DETERMINAÇÃO DE RETINOL POR CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIACLAE EM MOZZARELLA DE BÚFALA DETERMINATION OF RETINOL FOR HIGH-PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHYHPLC IN MOZZARELLA OF BUFFALO Sabrina da Silva Dias1, Ronoel Luiz de Oliveira Godoy2, Rosana Colatino Soares Reis3, Sidney Pacheco2 1. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Departamento de Tecnologia de Alimentos. UFRRJ, email: [email protected] 2. Embrapa Agroindústria de Alimentos - CTAA. Palavras-chave: Vitamina A, fonte alimentar, leite de búfala Introdução A vitamina A possui papel essencial em inúmeras funções do organismo como visão, crescimento, desenvolvimento embrionário, e funções imunológicas (TIETZ, 2008). As fontes dietéticas de vitamina A podem ser o retinol e alguns carotenóides. O retinol só pode ser encontrado em tecidos animais, tendo como fontes principais, o fígado, óleo de fígado de peixes, leites integrais e derivados, ovos e carne de aves. Os carotenóides com atividade de pró-vitamina A são, por exemplo, α-caroteno, β-caroteno, β-criptoxantina, encontrados em vegetais e frutas alaranjados (OLSON, 1988; CHAGAS et al, 2003). O leite de búfala possui um alto valor nutritivo e é uma excelente matéria-prima para o preparo de produtos lácteos. O produto apresenta maiores teores de gordura, proteína, extrato seco total e alguns minerais, em relação ao leite bovino. Uma das características dos derivados e do leite de búfala é a sua coloração branca, fato que ocorre devido à ausência de pigmentos carotenóides que são responsáveis pela coloração amarela nos produtos elaborados com o leite de vaca. No leite de búfala ocorre a presença apenas de retinol substância que se apresenta incolor (VERRUMA e SALGADO, 1994; AMARAL et al, 2005). Objetivos O trabalho tem como objetivo determinar a quantidade de retinol, por cromatografia líquida de alta eficiência - CLAE, em queijo mozzarella. Material e métodos Foram pesados em balança analítica 20g de mussarela de leite de búfala e colocados sob aquecimento em banho-maria a 40oC por 30 minutos a 80rpm. Após aquecimento foram adicionados 50mL de solução saponificante de KOH a 20% (p/v) e pirogalol a 1% (p/v) em metanol, que reagiu por 3 horas protegido de luz (CAMPOS, 2005). Posteriormente a saponificação, a re-extração do retinol foi obtida com 100 mL de solução de éter etílico em éter de petróleo a 20% (v/v). As análises cromatográficas foram realizadas em cromatógrafo modular, com injetor automático W-717, bomba analítica W-600, detector de arranjo de fotodiodos 996, todos os equipamentos da marca Waters ®. As condições cromatográfica utilizadas foram coluna cromatográfica YMC®C30 Carotenoid (250x4,6mm x 3µm), a temperatura de 33ºC, fluxo de 0,8mL/minuto, volume injetado de 15µL, com tempo de análise de 28 minutos, gradiente de éter metil terc-butílico: metanol variando de 20 a 90% e para a quantificação espectrofotômetro modelo UV – 1800 – Shimadzu. Resultados e discussão As amostras foram quantificadas utilizando a curva de calibração elaborada com retinol isolado de fígado bovino. Os resultados foram analisados em espectrofotômetro a 325nm. Para identificação das substâncias foram levados em consideração o tempo de retenção da 323,2 nm 323,2 0,010 AU 0,010 Retinol substância e o espectro na região de ultravioleta característico de cada substância, como representado na figura 1. 0,005 300,00 AU 521,9 410,5 434,6453,9470,9 0,000 350,00 400,00 450,00 500,00 552,3 550,00 598,7 600,00 nm 0,005 0,000 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 Minutes Figura 1: Cromatograma e espectro na região de absorção do retinol extraído de mozzarella de búfala A concentração de retinol nos queijos bubalinos variou entre 24,12µg/100g e 38,40µg/100g. Na literatura pode-se encontrar a concentração de retinol em leite humano, caprino e bovino. Segundo Melo (2005) a quantidade de retinol em leite caprino variando entre 23,1µg/100mL a 40,5µg/100mL,. Soares et al (2008) analisando leite bovino observou variação de 22,7µg/dL a 44,1µg/dL e Bianchini e Penteado (1999) encontrou valores entre 21,25µg/100g a 36,25µg/100g. Segundo o Food and Nutrition Board, (2001), a recomendação diária de consumo (RDA) para recém nascidos é de 400 µg/dia de retinol, para crianças de 0,5 a 13 anos de 500 a 600 µg/dia de retinol, para mulheres e homens até 51 anos ou mais de 500 a 700µg/dia de retinol. Dessa forma, a incorporação dos derivados bubalinos poderia auxiliar na diversificação dos produtos com maior concentração dessa vitamina, evitando a monotonia alimentar. Conclusão De acordo com os resultados analisados, o queijo mussarela elaborado com leite de búfala poderia ser uma boa fonte alimentar de retinol, sendo uma alternativa no processo de recuperação da hipovitaminose A. Referências AMARAL, F.R.; CARVALHO,L.B.; SILVA, N.da; BRITO,J.R.F. Qualidade do leite de búfalas: composição. Revista Brasileira de Reprodução Animal. Belo Horizonte. V.29,n.2,p.106-110,2005. BIANCHINI, R.; PENTEADO, M.D.V.C. Teores de retinol, β-caroteno e -tocoferol em leites bovinos comercializados na cidade de São Paulo. 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