1), banana (56,1mg.100g-1),
pêra (53,6mg.100g-1) e pêssego (65,3 mg.100g-1), os teores de compostos
fenólicos totais foram inferiores aos 48 frutas avaliados nesse estudo.
Patthamakanokporn et al. (2008) encontraram valores inferiores de compostos
fenólicos totais para frutas de goiaba (Psidium guajava) e mamão (Carcinia
papaya) aos acessos de guabiroba, araçá-amarelo, araçá-roxo, cereja-do-mato
e jabuticaba, respectivamente 148,0mg.100g-1 e 54,0mg.100g-1.
Vasco, Ruales e Kamal-Eldin (2008) encontraram valores semelhantes,
aos encontrado na guabiroba, ao avaliar frutas nativas do Equador. Esses
31
autores encontraram teores de compostos fenólicos totais superiores aos
encontrados nas frutas da Região do Sul do Brasil, com 2167 mg.100g-1 de
ácido gálico equivalente para andean blackberry (Rubus, Berth), 1494 mg.100g1
de ácido gálico equivalente para capulí cherry (Prunus serotina, var. Capulí) e
1010 mg.100g-1 de ácido gálico equivalente para banana passion (Passiflora
mollissima L.). Esses autores também encontraram teores semelhantes aas
frutas da Região Sul da América do Sul, que variaram entre 250 e 400
mg.100g-1 de ácido gálico equivalente para ameixa (Prunus salicina), goiaba
(Psidium guajava L.) e cherimóia (Annona cherimólia) e também teores
inferiores a 100 mg.100g-1 de ácido gálico equivalente, semelhante aos
encontrados em araçá-amarelo, cereja-do-mato, pitanga-laranja, pitangavermelha e uvaia, nas frutas naranjilla (Solarum quitoense), physalis (Physalis
peruviana), tomate (Lycopersicon esculentum) e maracujá (Passiflora edulis,
var. flavicarpa).
Liu et al. (2008) avaliaram frutas nativas da Ásia, em seis regiões
chinesas (Phyllanthus emblica L.) e também encontraram teores semelhantes,
entre 81,5 e 120,9 mg.100g-1 de ácido gálico , às frutas nativas da Região Sul
da América do Sul avaliados neste estudo, tais como uvaia, maioria dos 13
acessos de araçá-amarelo, pitanga-laranja e pitanga-vermelha) . Liu et al.
(2008) verificaram que as diferentes condições de crescimento das frutas
podem contribuir no teor de compostos fenólicos totais e de outros metabólitos.
Ercisli e Orhan (2007) verificaram altos teores de compostos fenólicos
totais em frutas de mulberrie vermelha (Morus rubra) e mulberrie negra (Morus
nigra), respectivamente, 1035 e 1422 mg.100g-1 equivalente a ácido gálico.
Esses teores são semelhantes ao encontrado em um dos acessos de
guabiroba avaliados nesse estudo.
4.3 Teor de Antocianinas Totais
A cereja-do-mato foi o fruto que apresentou o teor mais elevado de
antocianinas totais dentre os 48 avaliados, com 89,00 mg.100g-1 em
32
equivalente de cianidina-3,5-glicosídeo, seguido da pitanga-roxa (PitH) com
76,73 mg.100g-1 e jabuticaba com 67,39 mg.100g-1 (Tabela 6). Dentre os 13
genótipos de araçá-roxo, o AR94 foi o que apresentou maior teor com 10,54
mg.100g-1. Os dois acessos de pitanga-laranja (Pit15 e Pit71) apresentaram
teores de antocianinas totais superiores aos de araçá-roxo, entre 8,53 e 9,02
mg.100g-1. Dentre os acessos de araçá-roxo avaliados, houve diferença
significativa entre os teores de antocianinas totais que variaram entre 0,89 e
10,54 mg.100g-1. Nos acessos de pitanga-vermelha também observou-se uma
grande diferença entre os teores encontrados nas frutas de mesma espécie e
mesma coloração, que variaram entre 5,11 e 20,65 mg.100g-1. Entre os
genótipos de araçá-amarelo, o teor de antocianinas totais variou entre 0,35 e
8,01 mg.100g-‘. Porém observou-se que essas frutas apresentaram teores bem
inferiores que as cultivares avaliadas de pitanga, guabiroba, cereja-do-mato,
jabuticaba e uvaia.
Ehlenfeldt e Prior (2001) analisaram 87 cultivares de mirtilo e
encontraram teor de antocianinas totais superior (179,0 mg.100g-1) aos
detectados nas frutas nativas da Região Sul da América do Sul. Porém
observou-se que nos mirtilos colhidos na Região Sul da América do Sul, o teor
de antocianinas totais foi inferior (54,85mg.100g-1) ao observado por aqueles
autores com o mesmo material, mas cultivado no Estado de New Jersey, EUA.
Esse comportamento sugere que como as frutas analisados foram no seu
centro de origem, nessas frutas ocorreu sua expressão na máxima capacidade.
Reynertson et al. (2008) estudaram frutas da família Myrtaceae, que consiste
do mesmo gênero as frutas nativas da Região Sul da América do Sul e
observaram teores de antocianinas totais semelhantes aos encontrados nos
acessos de araçá-amarelo, araçá-roxo e guabiroba, ao avaliarem frutas das
espécies Eugenia brasilienses, Eugenia aggregata, Myricia cauliflora.
33
Tabela 6. Teor de antocianinas totais presentes em frutas nativas da Região
Sul da América do Sul.
Fruta
Araçá
Cereja-do-mato
Guabiroba
Jabuticaba
Pitanga
Uvaia
Codificação1
AR01
AR03
AR05
AR27
AR46
AR47
AR48
AR49
AR57
AR58
AR59
AR60
AR64
AR72
AR73
AR74
AR75
AR08
AR09
AR10
AR11
AR18
AR19
AR28
AR29
AR42
AR44
AR94
AR100
AR101
CER
GUA/01
GUA/02
GUA/03
JAB
Pit15
Pit71
PitH
Pit40
PitU
Pit41
Pit49
Pit50
Pit53
Pit55
Pit61
Pit62
UVI
Cor
amarelo
roxo
roxo
laranja
roxo
laranja
roxo
vermelho
amarelo
Teor de Antocianinas Totais
( mg.100g-1 de cianidina 3,5-glicosídeo)
1,04±0,17q2
1,25±0,32q
0,90±0,74q
8,01±0,32hijlmno
2,55±0,16opq
0,35±0,10q
0,54±0,17q
0,99±0,16q
1,75±0,20pq
2,33±0,46opq
1,41±0,12pq
0,63±0,17q
1,94±0,27pq
1,28±0,02q
1,27±0,02q
1,67±0,14pq
1,08±0,03q
3,52±0,14mnopq
2,05±1,11pq
0,89±0,26q
6,09±0,09jlmnopq
4,05±0,21mnopq
6,29±0,08ijlmnopq
11,82±0,36fghi
4,82±0,30lmnopq
3,10±0,24nopq
3,93±0,04mnopq
10,54±0,41ghijl
1,18±0,31pq
2,15±0,14opq
89,00±22,51ª
4,39±0,39mnopq
5,28±2,22lmnopq
7,36±0,57ijlmnop
67,39±18,45c
8,53±0,28hijlmn
9,02±1,59ghijlm
76,73±0,46b
27,15±2,55d
11,60±0,89fghi
13,28±0,37fgh
16,65±1,58ef
11,98±0,86fghi
6,08±0,11jlmnopq
5,11±0,11lmnopq
11,63±0,96fghij
20,65±0,73e
14,51±0,27fg
1
Araçá(AR), Cereja-do-Mato(CER), Guabiroba(GUA), Jabuticaba(JAB), Pitanga(Pit), Uvaia(UVI); 2Médias seguidas da
mesma letra minúscula na linha não diferem entre si, pelo Teste de Duncan (p<0,05).
Quando se comparam as frutas nativas da Região Sul da América do Sul
com as frutas não nativas da América do Sul, quanto ao conteúdo de
antocianinas totais (Figura 7), verifica-se que a maioria das frutas nativas
analisados apresentou teores de antocianinas totais inferiores aos obtidos a um
das frutas não nativa s avaliado (amora-preta), conhecido cientificamente por
34
possuir na sua composição química, elevados teores de antocianinas (Dugo et
al., 2001; Mota, 2006).
120,00
100,00
80,00
60,00
40,00
MIR
AMR
UVI
Pit62
PitH
Pit15
JAB
GUA/01
-20,00
AR94
0,00
CER
20,00
AR75
Antocianinas Totais (mg/100g
cianidina 3,5-glicosilada)
140,00
Fruto
Figura 7. Teor de antocianinas totais dos principais genótipos de frutas nativas da Região Sul
da América do Sul e frutas não nativa s. Araçá-amarelo (AR75), araçá-roxo (AR94),
cereja-do-mato (CER), guabiroba (GUA/01), jabuticaba (JAB), pitanga-laranja (Pit15),
pitanga-roxa (PitH) e pitanga-vermelha (Pit62) e não nativa s amora-preta (AMR) e
mirtilo (MIR) da América do Sul avaliados. As barras indicam as diferenças entre as
médias.
