3M Petrifilm
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Placa para Listeria em Monitoramento Ambiental
Guia de
Interpretação
3M Petrifilm
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Placa para Listeria em Monitoramento Ambiental
Este guia familiariza você com os resultados das placas 3M™ Petrifilm™ para Listeria em Monitoramento
Ambiental. Para mais informações, entre em contato com o representante oficial da 3M Microbiologia mais
perto de você.
A Placa 3M™ Petrifilm™ para Listeria em Monitoramento Ambiental (EL) é um sistema de meio de cultura pronto para uso, que
contém agentes seletivos, nutrientes, um agente geleificante solúvel em água fria, e um indicador cromogênico que facilita a
detecção das colônias de Listeria. As Placas Petrifilm EL foram designadas para analisar amostras ambientais e ajudar a
aumentar a eficiência do monitoramento da sanitização da planta. A presença do indicador Listeria, como Listeria innocua
evidencia que as condições ambientais estão propícias para a ocorrência de Listeria monocytogenes. A Placa Petrifilm EL
detecta a maioria das espécies de Listeria ambiental, como Listeria monocytogenes, Listeria innocua e Listeria welshimeri*.
Muitos organismos no ambiente podem estar estressados devido às condições ambientais ou sanitizantes. Água
peptonada tamponada (APT) é utilizada como um caldo de recuperação em conjunto com a Placa Petrifilm EL para recuperar
a Listeria estressada sem aumentar o número de células. A recuperação na APT não é uma etapa de enriquecimento.
1
1. Esta Placa Petrifilm EL NÃO tem colônias após 28h de incubação.
O teste está completo.
Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta
placa: <1. Por favor, consulte a seção “Amostragem Quantitativa”
deste guia para calcular a quantidade de Listeria por amostra
ambiental.
Interpretação Semiquantitativa: O nível de Listeria deve ser
registrado como categorias que sejam significativas para seu
local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo,
médio, alto, ou aceitável e inaceitável).
Interpretação Qualitativa: Listeria não detectada.
2
2. Esta Placa Petrifilm EL tem SOMENTE colônias vermelho-violeta
intenso após 28h de incubação. O teste está completo.
Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta
placa: 11. Por favor, consulte a seção “Amostragem Quantitativa”
deste guia para calcular a quantidade de Listeria por amostra
ambiental.
Interpretação Semiquantitativa: O nível de Listeria deve ser
registrado como categorias que sejam significativas para seu
local de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo,
médio, alto, ou aceitável e inaceitável).
Interpretação Qualitativa: Listeria detectada.
*Para mais informações sobre a prevalência das espécies de Listeria, por favor, entre em contato com o representante oficial da 3M Microbiologia mais perto de você. L. ivanovii, L. grayi/murray e L. seeligeri crescem,
mas não formam colônias típicas.
Vários fatores influenciam a velocidade na qual o indicador cromogênico muda para o vermelho-violeta intenso,
incluindo a cepa e a natureza e grau de estresse na qual o organismo foi exposto.
3a.
3a. Antes do total de 30 horas de incubação, se alguma colônia estiver
presente, mas não estiver vermelho-violeta intenso (por exemplo,
cinza ou rosa claro, como mostrado na figura 3a), então continue
incubando até as 30 horas. No tempo máximo de incubação de
30 horas, as colônias que não apresentarem coloração
vermelho-violeta intenso (colônias que permanecem cinza ou rosa
claro, como mostrado na figura 3a), não devem ser interpretadas
como Listeria.
Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta placa: <1.
Por favor, consulte a seção “Amostragem Quantitativa” deste guia
para calcular a quantidade de Listeria por amostra ambiental.
Interpretação Semiquantitativa: O nível de Listeria deve ser
registrado como categorias que sejam significativas para seu local de
amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto,
ou aceitável e inaceitável).
Interpretação Qualitativa: Listeria não detectada.
3b.
3b. No tempo máximo de incubação de 30 horas, colônias que
estavam cinza ou rosa claro e mudaram para vermelho-violeta
intenso durante a incubação (como mostrado na figura 3b) devem
ser interpretadas como Listeria.
Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta placa: 3.
Por favor, consulte a seção “Amostragem Quantitativa” deste guia
para calcular a quantidade de Listeria por amostra ambiental.
Interpretação Semiquantitativa: O nível de Listeria deve ser
registrado como categorias que sejam significativas para seu local de
amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto,
ou aceitável e inaceitável).
Interpretação Qualitativa: Listeria detectada.
Nota: Não considere ou conte as colônias na barreira de espuma, uma vez que elas estão fora da influência seletiva do meio.
4
4. Uma vez que a Placa Petrifilm EL pode ser interpretada de três
formas, não é sugerida nenhuma faixa de contagem. Quando houver
muitas colônias, interprete o resultado (qualitativo ou
semiquantitativo) ou estime a contagem (quantitativo), como descrito:
Interpretação Quantitativa: Colônias estimadas de Listeria nesta
placa: 600 est.. Quando grandes números de Listeria estão presentes,
faça a estimativa determinando a contagem por quadrado de dois ou
mais quadrados representativos. Determine a média por quadrado e
então multiplique por 42. A área inoculada da placa é aproximadamente
42 cm2.
Interpretação Semiquantitativa: O nível de Listeria deve ser registrado
como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem
e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e
inaceitável).
Interpretação Qualitativa: Listeria detectada.
5
5. Quando as colônias estão presentes em grandes números, as placas
Petrifilm EL podem apresentar colônias muito pequenas,
indistintas e/ou uma cor homogênea salmão em toda a placa.
Interpretação Quantitativa: Listeria nesta placa é muito numerosa
para contar (Incontável, aproximadamente 104, mostrada nesta
figura).
Interpretação Semiquantitativa: O nível de Listeria deve ser
registrado como categorias que sejam significativas para seu local
de amostragem e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio,
alto, ou aceitável e inaceitável).
Interpretação Qualitativa: Listeria detectada.
6
6. A cor de fundo pode variar devido à presença de pó, terra, grão,
cascalho ou outro sedimento do ambiente amostrado ou, tipo de
dispositivo de coleta da amostra e/ou da marca de água peptonada
tamponada (caldo de recuperação). Interprete ou conte as colônias
vermelho-violeta intenso como Listeria.
Interpretação Quantitativa: Colônias de Listeria nesta placa: 11.
Por favor, consulte a seção “Amostragem Quantitativa” deste guia
para calcular a quantidade de Listeria por amostra ambiental.
Interpretação Semiquantitativa: O nível de Listeria deve ser registrado
como categorias que sejam significativas para seu local de amostragem
e seu padrão individual da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável e
inaceitável).
Interpretação Qualitativa: Listeria detectada.
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Instruções de Uso
Placa para Listeria em Monitoramento Ambiental
Consulte a bula que se encontra dentro da embalagem do produto para informações detalhadas sobre PRECAUÇÕES, LIMITAÇÕES
DA GARANTIA, LIMITAÇÕES DE RESPONSABILIDADE DA 3M, ARMAZENAMENTO E DESCARTE E INSTRUÇÕES DE USO.
Armazenamento
Petrifilm
Petrifilm
Petrifilm
1
Armazene os pacotes fechados a < 8oC.
Utilize-os antes de vencer o prazo de
validade impresso nos pacotes. Em áreas
de alta umidade recomenda-se deixar que
os pacotes atinjam a temperatura
ambiente antes de serem abertos.
2
Para fechar os pacotes abertos, dobre a
extremidade e vede com fita adesiva.
3
Para evitar exposição à umidade, não
refrigere os pacotes abertos. Armazene
os pacotes vedados em um local fresco e
seco por um período inferior a um mês.
Evite expor as placas a temperatura > 25oC
e/ou umidade relativa > 50%.
Preparo da Amostra
3
3
4
Colete as amostras ambientais usando
um swab 3M™ Quick Swab ou equivalente,
esponja ou outro dispositivo de coleta
pré-hidratado.
5
O agente de hidratação deve ser <10 ml de água estéril,
água peptonada tamponada (APT) ou, se houver presença
de sanitizantes, é recomendado tampão neutralizante,
como Caldo Letheen ou Caldo Neutralizante.
