Nano e Macropartículas para
aplicações Biomédicas
Nanopartículas
Partículas das dimensões do nanómetro
1 nm
0,000000001 m
Macropartículas
Partículas das dimensões do micrómetro
1
0,000001 m
Cultura de células
Linhas celulares ---- São células transformadas
que se dividem rapidamente.
rapidamente.
Meio de Cultura ---- Meio que contem soro
soro,,
antimicóticos e antibióticos,
antibióticos, solução tampão
tampão..
Tripsina ---- Enzima que possibilita a
desagregação das células umas das outras e a
separação da base da placa.
placa.
DAPI
A molécula de DAPI (4
(4´,6 – diamidinodiamidino-2fenil--indol) é um marcador fluorescente
fenil
que se liga fortemente à molécula de DNA.
Esta molécula atravessa a membrana
celular sem a danificar, e é usada
para visualizar os nú
núcleos em células mortas ou vivas.
Em microscopia de fluorecência a molécula
de DAPI é excitada com radiaçã
radiação ultravioleta e emite
radiaçãão na zona do azul.
radiaç
Marcação de núcleos de célulascélulas-linha e
visualização
Observação de células marcadas com DAPI ao microscópio de
fluerescência. Em cima uma montagem (merged) e em baixo
apenas a imagem dos núcleu coloridos com DAPI.
Observação de células marcadas com DAPI ao microscópio de
fluerescência. Em cima uma montagem (merged) e em baixo
apenas a imagem das células em microscópio óptico.
Transfecção
Processo em que se adicionam nanopartículas
magnéticas (óxido de ferro) ao DNA, a introduzir
na célula. Esta mistura é adicionada às células e
a placa é colocada sobre ímans que permitem
que as nanopartículas e o DNA penetrem nas
células.
Resultados
O gene da GFP produz a proteína que é fluorescente (verde)
Extracção de Ficocianina
Spirulina --- Um tipo de cianobactérias
unicelulares, coloniais ou filamentosas.
Ficocianina --- Proteína solúvel em água, estável
à temperatura ambiente, de cor azul e
fluorescente.
Radiação incidente----------- Verde
Radiação emitida---------Vermelha
Espectrofotometria
ESPECTRO DE ABSORÇÃO DA FICOCIANINA
ABSORVÂNCIA
0.114
0.10
0.08
0.06
0.04
A 0.02
0.00
-0.02
-0.04
-0.056
400.0
450
500
550
600
nm
650
COMPRIMENTO DE ONDA
700
750
800.0
Procedimento
Junte 5ml de
fosfato de sódio
0.1M (pH=7)
Junte 5ml de
água destilada
Junte 5ml de
acetona
Junte 5ml de
uma solução com
detergente
Junte 5ml de
HCL 1M
Junte 5ml de
tampão fosfato
de sódio e
coloque o tubo
num copo com
água em ebulição
Qual a cor da
solução?
A solução fica
turva ou límpida?
A solução emite
fluorescência
vermelha?
A proteina está
desnaturada?
Azul Claro
Límpida
Sim
Não
Azul Claro
Límpida
Sim
Não
Esbranquiçada
Turva
Não
Sim
Transparente
Límpida
Não
Sim
Azul Claro
Límpida
Não
Sim
Transprente
Límpida
Não
Sim
Esferas de Alginato