Os três genótipos que mais se aproximaram dos valores de antocianinas
totais na amora-preta (AMR) (115,98 mg.100g-1 cianidina 3,5-glicosídeo) foram
a cereja-do-mato, a pitanga-roxa (PitH) e a jabuticaba, respectivamente, com
89,00 mg.100g-1, 76,73 mg.100g-1 e 67,39 mg.100g-1. Esses três genótipos
apresentaram teor de antocianinas totais superiores ao conteúdo presente no
fruto não nativa
mirtilo (54,85 mg.100g-1). O mirtilo é uma fruta nativa do
Hemisfério Norte conhecido cientificamente como rico em compostos
antociânicos, porém o acesso colhido na Região Sul da América do Sul
apresentou um valor abaixo do que outros detectam em mirtilo colhidos em
outras regiões (Ehlenfeldt e Prior, 2001; Katsube et al., 2003; Pantelidis et al.,
2007). Esse dado sugere que o centro de origem propicia a máxima expressão
do potencial genético, ou seja, os mirtilo, embora se adaptem ao clima e solo
35
da Região Sul da América do Sul, são frutas típicas do Hemisfério Norte e
nessas regiões as plantas apresentam o máximo de seu potencial genético no
que concerne ao metabolismo secundário.
4.4 Teor de Carotenóides Totais
Os acessos de araçá, tanto os de coloração roxa como a amarela,
apresentaram baixo teores de carotenóides totais, não ultrapassando 11,34 e
10,84 µg.g-1 de β-caroteno, respectivamente, quando comparados com os
teores de carotenóides em pitangas-roxas e pitangas-vermelhas (Tabela 7).
Dos 48 genótipos avaliados, os dois acessos de pitanga-roxa (PitH e Pit40)
apresentaram alto teor de carotenóides totais na sua composição, entre 117,17
e 285,14 µg.g-1 de β-caroteno. Entre os oito genótipos de pitanga-vermelha
analisados, dois apresentaram os maiores teores de carotenóides totais, entre
213,25 e 231,71 µg.g-1 de β-caroteno. Das seis espécies avaliadas (araçá,
cereja-do-mato, guabiroba, jabuticaba, pitanga e uvaia, os genótipos de
pitanga-roxa e pitanga-vermelha foram os que apresentaram os teores de
carotenóides totais mais elevados, seguidos pela cereja-do-mato (88,82 µg.g-1
de β-caroteno) e uvaia (85,61 µg.g-1 de β-caroteno). Os três acessos de
guabiroba (GUA/01, GUA/02 e GUA/03) apresentaram valores intermediários,
variando entre 32,51 e 52,26 µg.g-1 de β-caroteno. Dos 17 acessos de araçáamarelo e 13 de araçá-roxo, todos apresentaram os menores teores de
carotenóides totais, que variou entre 3,15 e 10,84 µg.g-1 de β-caroteno para as
frutas de araçá de coloração amarela e entre 3,02 e 11,34 µg.g-1 de β-caroteno
para as frutas de coloração roxa (Tabela 7).
Lima, Melo e Lima (2002) avaliaram o teor de carotenóides em pitangas,
de coloração roxa e vermelha, (Eugenia uniflora L.) encontradas na Região
Nordeste. Em todas as cultivares analisadas, o teor de carotenóides foi inferior
aos encontrados nos acessos de pitanga-roxa e pitanga-vermelha nativa s
avaliados neste estudo, em média 111,00µg.g-1 para as cultivares de cor roxa e
104,00µg.g-1 para as de cor vermelha. Essa diferença na composição química,
36
entre frutas de uma mesma espécie pode ser devido a fatores genótipos, ou
seja, cada genótipo possui sua composição química característica ou também
por causa de fatores edafoclimáticos, tais como, variações de temperatura,
luminosidade, pluviosidade (Resende, Vilas-Boas, Chitarra, 2002; Simões et
al., 2007).
Tabela 7. Teor de carotenóides totais presentes em frutas nativas da Região
Sul da América do Sul.
Fruta
Araçá
Cereja-do-Mato
Guabiroba
Jabuticaba
Pitanga
Uvaia
Codificação1
AR01
AR03
AR05
AR27
AR46
AR47
AR48
AR49
AR57
AR58
AR59
AR60
AR64
AR72
AR73
AR74
AR75
AR08
AR09
AR10
AR11
AR18
AR19
AR28
AR29
AR42
AR44
AR94
AR100
AR101
CER
GUA/01
GUA/02
GUA/03
JAB
Pit15
Pit71
PitH
Pit40
PitU
Pit41
Pit49
Pit50
Pit53
Pit55
Pit61
Pit62
UVI
Cor
Amarelo
Roxo
Roxo
Laranja
Roxo
Laranja
Roxo
Vermelho
Amarelo
Teor de Carotenóides Totais
(equivalente a µg.g-1 de β-caroteno)
4,65±0,57q2
3,63±0,26q
6,55±0,74opq
10,84±0,33opq
7,00±0,20opq
6,93±0,46opq
10,53±0,48opq
9,93±0,79opq
8,04±0,47opq
3,15±0,41q
7,88±0,59opq
9,89±0,54opq
7,24±0,64opq
3,89±0,68q
13,68±0,68op
7,50±0,89opq
7,59±0,34opq
14,72±0,73op
11,34±0,83opq
6,26±1,95opq
3,02±0,47q
3,21±0,10q
7,57±0,71opq
3,02±0,34q
5,45±0,80pq
11,13±0,64opq
8,34±0,38opq
10,64±0,88opq
4,19±0,65q
3,83±1,08q
88,82±6,12i
52,26±1,10m
53,09±1,50lm
32,51±3,05n
4,54±0,69q
60,08±2,54jl
60,87±3,68j
285,14±10,53a
177,17±11,95d
179,31±33,90d
169,12±8,89e
99,51±0,59h
213,25±16,86c
143,75±3,05f
231,71±3,24b
140,42±1,44f
121,71±2,24g
85,61±3,84i
1
Araçá(AR), Cereja-do-Mato(CER), Guabiroba(GUA), Jabuticaba(JAB), Pitanga(Pit), Uvaia(UVI); 2Médias seguidas da
mesma letra minúscula na linha não diferem entre si, pelo Teste de Duncan (p<0,05).
37
Marinova e Ribarona (2007) também detectaram teores de carotenóides
totais semelhantes aos da pitanga-roxa (PitH) e pitanga-vermelha (Pit55) ao
analisarem amora (Rubus fruticosus L.) e framboesa (Rubus ideaus L.)
oriundos da Europa. Também verificaram teores de carotenóides superiores,
aos encontrados nos 48 frutas nativas da Região Sul da América do Sul
avaliado, com 440µg.g-1 e 370µg.g-1 para morango Fragaria vesca L.) e
framboesa (Rubus ideaus), respectivamente.
Zanatta e Mercadante (2007) analisaram o teor de carotenóides em
frutas de camu-camu (Myrciaria dúbia), fruta nativa da Região Amazônica e da
mesma família botânica que as 48 frutas avaliados nesse estudo (família
Myrtaceae), verificaram que essas frutas possuem teor de carotenóides totais
superior (354,8 e 1095,3 µg.g-1 β-caroteno) a todos as frutas nativas da Região
Sul da América do Sul avaliados nesse estudo. Como as frutas de camu-camu
também foram avaliadas nos seus centros de origem, o fato de possuírem o
teor de carotenóides total mais elevado que as frutas nativas da Região Sul da
América do Sul é devido a características genotípicas, próprias da espécie.
As frutas não nativas avaliadas nesse estudo, amora-preta (AMR) e
mirtilo (MIR), apresentam valores baixos de teores de carotenóides, quando
comparados com as frutas nativas da Região Sul, com 1,48 e 2,93 µg.g de βcaroteno, respectivamente. Os 48 genótipos de frutas nativas avaliados
apresentaram valores superiores, destacando-se a pitanga-roxa (PitH) e
pitanga-vermelha (Pit62) (Figura 8).
350,00
300,00
250,00
200,00
150,00
100,00
MIR
AMR
UVI
Pit62
PitH
Pit15
JAB
GUA/01
-50,00
AR94
0,00
CER
50,00
AR75
Carotenóides Totais (ug/g betacaroteno)
38
Fruto
Figura 8. Teor de carotenóides totais dos principais genótipos de frutas nativas da Região Sul
da América do Sul e frutas não nativa s. Araçá-amarelo (AR75), araçá-roxo (AR94),
cereja-do-mato (CER), guabiroba (GUA/01), jabuticaba (JAB), pitanga-laranja (Pit15),
pitanga-roxa (PitH) e pitanga-vermelha (Pit62) e não nativa s amora-preta (AMR) e
mirtilo (MIR) da América do Sul avaliados. As barras indicam as diferenças entre as
médias.
4.5 Teor de Ácido L-Ascórbico
Dentre as 48 frutas nativas avaliadas, dois genótipos de guabiroba
destacaram-se por apresentarem elevado teor de ácido L-ascórbico entre
740,48 (GUA/01) e 759,20 (GUA/02) mg.100g-1, enquanto que o acesso
GUA/03 apresentou um teor de ácido L-ascórbico bem inferior (0,24 mg.100g-1)
(Tabela 8). Isso pode ser explicado, pelo local diferenciado colheita também
pela idade da planta. Enquanto que os dois genótipos que apresentaram teor
de ácido L-ascórbico elevado são plantas mais antigas e mais altas (GUA/01 e
GUA/02), o terceiro genótipo (GUA/03) é proveniente de uma planta mais nova,
em outras condições de solo e latitude. Essas diferenças edafoclimáticas e de
local de plantio podem interferir na composição química das frutas,
apresentando diferenças entre frutas de uma mesma espécie (Robards et al,
1999).
