A Genética Molecular
em Análises Clínicas
2001/2002
Prof.Doutor José Cabeda
Genética
Rearranjo somático:
a estrutura germline do TCR
Rearranjo somático:
a estrutura germline das Ig
Equação de recombinação
V
GTCCTCC.CACAGTG-12-ACAAAAACC
+
GGTTTTTGT-23-CACTGTG.CTCAG
J
GTCCTCCGGTCAG
V
J
JUNÇÃO CODIFICANTE
+
JUNÇÃO SINAL
GGTTTTTGT-23-CACTGTG|CACAGTG-12-ACAAAAACC
A origem dos nucleótidos P
GT
CA
GT
CA
CATG
GTAC
CATG
Nucleótidos "P"
MHC e
suas
moléculas
(HLA)
Estrutura das moléculas de HLA
As diferenças entre as moléculas
de HLA-I e HLA-II
O locus
MHC
O COMPLEMENTO
Aspectos genéticos
2001/2002
Prof.Doutor José Cabeda
Genética
Os
Genes do Complemento
3)reguladores do complemento
36 genes: 1) componentes e subunidades do complemento; 2)receptores do complemento;
C1q:a
C1q:b
C1q:g
C8:a
C8:b
C4-bind.Prot.a
C4-bind.Prot.b
Compl.Recept. 1
Compl.Recept.2
Decai accel.F.
memb.cofact.P
Factor H
Factor I
C6
C7
C9
C2
Factor B
C4A
C4B
C1QA
C1QB
C1QG
C8A
C8B
C4BPA
C4BPB
CRI
CR2
DAF
MCP
HF
IF
C6
C7
C9
C2
BF
C4A
C4B
1p34.1-p36.3
1p34.1-p36.3
1p34.1-p36.3
1p32
1p32
1q32
1q32
1q32
1q32
1q32
1q32
1q32
4q25
5p13
5p13
5p13
6p21.3
6p21.3
6p21.3
6p21.3
C8:g
C5
}
RCA
}
MAC
}
MHC-III
C8G
9q22.3-q32
C5
9q33
manose bind lect.
MBL
10q11.2-q21
perforina
PRF1
10q22
prot.suract.A1 e A2
SFTA1,2
10q22-q23
prot.surfactante D
SFTPD
10q22-q23
MIRL
CD59
11p13
inibidor C1 CINH
11q11-q13.1
C1r
CIR
12p13
C1s
CIS
12p13
CR3A
ITGAM
16p11.2
Vitronectina VTN
17q11
C3
C3
19p13.3-p13.2
C5a receptor 1
C5RI
19q13.3-q13.4
LCAMB
ITGB2
21q22.3
Properdina
PFC
Xp11.4-p11.2
RCA= regulator of complement activation
MAC=Membrane attack complex
MHC=Major histocompatibility complex
A CASCATA DO COMPLEMENTO
C4
O Locus genético do C4
telómero
centrómero
MHC-II
C2 BF
MHC-III
RD SKI2W DQR3ZRP1C4A
Genes com função
ligada à transcrição
1ª duplicação
MHC-I
21AXARP2C4B
1º módulo RCCX
21BTNXB
2º módulo RCCX
2ª duplicação
G11=RP1/RP221A/21B = Citocromo P450 21 hidroxilase
O esquema não se encontra à escala
Os genes9Kbdo21KbC4
C2 BF
RD SKI2W DQR3ZRP1C4A



21AXARP2C4B
3 Kb
}
}

 10 Kb
21Kb
2Kb
ou 16Kb
21BTNXB
3 Kb
41 exons
~ 21Kb (varia com o tamanho do intron 9)
1744 a.a. na proteína precursora
20 locais polimórficos


Os Isotipos do C4: C4A e C4B
Elevada homologia genética (99%)
 no essencial diferem apenas em 4 aa entre os aa 11011106
 no global diferem em apenas 14 nt
Claras diferenças :
 funcionais:
 Actividade hemolitica: C4B 3-4vezes maior que a
do C4A
 reactividade química
 C4A reage mais rapidamente com grupo amino
 C4B reage mais rapidamente com grupo hidroxilo
 antigenicidade
Alotipos do C4
alguns alotipos podem
estar associados a risco
autoimune
•20 locais polimórficos
•>10 alotipos por isotipo
Definição C4A/C4B
C4 exon 25
P C
L D
ACCCCTGTCCAGTGTTAGACAGG
26
Ch-5
ACCTCTCTCCAGTGATACATAGG
L S
I H
1101 1102
1105 1106
Ch+4
Residuo a.a.
1054
1101/2 1105/6
27
28
(Rg3)
Rg1
N
S
V L
A R
WH=Rg1+ Ch6
Ch1
}
Chido:

(Ch-4)
Rodgers: (Ch-5)
D
G
RG2
Ch3
1157 1188 1191
C4A
C4B

Alterações patológicas dos genes
Existem
várias alterações genéticas no C4:
C4
Delecções e duplicações segmentadas


Conversões génicas e alterações pontuais (ex: C4B 1106HisAsp=
actividade de C4A)

A definição de mutação é ambígua já que:
 a frequência de alelos nulos é alta na população (30% com 1 a
3 C4Q0)
 10% tem C4AQ0; 16% tem C4BQ0O; C4AQ0+C4BQ0 é
muito raro
 os alelos nulos são mais frequentes em algumas situações
patológicas:
 Esclerose sistémica (Japão-Takeuchi et al., 1998)
 Diabete mellitus (deficiência homozigótica de C4A)
 doenças reumatológicas (Homozigotos)
 Elevada propensão para a infecção (ex: meningite por