USO DE CLAE PARA ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE PRODUTOS NATURAIS
Inaiara Casapula (PIBIC/ CNPQ)
Germana Dávila dos Santos (PG)
Profa Beatriz Helena L.N.Sales Maia
Introdução
A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) é uma técnica
amplamente utilizada na área de produtos naturais, tanto no
isolamento dos metabólitos secundários em extratos vegetais, como
na identificação e quantificação desses compostos isolados em
outros extratos vegetais. Este trabalho utilizou a técnica de CLAE
para identificação e quantificação de compostos isolados de
Lonchocarpus filipes e identicação de padrões de Schinus
terebinthifolius, em seus respectivos extratos vegetais e suas
frações.
Obteve-se em cada curva um R2 de 0,9979 para LF-1 e 0,9999 para LF-8,
quantificando no extrato de raízes de L. filipes as massas de 13,62 mg de LF1 e 2,16mg de LF-8 em 100mg do extrato.
A espécie S. terebinthifolius apresenta atividade antimicrobiana e análise por
CLAE das frações (1-5) do extrato metanólico das folhas da planta em
ambiente natural e em condições axênicas foram realizadas comparando
com padrões isolados da planta (ácido gálico, galato de metila, galato de
etila, quercetina e catequina). Análises dos padrões e das frações realizadas
obteve-se o seguinte cromatograma:
Metodologia
Figura
1.
Cromatograma
do
Galato
de
metila,
fração 4, Extrato bruto
e extrato de planta
axenica.
da
identificação do galato
de metila, em 254nm
O extrato diclorometânico e os flavonoides de L. filipes, e os
extratos, frações e padrões de S. terebinthifolius, foram analisados
por CLAE-DAD ( Waters) em uma coluna RP-18 X-Terra, 5µm
(250 mm x 4,6 mm), utilizando MeOH, ACN ( grau CLAE) e água
miliQ como solventes. Para a espécie L. filipes as análises das
frações foram realizadas na condição gradiente ACN:H2O 5:95 a
100:0 em 60 min., fluxo 1 mL.min-1, para a espécie S.
terebinthifolius, as análises se deram em condição gradiente de
5:95 MeOH:H2O a 100:0 em um fluxo de 0,8 mL min¹.
Resultados e discussão
Na espécie L. filipes, iniciou-se a identificação de 4 frações
purificadas do extrato das raízes, após a identificação procedeu-se
com a quantificação no extrato das raízes, mas apenas 2
flavonoides (LF-1 e LF-8) obtiveram pureza de pico suficiente para
obtenção da curva de calibração. Para a curva de calibração utilizou
se padrão externo, com construção de suas respectivas curvas de
calibração em função da área média do pico x da concentração
injetada, nas mesmas condições utilizadas para a análise do extrato
das raízes. Uma solução estoque de 1,0mg.mL-1 de cada padrão, foi
preparada e solubilizada em acetonitrila. Solução padrão cobrindo o
espaço linear em 6 níveis de concentração ( 0,01; 0,05; 0,010; 0,25;
0,50 e 1,00 mg mL-1) foram preparadas a partir da solução estoque
e o volume final ajustado para 1 mL, em triplicata.
Usando como comparativo o tempo de retenção e o espectro no ultravioleta.
Os resultados evidenciaram que apenas o galato de metila estava presente
tanto nas frações 4 e 5 como no extrato da planta axênica, e que estas
amostras foram as que apresentaram maior atividade biológica.
Conclusão
A metodologia utilizada para a identificação e quantificação das substâncias
mostrou-se adequada, com resolução suficiente para a quantificação no
extrato de raízes e identificação no extrato de folhas de L. filipes, e
identificação do galato de metila nos extratos e frações de extratos de S.
terebinthifolius.
MALDANER, L, JARDIM, I. C. S. F. O estado da arte da cromatografia líquida de ultra
eficiência. Química Nova, SP, Brasil, v. 32, n. 1, p. 214-222, 2009