DADE BEHRING
DIAGNOSTICA SÃO PAULO
REAGENTE PARA A DOSAGEM DO FÓSFORO - Código No. DF61
USO DO PRODUTO - O método PHOS empregado no sistema de química clínica Dimension é uma análise de
diagnóstico in vitro, que tem por objetivo a determinação quantitativa de fósforo no soro, plasma e urina.
RESUMO E PRINCÍPIO DO ENSAIO - O método de fósforo (PHOS) é uma modificação do método clássico
de fosfomolibdato introduzido por Fiske e Subbarow1 e emprega uma mistura de sulfato e bisulfito de pmetiloaminofenol para reduzir o fosfomolibdato, como foi descrito por Gomori2 e Drewers3. O método de PHOS
mede a absorbância do complexo reduzido de fosfomolibdato a comprimentos de onda UV para melhorar a
sensibilidade4,5. A interferência causada pela precipitação de proteína é eliminada utilizando um agente de
solubilidade, o dodecil sulfato de lítio. Devido ao branqueamento prévio da amostra, a interferência por
bilirrubina será consideradamente reduzida.
PRINCÍPIO DE ENSAIO - O fosfato inorgânico se combina com o molibdato (MoO4) em uma solução ácida
para formar um complexo que é reduzido pelo sulfato e bissulfito de p-metilaminofenol (PMAPS). A
absorbância a 340 nm da solução de fosfomolibdato reduzida é proporcional à concentração de fósforo
inorgânico e é medida empregando uma técnica bicromática de ponto final (340-383 nm).
NaMoO4 + PO4-3 → Fosfomolibdato
Fosfomolibdato + PMAPS + NaHSO3 → Complexo de Fosfomolibdato reduzido
(absorve a 340 nm)
REAGENTES FORNECIDOS
Compartimento a Forma
Ingrediente
Concentração b
1- 6
Líquido
PMAPS
14,3 mmol/l
Bissulfito de Sódio
187,9 mmol/l
7
Líquido
Dodecil sulfato de lítio
71,6 mmol/l
8
Líquido
Molibdato sódicoH2SO4 28,6 mmol/l
a. Os compartimentos estão enumerados consecutivamente a partir da extremidade longa do cartucho.
b. Valor normal por análise por fabricação.
c. Ver precauções.
MATERIAIS REQUERIDOS, MAS NÃO FORNECIDOS.
Materiais
Papel para impressora
Copos para amostras (1,5 ml)
Água purificada ou equivalente (diluente) f
Cartucho de cubetas
Catálogo número
D827
DSC4
710615901
D828
f - referência no manual de seu Dimension.
Todos os materiais acima são fornecidos pela Dade Behring
CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO
CONSERVAÇÃO - Guardar em ambiente refrigerado de 2 - 8 ºC.
PRAZO DE VALIDADE - Verificar o prazo de validade na caixa de cada cartucho de reativo fechado. Os
compartimentos fechados e não hidratados de cartuchos dentro do equipamento são estáveis por 30 dias. Uma
vez que os poços 1-6 forem perfurados pelo instrumento, são estáveis por 72 horas. Os poços de 7 a 8 são
estáveis por 30 dias, mesmo que tenham sido perfurados pelo instrumento.
CUIDADOS E PRECAUÇÕES
1. Este kit é somente para uso diagnóstico in vitro.
2. Compartimento 8: IRRITANTE. Contém Ácido sulfúrico. Irrita os olhos e pele. Em caso de contato com os
olhos, lave-os imediato e abundantemente com água e procure um médico.
3. As cubetas usadas contém fluídos orgânicos humanos. Manipular com cuidado apropriado para evitar o
contato com a pele ou a ingestão.
COLETA E PREPARAÇÃO DAS AMOSTRAS
COLETA E AMOSTRA - Para as amostras a serem analisadas por este método, deve-se empregar os métodos
e procedimentos normais de coleta e armazenamento, para conservação do soro e plasma.6 O soro ou plasma
deve ser separado dos glóbulos vermelhos imediatamente7. A coleta de urina de 24 hs deverá ser efetuada em
recipiente contendo 10 ml de HCl 12 M8. As amostras de urina devem ser diluídas tomando 1 parte de urina e 9
partes de água. Introduzir o fator de diluição 10 quando se programa o ensaio.
DILUIÇÃO E MISTURA - A diluição e mistura de reagente e amostra são efetuados automaticamente pelo
sistema Dimension®. O copo da amostra deve ter capacidade de volume suficiente para conter a mostra e o
“volume morto”; não é necessário o volume exato do copo. O volume morto é de 30µl para um copo de
capacidade de 1.5ml.