39
Tabela 8. Teor de ácido L-ascórbico presente em frutas nativas da Região Sul
da América do Sul.
Fruta
Araçá
Cereja-do-Mato
Guabiroba
Jabuticaba
Pitanga
Uvaia
Codificação1
AR01
AR03
AR05
AR27
AR46
AR47
AR48
AR49
AR57
AR58
AR59
AR60
AR64
AR72
AR73
AR74
AR75
AR08
AR09
AR10
AR11
AR18
AR19
AR28
AR29
AR42
AR44
AR94
AR100
AR101
CER
GUA/01
GUA/02
GUA/03
JAB
Pit15
Pit71
PitH
Pit40
PitU
Pit41
Pit49
Pit50
Pit53
Pit55
Pit61
Pit62
UVI
Cor
amarelo
roxo
roxo
laranja
roxo
laranja
roxo
vermelho
amarelo
Teor de Ácido L-Ascórbico Total
(mg.100g-1)
1,30±0,07vhi2
0,00±0,00i
2,81±0,57hi
0,00±0,00i
7,20±0,98ghi
4,97±0,74hi
6,68±1,16ghi
6,73±1,72ghi
0,75±0,09i
3,37±0,02hi
3,80±0,15hi
4,17±0,10hi
8,53±0,32gh
4,72±0,04hi
0,10±0,04i
0,13±0,07i
1,59±0,07hi
2,50±0,35hi
0,00±0,00i
0,00±0,00i
2,22±0,17hi
0,00±0,00i
0,45±0,22i
0,00±0,00i
0,00±0,00i
0,38±0,16i
12,89±0,22g
3,16±0,25hi
1,46±0,13hi
2,38±0,09hi
0,00±0,00i
740,68±33,56b
759,20±9,59a
0,24±0,00i
0,71±0,11i
40,95±3,26c
27,75±1,88e
2,50±0,22hi
34,10±3,22d
35,53±1,81cd
4,20±0,63hi
2,31±1,35hi
3,97±0,78hi
3,22±0,20hi
2,56±0,46hi
4,89±0,06hi
4,38±0,31hi
19,86±0,68f
1
Araçá(AR), Cereja-do-Mato(CER), Guabiroba(GUA), Jabuticaba(JAB), Pitanga(Pit), Uvaia(UVI); 2Médias seguidas da
mesma letra minúscula na linha não diferem entre si, pelo Teste de Duncan (p<0,05).
Dos oito genótipos de pitanga-vermelha avaliados, apenas uma
apresentou teor de ácido L-ascórbico alto (PitU), com 35,53 mg.100g-1; nos
outros sete frutas o teor variou entre 2,31 e 4,89 mg.100g-1 de ácido Lascórbico. Entre os dois acessos de pitanga-roxa (PitH e Pit40), um apresentou
teor de ácido L-ascórbico bem superior (PitH) e outro não (Pit40), o que sugere
40
que a concentração desse nutriente no fruto não é uma característica da
espécie, mas sim de cada genótipo. A grande maioria das frutas de araçá-roxo
e a cereja-do-mato não apresentou quantidades significativas de ácido Lascórbico (Tabela 8).
Os 17 genótipos de araçá-amarelo apresentaram teores menores de
ácido L-ascórbico, os quais foram inferiores a 8,53 mg.100g-1, quando
comparados aos teores encontrados nos dois acessos de guabiroba (GUA/01 e
GUA/02).
Assim como foi observado na avaliação de carotenóides totais, as
frutas não nativas apresentaram valores relativamente menores de ácido Lascórbico: 0,26 mg.100g-1 para a amora-preta e 0,12 mg.100g-1 para o mirtilo,
no entanto, o teor desse componentes encontrado na guabiroba (GUA/01) foi
muito superior ao encontrados nas frutas não nativas, obtendo-se valores de
até 759,20mg.100g-1 (Figura 9).
A acerola, fruta nativa da Região Nordeste do Brasil, conhecida
cientificamente como fonte rica de vitamina C, apresenta teor de ácido
ascórbico entre 695 e 4827 mg de ácido ascórbico por 100g de fruta (Santos et
al., 1999; Gomes et al., 2000). Das 48 frutas analisados, apenas dois acessos
de guabiroba (GUA/01 e GUA/02) apresentaram teor semelhante (740,68 e
759,20mg.100g-1). O restante das frutas avaliadas apresentou teores de ácido
L-ascórbico inferiores aos detectados na acerola, apesar de ambos as frutas
terem sido avaliados nos seus respectivos centros de origem, o que significa
que o teor de vitamina C presente nessas frutas também é uma característica
genotípica de cada espécie e susceptível a fatores ambientais (Simões et al.,
2007).
41
700,00
600,00
500,00
400,00
300,00
200,00
MIR
AMR
UVI
Pit62
PitH
Pit15
JAB
GUA/01
AR94
0,00
-100,00
CER
100,00
AR75
Ácido L-Ascórbico (mg/100g)
800,00
Fruto
Figura 9. Teor de ácido L-ascórbico total dos principais genótipos de frutas nativas da Região
Sul da América do Sul e frutas não nativa s. Araçá-amarelo (AR75), araçá-roxo
(AR94), cereja-do-mato (CER), guabiroba (GUA/01), jabuticaba (JAB), pitangalaranja (Pit15), pitanga-roxa (PitH) e pitanga-vermelha (Pit62) e não nativa s amorapreta (AMR) e mirtilo (MIR) da América do Sul avaliados. As barras indicam as
diferenças entre as médias.
Pinto et al. (2008) analisaram morangos produzidos na Região Sudeste
do Brasil e encontraram, em média, 82 mg.100g-1 de ácido L-ascórbico, teor
mais elevado que a maioria das frutas avaliados nesse estudo, exceto os
valores encontrados em dois genótipos de guabiroba.
Thaipong et al. (2006) observaram que clones de goiaba (Psidium
guajava L.), frutas da mesma família botânica que as frutas avaliadas nesse
estudo, tanto os clones de polpa branca como os de polpa vermelha possuem
conteúdo de ácido ascórbico superiores. Os teores apresentados foram de
378,60mg.100g-1 para as goiabas de polpa branca e de 396,70mg.100-1 para o
clone de polpa vermelhas. Esses valores foram superiores aos encontrados
nos acessos de araçá, pitanga, cereja-do-mato, jabuticaba e uvaia, o que
sugere ser uma característica própria da espécie.
Sun et al. (2002) encontraram em frutas comumente consumidas no
mundo inteiro teores de ácido ascórbico semelhantes aos encontrados em
42
frutas nativas do Sul da América do Sul. O teor de vitamina C avaliados em
pêssegos (6,6mg.100g-1) são similares aos encontrados nos acessos de araçáamarelo (AR46, AR47, AR48 e AR49). Os teores de ácido L-ascórbico em pêra
(4,0 mg.100g-1) e em laranja (4,5 mg.100g-1) foram semelhantes ao teor de
ácido L-ascórbico encontrados nos acessos de pitanga-vermelha. O teor de
ácido L-ascórbico em abacaxi (15,4 mg.100g-1) foi similar ao da uvaia. Esses
autores também não observaram teores elevados de ácido L-ascórbico, em
frutas de cramberrie, que são da mesma família botânica do mirtilo.
Ercisli e Orhan (2007) avaliaram frutas de mulberry de três colorações
diferentes, branca (Morus alba), vermelha (Morus rubra) e negra (Morus nigra).
O teor de ácido L-ascórbico encontrado nas cultivares branca, vermelha e
negra foi, respectivamente de 22,4, 19,4 e 21,8 mg.100g-1. Esses teores são
superiores aos encontrados nas frutas de araçá-amarelo, araçá-roxo e pitangavermelha avaliados nesse estudo, e semelhantes ao encontrado na uvaia.
Pantelidis et al. (2007) verificaram um teor elevado de ácido L-ascórbico
em uma fruta nativa do Hemisfério Norte, Cornelian cherry (Cornus mas cv.
Vermio). Esses autores encontraram, nessa fruta, 103,30 mg.100g-1 de ácido Lascórbico. Esse valor não foi superior, quando comparado com as frutas da
Região Sul da América do Sul, aos encontrados nos dois acessos de guabiroba
(GUA/01 e GUA/02).
Medina, Rodríguez e Romero (2007) avaliaram a composição química
de frutas nativas da América Central (Opontia dillenii e Opuntia fícus indica).
Esses
autores
verificaram
que,
respectivamente,
esses
dois
frutas
apresentaram 29,7 e 17,2 mg.100g-1 ácido L-ascórbico. Esses valores são
semelhantes aos teores encontrados na uvaia, um acesso de pitanga-laranja
(Pit15) e um acesso de pitanga-roxa (Pit40).
43
4.6 Atividade Antioxidante
Tabela 9. Atividade Antioxidante, expressa em mM de Trolox, em frutas nativas
da Região Sul da América do Sul.
