ESTUDO FITOQUÍMICO DA ESPÉCIE VEGETAL Swietenia macrophylla
Wannigleice de Sousa AMORIM (IC)1; Luziane da Cunha BORGES (IC) 1; Geyse do Carmo Diniz
SAMPAIO (PG) 2; Sonia das Graças Santa Rosa PAMPLONA (PG) 2; Milton Nascimento da SILVA (PQ)3
1
Universidade Federal do Pará/Faculdade de Química/Química Industrial, (Bolsistas PIBIC/CNPq),
[email protected]
2
Universidade Federal do Pará/Faculdade de Química/Pós-graduação em Química,
3
Universidade Federal do Pará/Faculdade de Química/Pesquisador-CNPq/UFPA, Orientador,
[email protected]
1- RESUMO Dentre as espécies constituintes da flora Amazônica, o mogno é uma das mais
importantes por apresentar substâncias que tem provocado um interesse comercial considerável
devido às suas atividades antiparasitária, inseticida, antifúngica, etc. Considerando as atividades
em questão, o projeto propôs realizar um estudo fitoquímico das folhas da planta. A coleta foi
realizada em São Francisco do Pará, o material foi seco, triturado, macerado com hexano em duas
bateladas de 24 horas, concentrado em evaporador rotativo e submetido à Cromatografia em Coluna
de sílica por via úmida do extrato hexânico. Com isso identificou-se a fração rica em limonóides.
Para essa fração iniciou-se o desenvolvimento do método para isolamento via HPLC.
Palavras chave: Meliaceae, limonoides, HPLC.
2- INTRODUÇÃO
O Brasil é uma das maiores reservas de vegetais do planeta com cerca de 55.000
espécies (BEGLEY, 1996), sendo que milhares delas possuem propriedades medicinais,
porém muitas dessas plantas ainda têm o seu uso difundido apenas com base em
observações, pelo uso que a população nativa sempre fez delas (etnofarmacologia), sem
se conhecer, contudo, a natureza química das substâncias bioativas.
A família Meliaceae é caracterizada pela presença de substâncias conhecidas como
limonoides, metabólitos que apresentam uma gama de atividades biológicas,
principalmente inseticidas, inclui espécies de grande interesse agronômico, ecológico,
econômico e ornamental de alto potencial madeireiro no mundo. No Brasil ocorrem cerca
de 51 gêneros e aproximadamente 1400 espécies de plantas lenhosas distribuídas nos
trópicos e subtrópicos de ambos os hemisférios (BANEJI, 1984). Os gêneros que mais
se destacam no Brasil por apresentar interesse econômico são as seguintes: Carapa,
Cedrela e Swietenia, com destaque para as espécies Carapa guianensis, Cedrela odorata
e Swietenia macrophylla (RIZZINI, 1971). As plantas pertencentes a essa família
1
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destacam-se pela sua composição química semelhante, contendo compostos com várias
atividades biológicas, dentre as quais, a principal é a de ação contra os insetos
(CHAMPAGNE et al., 1992). A espécie S. macrophylla, conhecida popularmente como
mogno é uma das mais importantes para o mercado madeireiro mundial e contribui
sozinha com 10% do total exportado pela região amazônica (LENTINI, 2005). Dentre as
áreas de ocorrência de mogno, o sul do Pará apresenta a maior concentração, sendo este
o maior exportador mundial de mogno (VERÍSSIMO, 1995). O mogno, o ouro verde da
Amazônia, é a madeira amazônica de maior valor comercial.
3- OBJETIVOS
3-1- Geral
 Obter quantidades suficientes de substâncias da classe dos limonoides, a partir do
extrato hexânico das folhas de S. macrophylla.
3-2- Específicos
 Isolar e identificar os limonoides presentes no extrato hexânico das folhas de
S.macrophylla, utilizando técnicas cromatográficas clássicas e de Cromatografia
Líquida de Alta Eficiência no modo preparativo;
 Avaliar a atividade biológica das frações obtidas de S. macrophylla.
4- MATERIAIS E MÉTODOS
 Balança analítica SHIMADZU, AY220;
 Becker, Erlermeyer, Pipeta;
 Percolador;
 Evaporador Rotativo;
 Solventes TEDIA: Hexano, Metanol, Acetonitrila e Tetrahidrofurano, todos ACS;
 Papel de filtro analítico;
 Cromatógrafo Líquido Shimadzu LC-20 (analítico) e LC-6 (preparativo).
5- PREPARO DO EXTRATO HEXÂNICO
2
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As folhas foram coletadas em São Francisco do Pará. As mesmas foram colocadas
para secar em estufa de circulação de ar a 45ºC por cinco dias, em seguida foram trituradas
em um liquidificador, totalizando 2,793 Kg de material botânico seco e triturado. Em
seguida foi colocado o material seco e moído no percolador por 24 horas, submetido a
duas extrações, por maceração, com hexano (4Lx2), seguido de filtração e evaporação do
solvente em evaporador rotativo. Obteve-se 44,5312 g de extrato hexânico bruto na
primeira batelada e na segunda batelada só a metade do recolhido foi concentrada, pois,
houve problemas na refrigeração dos evaporadores por isso deu um rendimento de
28,1635 g, totalizando assim 72,6947g. A partir desse extrato foram isolados os
limonóides, utilizando o método de isolamento por cromatografia em coluna via úmida
(CCVU) e assim obtida a fração rica em limonóides, a qual foi usada para realizar os
testes de atividade biológica.
