REGINA APARECIDA DE PAULA
OBTENÇÃO E AVALIAÇÃO DE ANTlCORPOS INDUZIDOS POR VENENO CROTÁLICO
OU CROTOXINA IRRADIADOS EM FONTE DE 60Co
Orientador: Dr. José Roberto Rogero
RESUMO
Acidentes com ofídios representam um grave problema de Saúde Pública em nosso
país. Os acidentes com serpentes do gênero Crotalus são os mais severos. Por volta de
11 % das vítimas morrem quando não recebem tratamento soroterápico. Os anti-soros são
obtidos a partir do plasma de cavalos hiperimunizados com veneno bruto. O rebanho
eqüino é pequeno, de manutenção dispendiosa, e durante a imunização, estes animais
apresentam sinais de envenenamento que pode resultar em óbito. Estes fatos somados
fazem com que a produção de anti-soros seja restrita. Várias técnicas que possibilitem
reduzir a toxicidade dos venenos e toxinas e aumentar a soro produção têm sido
desenvolvidas, utilizando agentes químicos e físicos. A radiação gama têm se mostrado
excelente ferramenta, capaz de destoxicar venenos e toxinas em solução aquosa, sem o
acréscimo de substâncias que possam atuar como imunógenos. As alterações mediadas
pela irradiação resultam em diminuição dos efeitos tóxicos, sem a perda da
imunogenicidade. Desta forma, é importante avaliar os anti-soros induzidos por toxinas
irradiadas, verificar sua especificidade, seu potencial neutralizante e a utilização destes
anti-soros em imunoensaios. O veneno de Crotalus durissus temficus e sua toxina mais
potente, a crotoxina, foram irradiados com uma dose de 2.000Gy em fonte
60
Co, em
solução aquosa e inoculados em coelhos, seguindo o método clássico de imunização. Os
níveis séricos de anticorpos foram avaliados por imunodifusão radial dupla, ELlSA e
IRMA. A especificidade por imunoeletroforese, ELlSA e Westem blotting. O potencial
neutralizante foi avaliado pela soroneutralização da atividade da fosfolipase A2 da
crotoxina in vitro. Os anticorpos foram testados como reagentes em imunoensaios por
ELlSA e IRMA para detecção de antígenos em soro de camundongos inoculados
experimentalmente com o veneno crotálico ou crotoxina. Os resultados mostraram que o
veneno total e a crotoxina irradiados além de serem bons imunógenos, induziram a
formação anticorpos capazes de reconhecer veneno ou toxina nativas. Estes soros se
mostraram mais específicos e apresentaram alto potencial neutralizante quando
comparado com anti-soro comercial. Com estes resultados concluiu-se que anticorpos,
induzidos por veneno crotálico ou crotoxina irradiados, são reagentes altamente
específicos, portanto poderiam ser utilizados em ensaios para diferenciar os acidentes
crotálicos e botrópicos.