Fruta
Araçá
Cereja-do-Mato
Guabiroba
Jabuticaba
Pitanga
Uvaia
Codificação1
AR01
AR03
AR05
AR27
AR46
AR47
AR48
AR49
AR57
AR58
AR59
AR60
AR64
AR72
AR73
AR74
AR75
AR08
AR09
AR10
AR11
AR18
AR19
AR28
AR29
AR42
AR44
AR94
AR100
AR101
CER
GUA/01
GUA/02
GUA/03
JAB
Pit15
Pit71
PitH
Pit40
PitU
Pit41
Pit49
Pit50
Pit53
Pit55
Pit61
Pit62
UVI
Cor
Amarelo
Roxo
Roxo
Laranja
Roxo
Laranja
Roxo
Vermelho
Amarelo
Atividade Antioxidante
(mm Trolox)
5,32±0,69e2
9,67±0,66e
4,13±0,24e
11,27±0,40e
4,21±0,32e
4,41±1,30e
5,78±1,18e
4,29±0,78e
4,57±0,49e
4,58±0,44e
4,12±0,75e
4,21±0,29e
4,58±0,37e
6,06±0,70e
4,81±0,70e
5,24±0,29e
5,81±0,28e
7,85±0,98e
6,73±1,56e
9,71±0,67e
7,33±0,91e
8,71±0,74e
7,36±1,33e
6,93±0,75e
8,97±0,27e
7,29±0,44e
4,21±1,41e
7,45±2,04e
8,52±0,98e
8,32±1,08e
8,59±1,18e
1695,59±131,31d
2654,00±839,74c
3519,85±932,07a
3361,26±676,55b
4,10±0,69e
3,45±0,25e
9,91±0,28e
6,63±0,60e
4,65±0,17e
4,78±0,44e
4,40±0,50e
3,92±0,78e
3,42±0,22e
4,07±0,09e
2,78±0,20e
3,88±0,34e
5,64±1,09e
1
Araçá(AR), Cereja-do-Mato(CER), Guabiroba(GUA), Jabuticaba(JAB), Pitanga(Pit), Uvaia(UVI); 2Médias seguidas da
mesma letra minúscula na linha não diferem entre si, pelo Teste de Duncan (p<0,05).
Os três genótipos de guabiroba (GUA/01, GUA/02 e GUA/03) e o de
jabuticaba apresentaram os maiores valores de atividade antioxidante
comparados com os demais avaliados nesse estudo. Não houve diferença
44
significativa entre os resultados obtidos no araçá-amarelo, araçá-roxo, pitangaroxa, pitanga-vermelha, pitanga-laranja, cereja-do-mato e uvaia (Tabela 9).
Dentre as seleções de pitangas, observou-se que a cultivar roxa, colhida
na propriedade rural (PitH), foi a que apresentou maior atividade antioxidante, e
ao mesmo tempo, os maiores teores de compostos fenólicos totais e de, além
de uma grande concentração de carotenóides totais. Presume-se que, os altos
teores destes compostos contribuíram para a maior atividade antioxidante
dessa fruta. Os teores encontrados no acesso de pitanga-roxa (PiH) sugere
que, por ter sido colhido no seu centro de origem, a expressão gênica foi
máxima. Bao et al. (2005), quando analisaram a atividade antioxidante de
quatro “chinese berry” (Myrica rubra), verificaram que as frutas mais ricas em
compostos antociânicos foram também as que apresentaram maior atividade
antioxidante.
As
seleções
de
araçá-amarelo,
araçá-roxo
e
guabiroba
apresentaram atividade antioxidante superior às seleções de pitanga, porém,
apresentaram teores inferiores de antocianinas totais, os quais são os outros
compostos que supostamente conferem a estas frutas, o potencial antioxidante.
A atividade antioxidante das duas frutas não nativas avaliadas não
diferiu significativamente aos encontrados nos genótipos de frutas nativas
(Figura
10).
Apenas
as
frutas
de
guabiroba
e
jabuticaba
diferiram
significativamente entre os demais acessos avaliados.
Os três acessos de guabiroba (GUA/01, GUA/02 e GUA/03) não
apresentaram correlação entre as variáveis analisadas (compostos fenólicos
totais, antocianinas totais, carotenóides totais e ácido L-ascórbico) e a
respectiva atividade antioxidante. A jabuticaba (JAB) apresentou correlação
positiva (R2 = 0,5437) somente quando se correlacionou o teor de antocianinas
totais com sua atividade antioxidante (Tabela 10).
45
3500,00
3000,00
2500,00
2000,00
1500,00
1000,00
MIR
AMR
UVI
Pit62
PitH
Pit15
JAB
GUA/01
-500,00
AR94
0,00
CER
500,00
AR75
Atividade Antioxidante (mM
Trolox)
4000,00
Fruto
Figura 10. Atividade Antioxidante dos principais frutas nativas da Região Sul da América do Sul
e frutas não nativa s. Araçá-amarelo (AR75), araçá-roxo (AR94), cereja-do-mato
(CER), guabiroba (GUA/01), jabuticaba (JAB), pitanga-laranja (Pit15), pitanga-roxa
(PitH) e pitanga-vermelha (Pit62) e não nativa s amora-preta (AMR) e mirtilo (MIR) da
América do Sul avaliados. As barras indicam as diferenças entre as médias.
Quatro acessos de araçá-amarelo (AR47, AR57, AR64 e AR73), dois
de araçá-roxo (AR11 e AR28), dois de pitanga-roxa (PitH e Pit40) e um de
pitanga-vermelha
(Pit41)
obtiveram
resultados
significativos
quando
correlacionou-se seus respectivos teores de compostos fenólicos totais e sua
atividade antioxidante (Tabela 10).
Poucas frutas apresentaram boa correlação entre o teor de
antocianinas totais e a atividade antioxidante (araçá-amarelo AR05, araçá-roxo
AR11, araçá-roxo AR94, jabuticaba e pitanga-vermelha Pit50). O restante das
frutas avaliadas apresentou correlações negativas (Tabela 10).
Dois acessos de araçá-amarelo (AR58 e AR60) apresentaram alta
correlação, R2 = 0,9412 e R2 = 0,9728, respectivamente, quando analisou o
teor de carotenóides totais e suas respectivas atividades antioxidantes. Um
único fruto (PitU) apresentou alta correlação (R2 = 0,7794) entre o teor de
ácido L-ascórbico e a atividade antioxidante (Tabela 10).
46
Porém, verificou-se que as frutas que apresentaram boas correlações
não foram as frutas que obtiveram atividade antioxidante superiores; com isso
não se observou uma alta correlação entre os compostos biologicamente ativos
e a atividade antioxidante. Estes dados sugerem que a mistura dos compostos
presentes nas frutas e seu sinergismo são responsáveis pela atividade
antioxidante e não apenas uma classe específica de compostos.
Gil et al. (2002) também verificaram que não houve uma relação nítida
entre o conteúdo de compostos fenólicos totais e a capacidade antioxidante,
quando analisou cinco cultivares de nectarinas e de pêssegos. Não é possível
generalizar esse tipo de relação, o que se presume que a atividade
antioxidante é mais relacionada com cada cultivar (Gil et al., 2002). Porém,
vários autores correlacionam o alto teor de compostos fenólicos e antociânicos
com uma alta atividade antioxidante (Imeh e Khokhar, 2002; Pinelo et al., 2004;
Roberts e Gordon, 2003; Sun et al., 2002).
Há estudos que correlacionam o conteúdo total de compostos fenólicos
com a atividade antioxidante em frutas, vegetais, ervas e especiarias
(Ehlenfeldt e Prior, 2001; Jimenez-Escrig et al., 2001; Scalzo et al., 2005;
Velioglu et al., 1998; Vinson et al., 2001). Gil et al. (2002) também obtiveram
correlações similares quando analisaram compostos fenólicos totais e atividade
antioxidante (R2 entre 0,93 e 0,96) em nectarinas, pêssegos e ameixas, porém
para estas mesmas frutas não obtiveram boa correlação ao comparar a
atividade antioxidante com os teores de ácido ascórbico. Sun et al. (2002)
encontraram correlação entre o teor de compostos fenólicos e a atividade
antioxidante nos extratos de frutos, tais como, maçã, cramberrie, morango e
laranja (R2 = 0,9788).
47
Tabela 10. Correlação de Pearson entre os compostos biologicamente ativos e
a respectiva atividade antioxidante em frutas nativas da Região Sul
da América do Sul.
