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Método de Ensaio - MET
Depressão do Ponto de Congelamento do Leite Fluido
1. Escopo
Este método tem por objetivo determinar os procedimentos para o ensaio “Depressão do
Ponto de Congelamento do Leite Fluido”. É aplicável para leite fluido in natura ou nas
apresentações integrais, semidesnatadas e desnatadas, tratadas por processos de UHT ou
pasteurização.
O índice crioscópico é a medida do ponto de congelamento ou da depressão do ponto de
congelamento (DPC) do leite em relação ao da água. É uma prova utilizada principalmente para
se detectar fraude por adição de água ao leite. A temperatura de congelamento do leite é mais
baixa do que a da água devido ao efeito das substâncias que nele estão dissolvidas. A adição
de água altera o índice crioscópico, fazendo com que o mesmo se aproxime de zero (ponto de
congelamento da água), porque se diluem as concentrações dos componentes que estão em
solução, principalmente a lactose e sais minerais.
O ponto de congelamento do leite é praticamente constante, embora a concentração dos
constituintes solúveis possa variar substancialmente. Pode apresentar pequenas variações de
acordo com: período de lactação, estação do ano, clima, alimentação, raça, doenças dos
animais e processamento do leite (pasteurização ou esterilização).
2. Fundamentos
A determinação do índice crioscópico consiste no super resfriamento de uma alíquota de 2,5
mL de leite até -3ºC, seguido de uma imediata cristalização desta amostra, induzida por
vibração mecânica. Isto produz uma elevação rápida de temperatura da amostra de leite, com
conseqüente liberação de calor de fusão até alcançar o “plateau” que corresponde ao índice
de crioscopia da amostra ou ao ponto de equilíbrio entre os estados líquido e de
congelamento.
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Depressão do Ponto de Congelamento do Leite Fluido
Figura I - Curva Característica do índice crioscópico do leite
O equipamento fornece o índice crioscópico na escala Hortvet (º H). Internacionalmente, se
adota expressar os resultados nesta escala.
Equivalência entre as escalas Hortvet (° H) e Celsius (° C)
T(° C) = 0,9656 x T(° H)
T(° H) = 1,0356 x T(° C)
3. Reagentes, padrões e materiais
3.1 Reagentes
• Solução refrigerante: etilenoglicol 70%.
3.2 Padrões
É necessário utilizar soluções padrões com ponto de congelamento conhecidos para ajuste do
crioscópio.
• Soluções de cloreto de sódio (NaCl) a 0,8646 % (m/v) (ponto de congelamento de -0,530º
H ou -0,512º C) e a 1,0155 %(m/v) (ponto de congelamento de -0,621º H ou -0,600º C):
secar o cloreto de sódio p.a em forno mufla a 300° C por 5 horas ou em estufa a 130° C
por 24 horas, esfriar em dessecador e pesar, exata e rapidamente 8,646 g (para a solução
0,8646%) e 10,155 g do sal (para a solução 1,0155%). Dissolver e transferir para balões de
1000 mL, completando o volume com água fervida e resfriada a 20° C. Estocar as soluções
em frasco plástico rígido, com tampa interna de pressão e externa rosqueável. Conservar
em geladeira.
• Água destilada (0,000º H)
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3.3 Materiais
• Pipeta graduada de 5 mL ou material volumétrico similar;
• Cubeta de vidro.
4. Equipamentos
Crioscópio eletrônico.
5. Precauções analíticas
Seguir atentamente as instruções do fabricante do crioscópio, especialmente no que se
referir ao banho de refrigeração, o agitador e o procedimento de ajuste com as soluções
padrões -0,530º H e -0,621º H.
Realizar as leituras com os padrões na mesma temperatura das amostras.
A lavagem da vidraria utilizada no ensaio é fundamental, pois quando a mesma apresenta
resquícios de detergente, os resultados obtidos são discrepantes.
6. Procedimentos
Pipetar 2,5 mL da amostra de leite para a cubeta (ensaio em duplicata). Repetir o mesmo
procedimento para cada padrão e para água destilada (triplicata dos tubos) – conforme
tabela abaixo. Colocar as cubetas na geladeira por aproximadamente 1 hora para que todas
fiquem na mesma temperatura.
Leite fluido (UHT, pasteurizado e cru)
Água
(0,000º H)
Padrão
(-0,530º H)
Padrão
(-0,621º H)
Cubeta 1
Cubeta 1
Cubeta 1
Cubeta 2
Cubeta 2
Cubeta 2
Cubeta 3
Cubeta 3
Cubeta 3
Cubeta 1
Cubeta 2
Realizar o seguinte procedimento:
(1) Começar a verificação do equipamento com o 1º tubo de água destilada. Se a leitura for
adequada, isto é, 0,000 ± 2 miligraus, passar para o próximo passo. Caso contrário, repetir a
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leitura com a 2º cubeta e assim por diante. Pode ser necessário realizar o ajuste. Neste
caso, registrar a leitura no campo adequado.