SUBSTÂNCIA DE INTERFERÊNCIA CONHECIDA - As substâncias seguintes não têm efeitos
significativos (0,1 mg/dl [0,03 mmol/l])d no método de PHOS nas concentrações indicadas:
Acetaminofeno
Ampicilina
Diazepan
Digoxina
EDTA
Etanol
Gentamicina
Heparina lítica
Nortriptilina
Fenobarbital
Fenitoína
Oxalato Potássico
Ácido Salicílico
Fluoreto de Sódio
Teofilina
200 µg/ml
20 µg/ml
20 µg/dl
20 ng/ml
200 mg/dl
800 mg/dl
16 µg/ml
280 U/ml
1000 ng/ml
80 µg/ml
30 µg/ml
500 mg/dl
100 mg/dl
400 mg/dl
100 µg/ml
[ 1.3 mmol/l]d
[ 57 µmol/l]
[70 µmol/l]
[25.6 nmol/l]
[2 g/l]e
[ 174 mmol/l]
[ 29.4 µmol/l]
[ 280000 U/l]e
[3797 nmol/l]
[344 µmol/l]
[119 µmol/l]
[ 5 g/l]
[7.24 mmol/l]
[4 g/l]e
[555 µmol/l]
A lipemia, triglicérides de 600 mg/dl [6,86 mmol/l] e a bilirrubina a uma concentração de 20 mg/dl [342 µmol/l]
aumentam os resultados de PHOS em 0,2 mg/dl [0,06 mmol/l] e 0,8 mg/dl [0,26 mmol/l] respectivamente, a uma
concentração de fósforo de 6,9 mg/dl [2,23 mmol/l]. A hemoglobina, 500 mg/dl [0.31 mmol/l (monômero)]
abaixa os resultados de PHOS em 1,25 mg/dl [0,39 mmol/l] a uma concentração de fósforo de 6,5 mg/dl [2,10
mmol/l]. Os eritrócitos contendo éteres de fosfato orgânico suscetíveis à hidrólise causam resultados falsamente
elevados. Aconselha-se, portanto, não utilizar amostras hemolizadas. Os tubos de coleta de sangue Corvac® e
SST® não afetam os resultados de PHOSG (Fósforo). O fosfato de creatina e o piruvato de fosfenol liberam
fósforo abaixo das condições da reação deste método e pode, portanto, aumentar os resultados. As
concentrações de Manitol de 500 mg/dl [27,4 mmol/l] ou maiores, produzem uma diminuição de 10% ou mais.
Cada laboratório deve estabelecer as normas de aceitação de seus tubos de coleta de amostra de sangue, como
também os produtos para separação de soro. Nestes produtos podem apresentar variações entre produtos de
diferentes fabricantes e às vezes de lote para lote.
•Corvac® é uma marca registrada de Monoject, Division of Sherwood Medical, St. Louis, MO.
•SST® é uma marca registrada da Becton - Dickinson, Rutherford, NJ.
d. As unidades do Sistema internacional de unidades, estão entre colchetes.
e. Concentrações normalmente presentes nos tubos de coleta de sangue.
PROCEDIMENTOS
PROCESSO DE ANÁLISE - O sistema de química clínica Dimension processa a amostra automaticamente
através das etapas necessárias e imprime os resultados. Para maiores detalhes, consultar o Manual do sistema
DIMENSION.
CONDIÇÕES DE TESTE
• Volume da amostra
• Volume de Reativo 1
• Volume de Reativo 2
• Volume de Reativo 3
• Volume de diluente
• Temperatura do ensaio
• Comprimento de onda
• Tipo de medição
3 µl
50 µl
20 µl
20 µl
350 µl
37 ºC
340 e 383 nm
ponto final, bicromático
CALIBRAÇÃO - O procedimento geral para a calibração está descrito no manual do sistema DIMENSION. As
seguintes informações devem ser consideradas quando da calibração do método fósforo:
Limite de ensaio:
Material de referência:
0 - 9,0 mg/dl [ 0 - 3.00 mmol/l]
padrões primarios ou calibradores secundários g, como o calibrador de
química II DuPont (cat. nº DC20)
calibração 2.0, 5.0, 8.0 mg/dl [0.68,1.65, 2.62 mmol/l]
Níveis
de
recomendados:
Esquema de calibração:
Freqüência de calibração:
Coeficientes designados:
Em 3 níveis em triplicata.
A cada novo lote de reagente ou a cada 3 meses para um mesmo lote.
Co - 1.100
C1
0.077
RESULTADOS - O instrumento calcula e imprime automaticamente a concentração de fósforo em mg/dl
[mmol/l], utilizando o esquema de cálculo ilustrado no manual de seu sistema Dimension.
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO - Os resultados superiores a 9.0 mg/dl [2.9 mmol/l] devem ser
repetidos após se diluir a mostra com Água Purificada ou equivalente (ver Manual do sistema DIMENSION®)
para se obter uma concentração dentro dos limites de linearidade. O resultado deve ser multiplicado pelo fator
de diluição para se obter a concentração da amostra não diluída. O sistema de informações do instrumento
contém mensagens de erro que advertem o operador sobre falhas específicas de funcionamento. Qualquer
informe que contenha estas mensagens de erro deve ser guardado para comprovação. Referir ao Manual do
sistema DIMENSION.