Fruto1
Compostos Fenólicos Totais
Antocianinas Totais
Carotenóides Totais
Ácido L-Ascórbico
AR01
0,1293
0,5986
-0,5298
-0,2703
AR03
-0,5536
-0,6853
-0,6821
0,0000
AR05
0,4016
0,7734*
0,6580*
-0,2819
AR27
0,1973
-0,4969
-0,7171
0,0000
AR46
-0,3645
-0,2202
0,4848
0,7045*
AR47
0,5749*
-0,3031
-0,6372
-0,1135
AR48
-0,1489
-0,2645
-0,0653
-0,3615
-0,4770
AR49
0,4042
0,1822
0,0227
AR57
0,6243*
-0,3936
-0,6830
-0,1317
AR58
-0,6885
-0,8045
0,9412*
-0,0938
AR59
-0,0477
-0,2651
-0,4163
-0,1609
AR60
-0,1677
-0,1222
0,9728*
0,1157
AR64
0,8158*
-0,7801
-0,6661
-0,1514
-0,3593
AR72
-0,4684
-0,1491
0,4589
AR73
0,8572*
0,6466*
0,4483
-0,0219
AR74
-0,7769
-0,0042
0,2021
-0,3966
AR75
0,2372
-0,6836
-0,7041
0,3952
AR08
0,1878
0,1720
0,0769
0,4136
AR09
-0,2024
-0,2344
0,6096*
0,0000
AR10
0,3984
0,0289
0,3714
-0,7231
AR11
0,7866*
0,9090*
-0,0791
0,1356
AR18
-0,6303
0,4842
0,1603
0,0000
AR19
-0,6923
-0,6481
-0,8883
-0,0811
AR28
0,7511*
-0,8236
0,7279
0,0000
AR29
0,4405
0,4413
0,3881
0,0000
AR42
0,4727
-0,5073
-0,0370
0,4578
AR44
-0,6767
-0,3760
-0,4672
0,1177
AR94
-0,1155
0,5747*
0,0083
0,2216
AR100
0,4643
-0,3560
-0,2649
-0,0496
AR101
-0,09082
-0,8509
0,7027*
-0,1617
CER
-0,8738
-0,7131
-0,5081
0,0000
GUA/01
-0,0146
0,3199
-0,0527
-0,2242
GUA/02
0,42221
0,25624
0,2326
0,4941
GUA/03
-0,4613
-0,3327
-0,1891
0,0000
JAB
-0,6873
0,5437*
-0,3813
-0,5278
Pit15
-0,8386
-0,9102
0,7823*
0,4262
Pit71
-0,8172
-0,8599
-0,6923
0,2018
HER
0,5977*
0,0752
-0,0880
0,2521
Pit40
0,9345*
-0,9453
-0,9605
-0,2127
0,7794*
PZU
-0,2114
0,2482
0,1307
Pit41
0,8820*
0,7783*
-0,9132
-0,0126
Pit49
-0,1369
0,1256
-0,6598
-0,1894
Pit50
-0,3525
0,5374*
-0,5269
-0,0848
Pit53
0,4952
-0,4483
-0,8874
0,2157
Pit55
-0,3581
-0,1868
0,7177*
0,3857
Pit61
0,5917*
0,5001*
0,1456
0,4408
Pit62
0,6678*
0,6484*
0,7019*
-0,6396
UVI
0,2184
0,0506
-0,5269
0,4618
1
Araçá(AR), Cereja-do-Mato(CER), Guabiroba(GUA), Jabuticaba(JAB), Pitanga(Pit), Uvaia(UVI); * Termos que
obtiveram correlação acima de 0,5000, pelo Teste de Correlação de Pearson (p<0,05).
48
CONCLUSÕES
Considerando-se os dados obtidos neste estudo, pode-se concluir que:
1.
Há significativa variabilidade na composição química entre os
acessos e espécies, e há acessos produtores de frutas com altos
teores de compostos potencialmente bioativos, com destaque para
compostos fenólicos;
2.
Frutas
de
guabirobeira
e
jabuticabeira
são
aqueles
que
apresentaram a maior atividade antioxidante;
3.
Pitanga, uvaia e guabiroba são fontes ricas de carotenóides;
4.
Não houve correlação positiva na maioria dos acessos com o
conteúdo de compostos fenólicos totais, antocianinas totais,
carotenóides totais e ácido L-ascórbico com a atividade antioxidante
apresentada pela fruta.
49
CAPÍTULO II – QUANTIFICAÇÃO DE COMPOSTOS FENÓLICOS
INDIVIDUAIS EM FRUTAS NATIVAS DA REGIÂO SUL DA AMÉRICA DO
SUL E AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIPROLIFERATIVA FRENTE A
CÉLULAS TUMORAIS
INTRODUÇÃO
A Região Sul da América do Sul possui espécies vegetais nativas
produtoras de frutas ricas em compostos considerados como biologicamente
ativos do ponto de vista de alimentos funcionais, como é o caso da pitanga e
do araçá. Essas frutas contêm altos teores de compostos fenólicos, dentre
eles, as subclasses dos ácidos fenólicos e de flavonóides.
Esses compostos possuem ação antioxidante, combatendo os radicais
livres que provocam o estresse oxidativo nas células, interrompendo a cadeia
de reações de oxidação em diversas moléculas, como lipídeos, proteínas e
ácidos nucléicos, atuando na inibição das etapas de iniciação e propagação,
retardando o processo oxidativo. Outros benefícios à saúde são atribuídos a
esses compostos, dentre os quais atividade anticancerígena, antiproliferativa,
antimicrobiana, antiinflamatórica e antiterarogênica (Ross e Kasum, 2002).
O câncer é uma das doenças de maior morbidez na atualidade, tendo
em vista que a expectativa média de vida aumentou e a suscetibilidade a
carcinogenese aumenta com o envelhecimento da população. Há a
necessidade de desenvolver novas drogas, combinação de moléculas e novos
tratamentos utilizando compostos sintéticos, biológicos ou produtos naturais
50
para a prevenção ou cura dessas doenças. Os diversos compostos presentes
naturalmente nas espécies vegetais podem auxiliar a combater o avanço
dessas doenças no organismo humano. Diversos estudos epidemiológicos
associam dietas contendo alimentos ricos em compostos fenólicos com uma
baixa incidência de câncer (Block, Patterson e Subar, 1992; Willet, 1994; Fang,
Yang e Wu, 2002).
Na primeira etapa desse estudo comprovou-se a hipótese de que as
frutas
da
família
das
mirtáceas,
mais
especificamente
a
guabiroba
(Campomanesia xanthocarpa) e a jabuticaba (Mircyaria cauliflora), possuem
alta atividade antioxidante e altos teores de compostos fenólicos totais.
Compostos fenólicos e derivados, como a quercetina, luteolina e catequinas,
são considerados melhores antioxidantes que a vitamina C, vitamina E e βcaroteno, em uma mesma concentração molar (Gao et al., 1999). Acredita-se
que esses compostos apresentem potencial como agentes antiproliferativos de
células tumorais humanas com linhagens de células de carcinoma cervical
(Narayanan et al., 1999), câncer de colon (Jayaprakasha et al., 2007) e câncer
de mama (Saleem et al., 2002). Estudos demonstram que compostos dos
grupos fenólicos, dentre eles o ácido elágico e compostos do grupo dos
carotenóides, dentre eles a luteolina, podem apresentar essa propriedade.
Acredita-se que as frutas nativas possuem uma composição de
compostos fenólicos individuais característica da espécie e que esses
compostos são importantes agentes antiproliferativos frente a células tumorais.
Nesse contexto, com o objetivo de estudar o potencial dos extratos das
frutas ricas em compostos fenólicos, obtidos a partir das frutas nativas da
Região Sul do Brasil e da América do Sul, buscou-se quantificar os compostos
fenólicos individuais presentes e avaliar a atividade antiproliferativa dos
extratos frente à linhagem células cancerígenas.
51
REVISÃO DE LITERATURA
2.1 Compostos Bioativos em Frutas e Ação Terapêutica
Em geral, os alimentos de origem vegetal são ricos em compostos
biologicamente ativos, principalmente compostos fenólicos, e dentre eles as
antocianinas, flavonóis, flavononas e ácidos fenólicos (Lu e Foo, 2001; Murthy,
Singh e Jayaprakasha, 2002; Manach et al., 2004).
Especial atenção tem sido dada a estes compostos devido à correlação
com alta atividade antioxidante (Kalt et al., 1999; Wang e Lin, 2000). Os
compostos fenólicos, especialmente os flavonóides, são conhecidos pela
elevada capacidade de captar radicais livres causadores de estresse oxidativo,
atribuindo um efeito preventivo de doenças crônicas (Tsuda et al., 1994; Wang
et al., 2002; Katsube et al., 2003; Lapidot et al., 2004). Além disso, possuem
propriedades
anticancerígenas,
antiinflamatórias,
antimicrobianas
e
antiprolierativas (Satué-Gracia, Heinonen e Frankel, 1997; Prior et al., 1998;
Sanchéz-Moreno, Larrauri e Saura-Calixto, 1998; Ross e Kasum, 2002).
Compostos fenólicos tais como, ácido elágico, catequinas e ácidos clorogênico,
caféico e ferúlico, podem atuar como potentes agentes antimutagenicos e
anticarcinogênico (Ayrton et al., 1992; Edenharden e Tang, 1997).
52
2.2 Câncer e Ação Antiproliferativa
O câncer surge devido a mutações genéticas, espontâneas ou induzidas
por agentes bióticos ou abióticos. Os radicais livres que promovem desordens
no ciclo celular podem aumentar a taxa de proliferação de células anormais e/
ou induzir deficiências nas taxas de morte celular, culminando com a formação
de agrupamentos de clones de células neoplásicas, os tumores (Ferrari e
Torres, 2002).
Os mecanismos de ação dos fitoquímicos na prevenção do câncer
superam
a
atividade
antioxidante
frente
a
radicais
livres.
Eles
se
complementam e sobrepõem mecanismos de ação, incluindo atividade
antioxidante frente aos radicais livres; regulação da expressão genética em
células em proliferação, diferenciação celular, oncogenes e genes supressores
de tumor; indução de apoptose; modulação da atividade enzimática na
detoxicação, oxidação e redução; estimulação do sistema imune; regulação do
metabolismo de hormônios; e efeitos antibacterianos e antivirais (Liu, 2004).
Estudos epidemiológicos revelam que dietas contendo alimentos ricos
em compostos fenólicos estão associadas a uma menor incidência de câncer
(Fang, Yang e Wu, 2002). Adhami et al., 2007 e Nooman, Benelli e Albini, 2007
observaram que polifenóis, tais como a epicatequina, presente no chá verde
(Camellia sinensis), são importantes agentes biológicos com potencial
anticancerígeno e antiproliferativo. Yang and Wang (1993) e Stroner e Mukhtar
(1995) verificaram que polifenóis presente em pequenas frutas possuem
importante ação em células cancerígenas e no processo de metástase, se
destacando o ácido elágico. Narayanan et al. (1999) verificaram o efeito do
ácido elágico na inibição da proliferação de células e na indução da apoptose
em linhagens de células tumorais cervicais.