Para o isolamento das substâncias, foram pesados 72,4 g do extrato hexânico de
S. macrophylla e submetida ao fracionamento por cromatografia em coluna de sílica gel,
na mesma utilizou-se 360g de sílica, para uma altura de 19,5cm com diâmetro de 7cm. A
fase móvel foi constituída por hexano (HEX), acetato de etila (AcOEt) e metanol
(MeOH), empregados em modo crescente de polaridade, iniciando com um sistema de
Hex/AcOEt (90:10v/v) (1), Hex/AcOEt (70:30v/v) (2), Hex/AcOEt (50:50v/v) (3),
AcOEt 100% (4), AcOEt/ MeOH (80:20v/v) (5), MeOH 100% (6). De acordo com a
figura abaixo.
Folhas de S. macrophylla
M= 72,4 g
Hex/AcOEt 10%
(1)
Hex/AcOEt 30%
(2)
Rendimento:
22,4361 g
Rendimento:
22,6981 g
AcOEt 100% (4)
AcOEt/MeOH
20% (5)
Rendimento:
11,3464 g
Rendimento:
0,7916 g
Hex/AcOEt 50%
(3)
Rendimento:
14,2948 g
MeOH 100% (6)
Rendimento:
0,8545 g
3
693
As frações 3, 4 e 5 foram analisadas por HPLC e a fração escolhida para dar
prosseguimento ao trabalho foi a fração AcOEt 100% (4), devido a presença dos
limonóides de interesse. A fração AcOEt 100% com um rendimento de 11,3464 g, foi
submetida a um refracionamento por cromatografia em coluna de sílica gel, usando
hexano e acetato de etila como eluentes. Deste processo obteve-se 28 subfrações, de
Hex/AcOEt (70:30v/v) a AcOEt 100% das quais as subfrações 2 e 3 foram descartadas,
de 4 a 17 foram reunidas de 18 a 23 também reunidas, e o restante continuou em frascos
separados. Foram feitas análises por HPLC analítico nas subfrações 18 à 29, em coluna
Gemini C18, (250x4.60mm, 5μm, 110Å), nos seguintes sistemas: H2O:MeOH:THF
23,6:73,2:3,2 e H2O/ACN (40:60v/v), com comprimento de onda em 215nm. Conforme
demonstrado na figura abaixo. Após estas análises as subfrações foram, em sua maioria,
reisoladas separadamente.
AcOEt 100%
subfrações 2 e 3
descartadas
subfrações 4 à 17
rendimento: 26,3 g
rendimento: 442,5mg
subfração 18 à 23
reunidas
rendimento:2990mg
reunidas
subfração 24
rendimento:63,7mg
subfração 25
subfração 26
subfração 27
subfração 28
subfração 29
rendimento:379,4mg
rendimento:1,0055g
rendimento:1277,7g
rendimento:1974,9g
rendimento:1374,2g
A técnica de escolha para o pré-tratamento das frações foi a Extração por Fase
Sólida (SPE). O método utilizado consistiu em um cartucho C18 previamente
condicionado com 1,0 mL de acetonitrila e 1,0 mL de água ultra pura, depois, a este foi
adicionada uma alíquota de 10 mg do extrato dissolvidos em uma solução de 800 µL de
ACN sonicado por um minuto e mais 200 µL de H2O sonicado também por um minuto
(20:80), os analitos de interesse eluiram com a solução, quanto aos interferentes,
permaneceram retidos na C18. Após ter sido submetida ao cartucho, preparou-se uma
solução de 100 ppm, a partir de 1,0 mg de amostra solubilizada em 10 mL de ACN. Desta
4
694
solução foram injetados 20 µL em um cromatógrafo líquido para se dar início ao
desenvolvimento do método de isolamento dos limonoides por HPLC.
6- RESULTADOS E DISCUSSÕES
Na investigação química das folhas de Swietenia macrophylla foram isoladas duas
substâncias, sendo que as mesmas já são conhecidas. As substancias L1 e L2 foram
isoladas e tiveram suas estruturas elucidadas através de técnicas espectrométricas uni e
bidimensionais. Abaixo encontra-se o cromatograma da fração rica em limonóides
(AcOEt 100%).
CROMATOGRAMA DA FRAÇÃO AcOEt 100%
m AU
3 5.0 Ch1-220nm,4nm
(1.00)
3 2.5
3 0.0
2 7.5
2 5.0
2 2.5
2 0.0
1 7.5
1 5.0
1 2.5
1 0.0
7 .5
5 .0
2 .5
0 .0
-2.5
-5.0
0 .0
2 .5
5 .0
7 .5
1 0.0
1 2.5
1 5.0
1 7.5
2 0.0
2 2.5
2 5.0
2 7.5
m in
H2O:ACN 40:60 , Shim-pack (250 x 21,2 mm, 5 μm, 110 Å), comp. de onda 215 nm.
CROMATOGRAMAS DAS SUBSTANCIAS E SUAS RESPECTIVAS ESTRUTURAS
mAU
Ch1-220nm,4nm (1.00)
95
90
85
80
75
L1
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
-5
-10
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
20.0
22.5
25.0
27.5
30.0
32.5
min
5
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mAU
Ch1-220nm,4nm (1.00)
95
90
85
80
75
70
L2
65
60
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
-5
-10
0.0
2.5
5.0
7.5
10.0
12.5
15.0
17.5
20.0
22.5
25.0
min
7- CONCLUSÃO
O extrato hexânico contém as substâncias de interesse (limonóides) que são o objeto de
estudo deste trabalho, o objetivo do mesmo de isolar em maior quantidade os limonóides já
conhecidos foi alcançado.
8- REFERÊNCIAS BIBLIOGRAFICAS
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