CONTROLE DE QUALIDADE - Pelo menos uma vez ao dia, analisar uma solução em dois níveis de um
controle com concentrações conhecidas. Os resultados obtidos devem estar dentro dos limites definidos de
variabilidade diária do sistema, medida no laboratório do usuário. Se os resultados não estiverem dentro dos
limites aceitáveis do laboratório, seguir os procedimentos descritos no manual de seu sistema Dimension. Existe
a possibilidade de um funcionamento incorreto do instrumento, se for observada a precisão seguinte em 5 testes
consecutivos:
Concentração
2.0 mg/dl [0.65 mmol/l]
8.0 mg/dl [2.58 mmol/l]
D. P. (desvio padrão)
>0.15 mg/dl [ 0.05 mmol/l]
> 0.40 mg/dl [0.13 mmol/l]
VALORES DE REFERÊNCIA
Soro: 2,5 - 4,9 mg/dl [0.81 - 1.58 mmol/l]7
Urina: 0,4 - 1,3 g/24 hr [12-42 mmol/24 hr]8.
A população de referência consistiu no seguinte:
136 homens com idade entre 17 e 60 anos e 130 mulheres com idade entre 17 e 60 anos. O intervalo de
referência foi calculada não parametricamente e representa 95% central da população. Cada laboratório deve
estabelecer seu próprio intervalo de referência para as análises de fósforo processados no sistema Dimension.
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHOg
a) Reprodutibilidade: h
Desvio Padrão (% CV)
Material
Média mg/dl [mmol/l]
Soro controle QCS™
Normal
3.6 [1.16]
Anormal
8.5 [2.74]
Controle de Química
Fisher para urina
Nível 1
61.5 [19.8]
Nível 2
70.3 [22,7]
Mistura de urina
43.9 [14.2]
QCS™ é uma marca Gilford, Irvine, CA 92714.
Correlação
Estatísticas de Regressãoi
Método comparativo
Inclinação
Mét. de fósforo no
analisador ACA DuPont
Soro
1.00
Urina
1.001
Dentro do mesmo dia
Dia-a-dia
0.05 [0.02] (1.4)
0.08 [0.03] (0.9)
0.13 [0.04] (3.6)
0.17 [0.05] (2.0)
1.1 [0.3] (1.8)
1.3 [0.4] (1.8)
0.6 [0.2] (1.4)
7.3 [2.3] (11.9)
7.3 [2.3] (10.4)
3.6 [1.2] (8.2)
Intercessão
Coeficiente de correlação
n
0.0
-0.05 [-0.02]
0,976
0.992
112
122
i) Todos os ensaios para definir as características específicas de funcionamento, foram processados depois que
se efetuaram as comprovações normais e recomendadas de controle de qualidade do equipamento.
j) As amostras foram analisadas durante 20 dias em duplicata para cada nível, o desvio padrão dentro do
mesmo dia e dia-a-dia foram calculados pelo método da analise da variância.
k) O modelo da equação da reta de estatística de regressão é: [resultado do sistema Dimension®] = inclinação
X [resultado do método comparativo] + intercessão.
ESPECÍFILIDADE ANALÍTICA - Para maiores detalhes ver a seção de substâncias de interferência
conhecida descrita anteriormente.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Fiske, CH, Subbarow, U, The colorimetric determination of phosphosrus, J Biol Chem 1925; 66:375.
2. Gomori, G. A modification of the colorimetric phosphosrus determination for use with the photoeletric
colorimeter, J Lab Clin Med 1941; 27:955.
3. Drewes, P, Direct colorimetric determination of phosphorus in serum and urine. Clin. Chem. Acta
1972;39:81.
4. Goodwin, JF, Quantification of serum inorganic phosphorus, phosphatase, and urinary phosphatase without
preliminary treatment. clin. chem. 1970: 16:776.
5. Daly, JA, Ertingshausen, G, Direct Method for Determining Inorganic Phosphate in Serum with the
“Centrifichem, Clin Chem 1972: 18:263-265.
6. Tietz, NW, Textbook of Clinical Chemistry, W.B. Saundres Co., Philadelphia, PA 1986, pp 52-53
(techniques and procedures to minimize laboratory infections) and pp 478-497 (specimen collection and
storage recommendations).
7. Most S. Pollard, G, Van Wormer, D, Steige, H, Lembke, L, and jones. JD, An Evaluation of a Phosphorus
Method for the DuPont aca®, DuPont company, Wilmington, DE, September, 1976.
8. Pesce, AJ, Kaplan, LA, Methods in Clinical Chemistry, C.V. Mosby company, St. Louis, MO, 1987, p 1041.
Diagnóstica São Paulo – Produtos e Equipamentos para Laboratórios Ltda
Av. Indianópolis, 3231 1º andar – Tele Fax: 5581.0157.
Site: diagnosticasp.com.br – E:mail: [email protected]