Yu et al. (2005), por meio de
ensaios in vivo, observaram que o ácido elágico atua na redução do estresse
oxidativo, o qual é responsável pela formação de diversas doenças no
organismo humano, tais como os diferentes tipos de câncer. Também foi
comprovado em testes in vitro e in vivo que os outros compostos fenólicos
53
induzem respostas consistentes através de efeito protetor em condições
degenerativas (Chung et al., 2002; Manach, Mazur e Scalburt, 2005).
Bomser et al., (1996), e Prochaska, (1994) ao estudarem extratos
obtidos a partir de espécies de Vaccinium, verificaram que composto presentes
tem potencial anticarcinogênico e que uma fração específica isolada do extrato
tem atividade indutora da quinona redutase, enzima essencial na detoxicação
de xenobióticos e carcinogênicos. Cheng et al. (2006) sugerem que as
antocianinas presentes em mulberrie (Morus alba L.) poderiam diminuir a
proliferação de células cancerígenas A549 (câncer humano de pulmão).
Atividade antiproliferativa foi testada usando frutos, tais como cranberrie
(Vaccinium macrocarpon) (Yan et al., 2002; Sun e Liu, 2006), mulberrie (Morus
alba) (Cheng et al., 2006), litchi (Litchi chinensis) (Wang et al., 2006) e citros
(Citrus sinensis) (Camarda et al., 2007), obtendo resultados satisfatórios, ou
seja, inibição da proliferação de células tumorais. Além desses autores, outros
realizam estudos com diversos tipos de extratos vegetais e linhagens de
células tumorais obtendo resultados significativos (Lu et al., 2005; Cheng et al.,
2006; Veeriah et al., 2006; Sestili et al., 2007).
Ao avaliar a atividade antiproliferativa do extrato bruto das folhas da L.
divaricata frente à linhagens de células tumorais humanas, Tanaka et al. (2005)
observaram o efeito citostático sem seletividade de extrato bruto das folhas, na
concentração
de
250µg.mL-1,
inibindo
em
aproximadamente
85%
o
crescimento celular das linhagens de UACC.62, MCF-7 e C786.0; além de um
efeito citotóxico com seletividade nesta mesma concentração para as linhagens
OVCAR.3 (20% de morte), K.562 (30% de morte) e NCL.ADR (50% de morte).
Cheng et al. (2006) isolaram antocianinas presentes em extratos de
mulberry (Morus alba L.) e verificaram que cianidina 3-rutinosidase e cianidina
3-glicosidase possuem forte efeito anticancerígeno frente a células de A549
(linhagens de células de câncer de pulmão). Shih, Yeh e Yen (2005)
analisaram malvinidina, um exemplo de antocianina, frente em linhagens de
54
células de adenocarcinoma gástrico e verificaram eficácia no apoptose dessas
células.
Eberhardt et al. (2000) e Veeriah et al. (2006) verificaram que compostos
fenólicos presentes em maçãs podem inibir células de câncer de cólon in vitro.
Veeriah et al. (2006) encontraram que uma mistura de flavonóides obtidos a
partir de maçãs inibe a proliferação de células de HT29 em concentrações subcitotóxicas e induzem a expressão de vários genes.
55
MATERIAL E MÉTODOS
3.1 Material Vegetal
Foram utilizadas frutas nativas da família Myrtaceae (pitanga araçá,
guabiroba, jabuticaba, cereja-do-mato e uvaia) colhidos entre 2005 e 2008
(Tabela 1). Dentre todos os 48 acessos de frutas nativas estudadas no Capítulo
I, apenas nove destas foram selecionadas para a segunda parte desse estudo,
uma de cada seleção de pitanga-roxa (PitH), pitanga-vermelha (Pit62), pitangalaranja (Pit15), araçá-roxo (AR94), araçá-amarelo (AR75), jabuticaba (JAB),
cereja-do-mato (CER), guabiroba (GUA/01) e uvaia (UVI). A escolha desses
genótipos foi feita em função da sua composição em relação aos seus teores
totais de compostos fenólicos. A colheita das frutas foi realizada no estádio de
fruta madura, pela cor externa da casca característica de cada fruta. Após a
colheita, cada genótipo foi imediatamente estocado a -80ºC até o momento das
avaliações. Todas as avaliações foram feitas com extratos com as frutas nonpeeled, pois essa é a forma como são comumente consumidas. Dentre as
frutas selecionadas, a pitanga-roxa (PitH) e a guabiroba (GUA/01) foram
colhidas em propriedades rurais localizadas no Município de Pelotas/RS, e as
demais foram colhidas no Banco de Germoplasma da Embrapa Clima
Temperado, também localizado no Município de Pelotas/RS.
56
3.2.
Identificação
e
Quantificação
de
Compostos
Fenólicos
Individuais
A extração e quantificação dos compostos fenólicos individuais, por
cromatografia líquida de alta eficiência foi segundo método adaptado de
Hänikken e Törrönen (2000) e Zambiazi (1997).
3.2.1 Padrões Cromatográficos
Ácido elágico, ácido gálico, ácido caféico, ácido hidroxobenzóico, ácido
p-cumárico, ácido ferúlico, epicatequina, catequina, miricetina, kaempferol e
quercetina. (Sigma Chemical Co. St. Louis, USA e Fluka Milwaukee, WI, USA).
3.2.2 Método de Extração
As frutas (5g) foram maceradas e adicionou-se 4,9 mL de HCL p.a. com
o objetivo de realizar uma hidrólise ácida e 30mL de metanol p.a.. As amostras
foram mantidas em banho-maria a 35°C por 24 horas, após o qual foram
filtradas em algodão e lavadas com duas porções de 10mL de metanol p.a.
Após a lavagem, completou-se o volume de 50mL com metanol p.a. e
concentrado em rota-evaporador a 40°C até o volume final de 5mL. Completouse o volume do extrato para 5mL e centrifugou-se o concentrado a 7000rpm
por 10 minutos. O sobrenadante foi usado para análise cromatógrafica.
3.2.3 Análise Cromatográfica
A análise cromatográfica foi realizada em cromatógrafo Shimadzu,
equipado com módulo de mistura de solventes LC-10ATVP, desgaseificador
FCV-10AVP, bomba reodine DGU-14A, sistema de controle SCL-10AVP, forno de
coluna CTO-10ASVP e amostrador automático SIL-10AF. Foi utilizada uma
57
coluna de separação analítica de fase reversa, Nova-Pak C18 (3,9cm x 150mm
x 4µm). Como fase móvel utilizou-se dois solventes: (A) solução de metanol (B)
solução de ácido acético 1% (Tabela 11). Injetou-se 20µL de amostra, com
fluxo de 0,8mL.min-1, e temperatura de coluna mantida entre 25°C. O tempo de
eluição da amostra foi de 45 minutos. A identificação do composto foi realizada
através de informações obtidas dos espectros de absorção no UV-visível,
modelo SPD-10AVVP em um comprimento de onda de 280nm.
Tabela 11. Gradiente de eluição dos solventes A e B na determinação de
compostos fenólicos individuais.
Tempo (minutos)
Solvente A (%)1
Solvente B (%)2
0
100
0
25
60
40
27
60
40
37
95
5
42
95
5
45
100
0
1
2
Solvente A: solução de água Milli-Q:ácido acético p.a. (99:1% v/v); Solvente B: metanol p.a.
100%.
Os dados obtidos foram adquiridos e processados com o uso do
software Class-VP.
Os compostos fenólicos individuais foram quantificados
com base de curva de calibração externa, cujos padrões foram dissolvidos em
metanol p.a. A concentração das soluções, obtidas a partir dos padrões
cromatográficos, variou entre 0,125-12,5µg.25µL-1 para os padrões de ácido pcoumárico, ácido caféico, quercetina, ácido ferúlico, epicatequina, ácido phidroxibenzóico, ácido gálico e ácido elágico; 1,25-87,5µg.25µL-1 para a
catequina e 0,125-6,25µg.25µL-1 para os padrões miricetina e kaempferol. Os
resultados foram expressos em mg.100g-1 de peso fresco.
58
3.3 Atividade Antiproliferativa frente a Células Tumorais
3.3.1 Preparo do Extrato
As frutas foram maceradas e, posteriormente, centrifugadas, sob
refrigeração a 4°C e 4000 g por 30 minutos. Após esse período, o
sobrenadante foi armazenado a -80°C até o momento das avaliações.
3.3.2 Linhagens de Células e Cultivo
Linhagens de células tumorais humanas MCF-7 (adenocarcinoma de
mama) adquiridas no Banco Celular da Universidade do Rio de Janeiro/RJ.
Como controle foi usado linhagens de células 3T3 (fibroblastos embrionários de
ratos). As células foram estocadas em nitrogênio líquido e descongeladas em
banho-maria. Para o cultivo celular (5 x 105 mL/células) foi adicionado meio
suplementar com 20% de soro fetal bovino. O meio de cultivo foi trocado a
cada dois ou três dias e o acompanhamento do crescimento celular se deu a
cada 24 horas por meio de um microscópio óptico invertido. As células foram
mantidas a 37°C, em atmosfera úmida contendo 95% de O2 e 5% de CO2.
3.3.3 Determinação da Atividade Antiproliferativa
A atividade antiproliferativa foi avaliada nas linhagens de células
tumorais e não tumorais já citadas. Essas linhagens celulares foram
microtituladas na mesma densidade e pré-incubadas por 24 horas.