Assepticamente, adicione 2 ml (swab) ou
5 ml (esponja) de água peptonada
tamponada estéril (caldo de recuperação),
entre 20 e 30oC, à amostra coletada.
6
Não utilize caldos de enriquecimento
nesta placa.
Misture, homogeneíze, ou agite
vigorosamente a amostra coletada com a
APT por, aproximadamente, 1 minuto.
Deixe a amostra ficar em temperatura
ambiente, 20-30oC, por 1 hora até o
máximo de 1 hora e 30 minutos, então
misture vigorosamente de novo. Esta
etapa é necessária para a recuperação da
Listeria injuriada.
Inoculação
7
Coloque a Placa Petrifilm EL em uma
superfície plana. Levante o filme superior.
8
Com a 3MTM Pipeta Eletrônica ou uma
pipeta equivalente, posicionada
perpendicularmente à Placa Petrifilm EL,
coloque 3 ml da amostra no centro
do filme inferior.
9
Desça o filme superior sobre a amostra.
Interpretação
Incubação
<70¡F
10
11
Delicadamente, coloque o difusor plástico
no filme superior sobre o inóculo. Não
pressione, gire ou arraste o difusor. Retire
o difusor. Aguarde, ao menos, 10 minutos
para permitir a formação do gel. Nota: se
o inóculo espalhar sozinho, o difusor não
é necessário.
12
Incube as placas com o lado transparente
para cima, em pilhas de até 10 placas, por
28h ± 2h a 35ºC ± 1ºC ou 37ºC ± 1ºC.
Não ultrapasse 30 horas. A incubação,
além do tempo recomendado, pode
dar resultados ambíguos.
As Placas Petrifilm EL podem ser contadas
ou interpretadas usando um contador de
colônias comum ou qualquer outra fonte
de amplificação. Não conte as colônias na
espuma porque elas estão fora da
influência seletiva do meio.
O método da Placa 3MTM PetrifilmTM para Listeria em Monitoramento Ambiental
pode ser usado como um teste quantitativo, semiquantitativo ou qualitativo.
13
Para um teste quantitativo, conte e
registre todas as colônias vermelhovioleta intenso.
Você pode escolher um teste
quantitativo se deseja tomar
diferentes ações com base no
número presente.
Colônias de Listeria nesta placa: 16
Por favor, consulte a seção
“Amostragem Quantitativa” deste guia
para calcular a quantidade de Listeria
por amostra ambiental.
14
Para um teste semiquantitativo, registre os
resultados com base no nível relativo de
colônias vermelho-violeta intenso presentes.
Você pode escolher um teste semiquantitativo
se deseja tomar diferentes ações, dependendo
do nível relativo presente, e se não for
necessário o registro do número atual.
O nível de Listeria deve ser registrado como
categorias que sejam significativas para seu
local de amostragem e seu padrão individual
da planta (ex: baixo, médio, alto, ou aceitável
e inaceitável).
15
Para um teste qualitativo, registre o resultado
da placa como detectado ou não detectado,
com base na presença ou ausência de colônias
vermelho-violeta intenso.
Você pode escolher um teste qualitativo se uma
resposta sim/não for suficiente e apropriada
para o seu reporte.
Não detectada
Detectada
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Placa para Listeria em Monitoramento Ambiental
Amostragem Quantitativa & Interpretação
Se a sua empresa optar por usar a Placa 3MTM PetrifilmTM para Listeria em Monitoramento Ambiental de forma
quantitativa, por favor, consulte a bula do produto, e então calcule as Unidades Formadoras de Colônia (UFC) por área,
como mostrado abaixo. Você pode, também, querer considerar os seguintes pontos:
• Consistência é a chave para obter informações úteis do seu programa de monitoramento ambiental. Utilize um
procedimento consistente toda vez que amostrar. O ideal é utilizar o mesmo tipo de dispositivo e técnicas de
amostragem.
• O tamanho da área amostrada pode ser baseado na legislação, padrões internos, e/ou local do monitoramento.
