MEDIDA DO
CRESCIMENTO
MÉTODOS PARA QUANTIFICAR
OS MICRORGANISMOS
Etapa fundamental: diluição (para fungos filamentosos se
aplica a esporos)
Fator de diluição = volume da amostra/volume total
1 mL em 9 mL ==> diluição 1:10 ou 1/10 ou 10-1
Diluição seriada: consiste em diluir sucessivamente a
diluição inicial.
Esquema:
1) Contagem do nº total de células (vivas e mortas)
- câmara de contagem (matar ou impedir movimento)
- coulter-counter (alteração de resistência)
- contagem em esfregaços corados (0,01 mL)
- turbidimetria (comparação visual com solução de sulfato
de bário – escala de Mc Farland
2) Contagem do número de microrganismos vivos
Baseado no conceito de que a viabilidade é o poder de
formar colônias macroscópicas em meio de cultura sólido ou
de tornar turvo um meio de cultura líquido ==> item
fundamental: meio de cultura.
- contagem do nº de colônias na superfície do meio (entre
30 e 300 colônias)
- contagem do nº de colônias “pour plate” (entre 30 e 300
colônias)
- contagem do nº de colônias após inoculação com gotas
(até 15 colônias) (esquema)
- contagem do número de colônias após filtração
- método do Número Mais Provável (N.M.P) (turvação
meio líquido) (tabela)
- método do Número Mais Provável Alternativo
(N.M.P.A.) (colônias visíveis em meio sólido) (tabelas)
3) Medida da biomassa (vivos e mortos)
- determinação da massa celular
secagem do filtro contendo células
secagem da suspensão de células
multiplicar pela diluição, se houver.
-turbidimetria com espectrofotômetro
Obtenção de curva padrão de células (massa seca)
- Dosagem de componentes celulares (nitrogênio e
proteínas, ergosterol, glicosamina)
- Dosagem de compostos resultantes da atividade
metabólica (CO2, O2, ácidos, etc.)
-Medida de volume de material celular após centrifugação.
EXERCÍCIOS
1) Uma amostra de uma suspensão de esporos diluída (1:4) foi
colocada em câmara de Neubauer de 400 quadrados (1/400 mm2 e
0,1 mm), e procedeu-se à contagem de cinco campos de 16
quadrados. Os resultados encontrados foram:
Primeira contagem
Campo
A
B
C
D
E
No de esporos
78
73
83
71
71
Segunda contagem
Campo
A
B
C
D
E
No de esporos
92
82
60
69
63
Qual a diluição que deve ser feita para que esta suspensão
apresente 2x107 esporos/mL?
2) Uma cultura de levedura foi diluída sequencialmente,
conforme o esquema a seguir:
1,0 mL
1,0 mL
1,0 mL  9,0 mL
 9,0 mL 
9,0 mL
amostra sol. salina
sol. salina
sol. salina
PL1
PL2
PL3
100 µL de cada diluição foram inoculados em placa de
Petri (PL) contendo ágar para contagem de células viáveis
pela técnica de pour plate. Após incubação obtiveram-se as
seguintes contagens de colônias:
PL1 – 252 UFC
PL2 – 32 UFC PL3 – 13 UFC.
Calcule a concentração de células viáveis (por mL) da
amostra.
3) Foram feitas duas diluições de uma amostra de suspensão de bactérias: 1:10 e
1:50. As diluições foram submetidas a leitura da absorbância, obtendo-se os
valores 0,206 e 0,705. Os dados usados para obter a curva padrão de massa
seca e a respectiva equação da reta estão apresentados abaixo. Calcule o
volume da suspensão necessário para inocular 1,2 L de meio de forma que sua
concentração celular seja igual a 1,0 g/L.
Diluição
Abs
1:10
0,286
1:9
0,316
1:8
0,345
1:7
0,400
1:6
0,460
1:5
0,550
1:4
0,688
1:3
0,891
1:2
1,275
Equação da reta:
Y= 0,0266 + 2,1135.X