As células foram colocadas em cultivo monocamada, segundo Monks et
al., 1991. As placas, contendo as células aderidas, durante 24 horas a 37°C e
100% de UR (umidade relativa) foram expostas a cada um dos extratos
vegetais, em três diluições diferentes, por 48 horas e comparadas a um grupo
59
controle. Foram realizadas três repetições para cada diluição de extrato. Após
o período de incubação, nas condições de 37°C, 5% de CO2 e 100% de UR, as
células foram fixadas mediante a adição de TCA (ácido tricloroacético) e
incubadas em refrigerador a 4°C durante uma hora. O ensaio colorimétrico foi
realizado mediante a adição de solução de sulforodamina B 0,4% p/v (com
ácido acético a 1%) em cada uma das cavidades da placa de cultivo. Essa
placa permaneceu em repouso, em temperatura ambiente por 30 minutos, e
posteriormente, a solução não fixada foi desprezada mediante lavagens com
ácido acético a 1%. O corante fixado nas proteínas celulares foi ressolubilizado
com tampão Tris Base 10 mM (pH 10,0) sob agitação giratória, em uma
velocidade de 50 rpm, à temperatura ambiente, por um tempo de cinco minutos
(Rubinstein et al., 1990; Skehan et al., 1990). A leitura da densidade óptica foi
realizada em espectrofotômetro leitor de placa ELISA, em um comprimento de
onda de 492 e 560 nm (Ithrat et al., 2004; Skehan et al., 1990).
A medida da viabilidade e sobrevivência celular, segundo Monks et al.,
1991, foi expressa em %T/C [(densidade óptica das células tratadas /
densidade óptica do controle celular) x 100]. Por meio destas medidas, a
resposta celular foi calculada nos termos de estimulação do crescimento,
ausência do efeito extrato/fração, inibição do crescimento, morte celular e
proliferação celular.
3.4 Delineamento Experimental
O delineamento foi inteiramente casualizado, com três repetições para
cada tratamento. Os resultados foram expressos como médias. As diferenças
das variáveis durante o armazenamento foram avaliadas pelo Teste de
Duncan, em nível de 5%. As análises estatísticas foram realizadas com o
auxílio do programa de computação STATISTICA 6.0.
Os resultados da análise de atividade antiproliferativa e atividade
antioxidante foram tabulados e analisados em software estatístico GraphPad
Prism, versão 4.00 para Windows (GraphPad Software, San Diego,
Califórnia, EUA, ‘www.graphpad.com’, 2003). Com base nos resultados, além
60
do crescimento celular, foi avaliada a taxa de proliferação celular ao longo dos
dias de teste.
61
RESULTADOS E DISCUSSÃO
4.1 Compostos Fenólicos Individuais
Nas nove frutas avaliadas, nessa etapa do trabalho, verificou-se que,
dentre
os
compostos
fenólicos,
dois
compostos
apresentaram
picos
representativos em todos os acessos avaliados, o ácido gálico (ácido fenólico)
e a catequina (flavanol).
Em menor concentração, o ácido caféico, ácido
ferúlico, ácido elágico (ácidos fenólicos) e o kaempferol (flavonol) foram
identificados em frutas de cereja-do-mato (CER), pitanga-vermelha (Pit62),
uvaia (UVI), pitanga-roxa (PitH), jabuticaba (JAB) e guabiroba (GUA/01)
(Tabela 12).
A soma do conteúdo de todos os compostos fenólicos individuais
quantificados, através da determinação por cromtografia líquida de alta
eficiência, perfaz de 40 a 94,62% do total de compostos fenólicos determinados
por espectrofotometria (Tabela 5, Capítulo I). A diferença no conteúdo dos
compostos fenólicos se deve pela presença de outros compostos presentes em
seus subgrupos, os quais não foram quantificados como ácido fenólico ou
flavanol, mas que são quantificados na determinação de compostos fenólicos
totais.
Os frutos de guabiroba (GUA/01) apresentaram os maiores teores de
ácido gálico (305mg.100g-1), entre as nove frutas avaliadas, seguido dos frutos
de jabuticaba (JAB) com 137,64mg.100g-1 e de araçá-roxo (AR94) com
62
131,64mg.100g-1. O menor conteúdo deste composto foi identificado no fruto
de pitanga-laranja (Pit15), 19,57mg.100g-1.
Tabela 12. Teor de compostos fenólicos individuais em frutos nativos da
Região Sul da América do Sul.
Fruta
Catequina
Ácido
Caféico
Ácido
Ferúlico
Ácido
Elágico
56,25±0,50d
19,45±0,84d
nd
3
nd
nd
nd
75,70
131,64±11,16b
95,14±22,45b
nd
nd
nd
nd
226,78
28,10±5,70ef
64,27±2,92bc
8,80±1,57b
1,06±0,09a
nd
nd
102,23
305,08±36,37a
576,04±84,17a
nd
nd
7,29±3,08b
nd
888,41
137,64±12,52b
23,99±5,75d
7,44±0,51b
nd
1,99±1,42c
19,57±1,50f
27,19±3,78cd
nd
nd
nd
nd
46,76
22,64±0,79f
38,24±3,21cd
70,44±14,29a
nd
15,88±0,48a
nd
147,20
86,48±0,99c
23,41±0,29d
1,85±0,42c
nd
nd
nd
111,74
45,51±27,67de
42,42±6,78cd
0,54±0,04c
nd
nd
nd
88,47
Ácido Gálico
Araçá
Amarelo
(AR75)
Araçá
Roxo
(AR94)
Cereja
do
Mato
(CER)
Guabiroba
(GUA/01)
Jabuticaba
(JAB)
Pitanga
Laranja
(Pit15)
Pitanga
Roxa
(PitH)
Pitanga
Vermelha
(Pit62)
Uvaia
(UVI)
1
2
Kaempferol Total
23,17±0,63a 194,23
1
Resultados expressos em mg.100g-1; 2 Médias seguidas da mesma letra minúscula na linha não diferem entre si, pelo
Teste de Duncan (p<0,05); 3Não detectado.
Em relação ao outro composto fenólico majoritário (catequina),
novamente a guabiroba (GUA/01) foi o acesso que apresentou o maior teor,
com 576,04mg.100g-1. A catequina foi identificada como composto majoritário
nos frutos de cereja-do-mato (CER), guabiroba (GUA/01) e pitanga-laranja
(Pit15),
com
64,27mg.100g-1,
576,04mg.100g-1
e
27,19mg.100g-1,
63
respectivamente. O menor conteúdo foi identificado no fruto de araçá-amarelo
AR75 (19,45mg.100g-1).
O ácido caféico foi identificado em cinco frutas nativas, apresentandose em quantidades superiores apenas nos frutos de pitanga-roxa (PitH) quando
comparado com as demais frutas avaliadas. Este composto fenólico também foi
o composto majoritário presente apenas nos frutos de pitanga-roxa (PitH).
O ácido ferúlico foi identificado em apenas um dos acessos de frutas
nativas avaliadas nesse estudo, cereja-do-mato CER (1,06mg.100g-1), mesmo
assim em pequenas quantidades. O ácido elágico foi identificado em três frutas
nativas, guabiroba (GUA/01), jabuticaba (JAB) e pitanga-roxa (PitH), em todos
eles também em pequenas quantidades. O kaempferol foi identificado somente
em um das frutas avaliadas, na jabuticaba (JAB), com 23,17mg.100g-1.
A guabiroba (GUA/01) foi o acesso que apresentou a maior
concentração de ácido gálico e de catequina, entre os nove acessos avaliados
nesse estudo. A atividade antioxidante destes frutos também foi elevada
(1.695,59mM Trolox) quando comparada com a atividade das outras 47 frutas
avaliadas na primeira etapa, além de apresentar alto teor de compostos
fenólicos totais e de ácido L-ascórbico (Tabela 5, 8 e 9, Capítulo I). Embora o
conteúdo de antocianinas e de carotenóides totais seja intermediário, quando
comparado com o conteúdo das demais frutas. Esses dados sugerem que a
atividade antioxidante pode estar relacionada ao teor de algum composto
fenólico individual presente nas frutas. A combinação destes compostos e o
sinergismo com outros, podem ser os principais fatores que conferem a
atividade antioxidante as frutas. Estes dados estão em desacordo com outros
autores, que afirmam que a atividade antioxidante está diretamente relacionada
aos altos teores de compostos fenólicos totais e de antociânicos total presentes
nos frutos (Imeh e Khokhar, 2002; Sun et al., 2002; Roberts e Gordon, 2003;
Pinelo et al., 2004).
A pitanga-vermelha (Pit62) foi a fruta que apresentou a menor atividade
antioxidante (3,88mM Trolox) entre as nove frutas estudadas nessa etapa.
64
Porém, apresentou um conteúdo de ácido gálico e de catequina superiores aos
acessos de araçá-amarelo (AR75). O acesso de araçá-amarelo (AR75)
apresentou teor inferior de ácido gálico e de catequina, com respectivamente,
46,54mg.100g-1 e 19,40mg.100g-1, mas apresentou uma atividade antioxidante
superior ao acesso de pitanga-vermelha (Pit62).