Por exemplo, você pode precisar amostrar uma área maior para uma linha de produto final devido ao fato do número
esperado de bactéria ser baixo.
• Mais informações sobre amostragem ambiental podem ser encontradas nas referências listadas abaixo, e no folheto
Procedimentos de Monitoramento Ambiental para Placas 3MTM PetrifilmTM.
PARA DETERMINAR a quantidade de Listeria por área amostrada, você precisará registrar:
1) o tamanho da área amostrada
2) o volume do líquido de hidratação no dispositivo de amostragem
3) o volume da água peptonada tamponada adicionada
4) o volume plaqueado
5) o número de colônias contadas
APLIQUE a seguinte equação para determinar UFC/área amostrada. Exemplos são dados nas páginas seguintes.
Veja a Bula e as Instruções de Uso para detalhes completos do método.
Você pode também determinar o resultado por amostra, por exemplo, UFC/ralo.
UFC/área = (Número de colônias x [ml de líquido de hidratação + ml APT] ÷ 3 ml) ÷ área amostrada
OU
A. Número total de ml de APT + líquido de hidratação
B. Número de ml plaqueado
C. Divida a linha A pela linha B
D. Número de colônias contadas
3 ml
(se o número de colônias for zero, insira “<1” na linha “D”)
E. Multiplique a linha C pela linha D
F. Área amostrada
G. Divida a linha E pela linha F
A linha G é igual a UFC/área
A amostragem quantitativa ambiental é consistente com as seguintes referências:
• Standard Methods for the Examination of Dairy Products, Section 3.7D, American Public Health Association,
Washington D.C., 1992.
• Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods, section 3.512 and 3.521, American
Public Health Association, Washington D.C., 2001.
A
B
C
D
E
F
G
Interpretação Quantitativa
Abril/09 Bretas
Exemplo: Método de Contato por swab 3M™ Quick Swab
3
um swab 3M™ Quick
1 Usando
Swab (ou equivalente) pré-hidratado 2
com 1 ml de líquido de hidratação
(veja a linha A), amostre uma área.
Para este exemplo, a área é de 10
centímetros quadrados (10 cm2)
(veja a linha F). Coloque o 3M™
Quick Swab de volta no recipiente
estéril.
Adicione 2 ml de água peptonada
tamponada (veja a linha A).
3
Após a etapa de recuperação,
inocule 3 ml na Placa 3M™
Petrifilm™ para Listeria em
Monitoramento Ambiental
(veja a linha B).
A. Número total de ml de APT + meio de cultura
B. Número de ml plaqueado
C. Divida a linha A pela linha B
D. Número de colônias contadas
E. Multiplique a linha C pela linha D
F. Área amostrada
G. Divida a linha E pela linha F
4
Após a incubação, conte as
colônias. Para este exemplo,
assuma que você contou 50
colônias (veja a linha D).
1+2=3
3
1
50
50
10 cm2
5 UFC/cm 2
A
B
C
D
E
F
G
Exemplo: Método de Contato por Esponja
3
uma esponja
1 Usando
2
pré-hidratada com 10 ml de líquido
de hidratação, amostre uma área
(veja a linha A). Para este exemplo,
a área é de 50 centímetros quadrados
(50 cm2) (veja a linha F).
Coloque a esponja de volta no
recipiente estéril e adicione
5 ml de água peptonada
tamponada (veja a linha A).
3
Após a etapa de recuperação,
inocule 3 ml na Placa 3M™
Petrifilm™ para Listeria em
Monitoramento Ambiental
(veja a linha B).
A. Número total de ml de APT + líquido de hidratação
B. Número de ml plaqueado
C. Dividir a linha A pela linha B
D. Número de colônias contadas
E. Multiplicar a linha C pela linha D
F. Área amostrada
G. Dividir a linha E pela linha F
Microbiologia
3M do Brasil Ltda.
Via Anhanguera, km 110
13181-900 - Sumaré - SP
4
Após a incubação, conte as
colônias. Para este exemplo,
assuma que você contou 10
colônias (veja a linha D).
10 + 5 = 15
3
5
10
50
50 cm 2
1 UFC/cm 2
A
B
C
D
E
F
G