(2) Fazer a verificação do equipamento com a 1º cubeta da solução padrão -0,621º H. Se a
leitura for adequada, passar para o próximo passo. Caso contrário, repetir a leitura com a 2º
cubeta e assim por diante. Se o analista fizer o ajuste, registrar a leitura no campo
específico.
(3) Conferir a leitura com o padrão intermediário -0,530º H. Caso a leitura seja adequada,
realizar o ensaio com as amostras. Caso contrário, repetir os procedimentos de verificação e
ajuste com água destilada e solução padrão -0621º H.
Nota: para obter um teste satisfatório é necessário que os resultados sejam próximos, com
uma tolerância de mais ou menos 2 miligraus (± 0,002° H).
Exemplo: 1º cubeta solução -0,621º H → leitura = -0,624º H
Neste caso, temos uma diferença maior do que 0,002º H do valor esperado, logo, teremos
que realizar mais uma leitura (2º cubeta). Se a próxima leitura for inadequada, teremos que
realizar o ajuste. Se a leitura do segundo tubo for satisfatória, o ajuste não é necessário.
O procedimento de uso do crioscópio é descrito na IU POA/12 - Crioscópio Eletrônico ITR
MK 540. Registrar as leituras do índice crioscópico da água e padrões (0,530° H e -0,621ºH)
no formulário do anexo A deste MET.
Após cada leitura, limpar cuidadosamente o sensor e o agitador com água e secar
delicadamente com papel absorvente fino.
6.1. Preenchimento do formulário do anexo A
Preencher os seguintes dados:
a) Cabeçalho:
• Registrar a numeração da página, o ano de referência e o número de equipamento. A
numeração da página recomeça em cada novo ano.
b) Conteúdo do formulário:
• Data de uso do crioscópio (dia e mês);
• Identificação das soluções refrigerante, solução -0,621ºH e -0,530º H e conforme POP
POA/01 – Controle de Soluções. No caso da água, registrar a data da destilação.
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• Anotar as leituras obtidas para água, solução padrão -0,621º H e -0,530º H;
• Se necessário realizar ajuste, anotar as leituras das mesmas soluções obtidas após o
ajuste.
• Analista responsável pela “calibração” e ajuste do equipamento.
• Utilizar o campo observações para o registro de alguma informação relevante que
julgar necessária.
• Registrar o nome do responsável pela verificação e data.
7. Resultados
Os dados brutos obtidos na análise da depressão do ponto de congelamento são registrados
no formulário “Dados brutos da análise de leite” – anexo N POP POA/06/02 (versão atual) e
inseridos na planilha eletrônica IT POA/04 para que o resultado seja calculado
automaticamente.
Fazer a média aritmética das leituras das amostras (considerar apenas as leituras dentro
dos limites de tolerância de mais ou menos 2 miligraus). Expressar os resultados com três
casas decimais.
DPC= media das leituras (ºH)
Onde:
DPC é depressão do ponto de congelamento
O ponto de congelamento máximo aceito pela legislação brasileira é -0,530º H, equivalente a
-0,512o C para o leite de vaca e entre -0,550 a 0,585º H para o leite de cabra.
8. Arquivamento dos registros
O formulário “Dados brutos de análise de leite” é arquivados na pasta Dados brutos da análise
de leite do ano vigente juntamente com o formulário “Cálculos Leite ___” da IT POA/04.
O anexo A é arquivado na pasta Controle de Equipamentos, na subdivisão Verificação do
Crioscópio.
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9. Referências
BRASIL. Ministério da Agricultura. Secretaria de Defesa Agropecuária. Regulamento
Técnico de Identidade e Qualidade de Leite de Cabra. Instrução Normativa 37, 31/10/00.
Brasília: Ministério da Agricultura, 2000.
BRASIL. Ministério da Agricultura. Regulamentos Técnicos de Produção, Identidade e
Qualidade do Leite. Instrução Normativa 51, 18/09/02. Brasília: Ministério da Agricultura,
2002.
BRASIL. Ministério da Agricultura. Secretaria de Defesa Agropecuária. Métodos Analíticos
Físico-Químicos para Controle de Leite e Produtos Lácteos. Instrução Normativa 68,
12/12/06. Brasília: Ministério da Agricultura, 2006.
10. Anexos
Anexo A MET POA/08/01 – Formulário “Verificação e Ajuste do Crioscópio nº POA/____”.
11. Alterações
Não aplicável.
12. Responsabilidades
É de responsabilidade do RT ou seu substituto do POA assegurar que os analistas que
utilizarem este MET tenham sido treinados e capacitados para sua execução e o mesmo esteja
sendo corretamente seguido.
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Elaboração/Revisão:
Aprovação:
Rita Beatriz Andrade
Tiago Charão de Oliveira
Data: 31/08/2011
Data: 13/09/2011
Verificação:
Eliana Menezes - UGQ
Data: 04/10/2011