A pitanga-roxa (PitH) foi uma das frutas, entre os 48 acessos avaliados
na primeira etapa, que apresentou a maior atividade antioxidante (Tabela 9,
Capítulo I), diferindo significativamente apenas dos três acessos de guabiroba
(GUA/01, GUA/02 e GUA/03) e de jabuticaba (JAB). Na determinação de
compostos fenólicos individuais, na pitanga-roxa (PitH), observou-se um teor
inferior de ácido gálico e de catequina, em relação aos acessos de uvaia (UVI)
e araçá-roxo (AR94), mas estes dois acessos
apresentaram atividade
antioxidante inferior ao da pitanga-roxa (Tabela 9, Capítulo I). Porém, a
pitanga-roxa (PitH) apresentou teor de ácido caféico elevado, em relação aos
outros compostos avaliados (Tabela 12), o que sugere que não é apenas o
conteúdo de compostos fenólicos totais, mas talvez a presença de alguns
ácidos fenólicos, ou o sinergismo e/ou combinação de um ou mais compostos
que são responsáveis pela atividade antioxidante das frutas.
Com isso pode-se sugerir que a composição química de compostos
fenólicos individuais não está linearmente correlacionada com a respectiva
atividade antioxidante. A combinação de compostos ou de uma subclasse de
compostos e seus sinergismos podem ser os responsáveis por conferir à
atividade antioxidante às frutas.
Frutas de outros centros de origem (Hemisfério Norte), tais como, amora
e mirtilo apresentaram uma composição de compostos fenólicos individuais
distintos. Zadernowski, Naczk e Nesterowicz (2005) avaliaram diversas
pequenas frutas e verificaram concentrações de ácido gálico inferior as frutas
nativas da Região Sul da América do Sul. Como foi sugerido no capítulo
anterior, a composição química é uma característica genotípica e está sujeita a
fatores pré-colheita climáticos e ambientais (Robards et al., 1999). Esses
autores verificaram que frutos de mirtilo (Vaccinium myrtillus) possuem na sua
65
composição química, além do ácido gálico (9,36mg.100g-1) e do caféico
(11,72mg.100g-1), presentes nas frutas nativas da Região Sul da América do
Sul, outros ácidos derivados do ácido p-hidroxibenzóico, tais como, ácido
siríngico (4,16mg.100g-1) e ácido vanílico (11,7mg.100g-1), além de ácido pcoumarico (76,18mg.100g-1) e hidroxicaféico (72,38mg.100g-1). Chiou et al.
(2007), ao avaliarem frutos de Vitis vinifera var. Vostizza, verificaram teor de
ácidos fenólicos e flavonols individuais distinto aos teores identificados nas
frutas nativas da Região Sul da América do Sul, em média, 0,52mg.100g-1 para
ácido gálico, 0,55 mg.100g-1 para ácido caféico, 0,05 mg.100g-1 para
kaempferol é de 0,37 mg.100g-1 para a quercetina.
Reynertson et al. (2008) também analisaram frutas da família
Myrtaceae e verificaram baixos teores de flavonols (quercetina, kaempferol e
miricetina) inferior a 24mg.100g-1, em média.
Das frutas nativas avaliadas neste estudo, apenas a jabuticaba (JAB)
apresentou teor de kaempferol, o que sugere que seja uma característica da
família botânica a baixa incidência dessa classe de compostos fenólicos na
composição química das frutas nativas da Região Sul da América do Sul.
4.2. Atividade Antiproliferativa
O efeito inibitório dos extratos vegetais na proliferação das linhagens de
células de adenocarcinoma de mama em humanos (MCF-7) foi investigado
nesse estudo, através de ensaio com duas linhagens de células, uma linhagem
controle de fibroblastos embrionários de ratos (3T3) e outra de adenocarcinoma
de mama em humanos (MCF-7); e três concentrações de extratos (6µL.200mL, 4µL.200mL-1 e 2µL.200mL-1).
1
Verificou-se que, dentre as nove frutas avaliadas, apenas os extratos de
pitanga-vermelha (AR62) e de araçá-roxo (AR94) apresentaram inibição de
proliferação de células tumorais (Figuras 12 e 14).
66
Nos extratos obtidos a partir do acesso de araçá-roxo (AR94), a taxa de
inibição da proliferação das células de adenocarcinoma de mama em humanos
(MCF-7) foi entre 40 e 50%, enquanto que nos extratos obtidos a partir dos
frutos de pitanga-vermelha (Pit62), na concentração de 6µL.200µL-1, a inibição
foi de quase 100%. Em relação às células controle de fibroblastos (linhagem de
células 3T3), em ambos os extratos houve morte celular, porém observou-se
uma inibição de proliferação celular inferior a proliferação observada nas
células de MCF-7 tratadas com os extratos.
Dos nove extratos de frutas avaliadas, apenas duas apresentaram
atividade antiproliferativa frente a células tumorais, pitanga-vermelha (Pit62) e
araçá-roxo (AR94). Os outros sete extratos, araçá-amarelo (AR75), cereja-domato (CER), guabiroba (GUA/01), jabuticaba (JAB), pitanga-laranja (Pit15),
pitanga-roxa (PitH) e uvaia (UVI) não apresentaram efeito inibitório da
proliferação celular. Esses dados sugerem que os extratos de araçá-roxo
(AR94) e de pitanga-vermelha (Pit62) possuem na sua composição química,
algum composto e/ou de um subgrupo de compostos que possuam ação
% Proliferação celular
antiproliferativa frente às células tumorais de MCF-7.
-10
-20
-30
-40
-50
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
log10[Araçá-Roxo - AR94]
Figura 11. Atividade citotóxica do extrato de araçá-roxo AR94 sobre a linhagem de células 3T3.
67
% Proliferaão celular
-10
-20
-30
-40
-50
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
log10[Araçá-Roxo - AR94]
Figura 12. Atividade citotóxica do extrato de araçá-roxo AR94 sobre a linhagem de células
MCF-7.
% Proliferação celular
0
-10
-20
-30
-40
0.00
0.25
0.50
0.75
1.00
log10[Pitanga-Vermelha Pit62]
Figura 13. Atividade citotóxica do extrato de pitanga-vermelha Pit62 sobre a linhagem de
células 3T3.
68
% Proliferação celular
100
50
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
-50
-100
log10[Pitanga-Vermelha Pit62]
Figura 14. Atividade citotóxica do extrato de pitanga-vermelha Pit62 sobre a linhagem de
células MCF-7.
Vários autores relacionam o teor de compostos fenólicos com a atividade
antiproliferativa (García-Alonso, Ros e Periago, 2006; Kaur e Singh, 2008;
Saleem et al., 2002; Singh e Kaur, 2008). Porém nesse estudo, verificou-se
que, dentre as frutas avaliadas, o acesso (GUA/01) que apresentou o maior
teor
de
compostos
fenólicos
totais
(1.062,03mg.100g-1)
e
individuais
(888,41mg.100g-1), não apresentou atividade antiproliferativa frente as células
tumorais MCF-7.
A alta capacidade antioxidante não demonstra estar lineamente
relacionada à atividade antiproliferativa (Sun et al., 2002). Essa afirmação
coincide, com o estudo realizado, que indicou que as frutas com maior
atividade
antioxidante,
apresentaram
atividade
guabiroba
(GUA/01)
antiproliferativa
frente
e
a
jabuticaba
(JAB)
não
células
tumorais
de
adenocarcinoma de mama (MCF-7). Dentre as nove frutas avaliadas, a
pitanga-vermelha (Pit62) foi o acesso que apresentou atividade antioxidante
inferior (3,88mM Trolox), um teor de compostos fenólicos totais inferior aos de
acesso de araçá-roxo (AR94), jabuticaba (JAB), guabiroba (GUA) e pitangaroxa (PitH), além de não ser o acesso com os teores mais elevados, dentre as
48 frutas estudadas, de antocianinas totais, carotenóides totais e ácido Lascórbico (Tabelas 1, 2, 3 e 4, Capítulo I); porém, apresentou atividade
antiproliferativa frente a linhagem de células MCF-7, com taxa de inibição de
quase 100% (Figura 14). Em relação à determinação de compostos fenólicos
69
individuais, a pitanga-vermelha (Pit62) apresentou o maior conteúdo de ácido
gálico em relação aos outros dois acessos de pitangas avaliados. No entanto,
além da pitanga-vermelha (Pit62), os acessos de araçá-amarelo (AR75),
guabiroba (GUA/01), jabuticaba (JAB) e uvaia (UVI), apresentam o ácido gálico
como o composto fenólico individual majoriário; porém, não apresentaram
atividade antiproliferativa frente a células tumorais de MCF-7.
Esses dados sugerem que nenhum dos compostos específicos
avaliados neste estudo presente na composição química dos frutos de pitangavermelha (Pit62) possui essa ação antiproliferativa frente às células tumorais
de adenocarcinoma de mama. Sun et al. (2002), ao avaliarem a atividade
antiproliferativa em frutas, tais como, maçã, morango, abacaxi, banana,
pêssego, laranja e pêra, sugerem que seja algum composto fenólico específico
ou um subgrupo de compostos fenólicos, o(s) responsável por essa atividade.
70
CONCLUSÕES
Considerando-se os dados obtidos neste estudo, pode-se concluir que:
1. Os principais compostos fenólicos identificados nas frutas nativas da
Região Sul da América do Sul são o ácido gálico e a catequina,
sendo a guabiroba, a fruta que apresentou os maiores teores desses
compostos;
2. As frutas de pitanga-vermelha (Pit62) e de araçá-roxo (AR94)
apresentaram efeito antiproliferativo e citotóxico nas linhagens
tumorais humanas de MCF-7;
3. Não se observou uma relação direta entre o conteúdo dos
compostos fenólicos individuais com a atividade antioxidante e a
atividade antiproliferativa frente a linhagem de células tumorais de
MCF-7.
71
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